全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2010，25(1)∶074 ～ 075
含量能反映槐角中总的山柰酚苷的含量，更能反映
槐角的内在质量。
参考文献:
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收稿日期:2009 － 03 － 18
作者简介:薛敬(1982—) ，女，正攻读药物分析专业的硕士学位。Email:hbxuejing@ 126. com
HPLC测定细叶亚菊中的绿原酸
薛 敬，卢永昌，薛 楠
(青海民族学院化学系，青海 西宁 810007)
摘要:目的 采用 HPLC测定细叶亚菊中的绿原酸含量。方法 采用 Hypersil ODS － 2 柱(250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ，流动相
为甲醇 －含 0. 04%磷酸的水溶液(19∶81) ，流速 1 mL·min －1，检测波长 328 nm，柱温 30 ℃。结果 绿原酸进样量的线性范
围为 0. 0306 ～ 1. 530 μg，与峰面积呈良好的线性关系(r = 0. 9999) ，平均回收率为 99. 7%，RSD = 2. 6%(n = 5) ，细叶亚菊中绿
原酸的含量为 9. 457 mg·g －1。结论 所建方法快速、简便、准确、重复性好，绿原酸可作为细叶亚菊的质量控制指标。
关键词:高效液相色谱法;细叶亚菊;绿原酸;含量测定
中图分类号:R917 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2010)01 － 0074 － 02
Determination of chlorogenic acid in Ajania tenuifolia by HPLC
XUE Jing，LU Yong － chang，XUE Nan
(Department of Chemistry，Qinghai University for Nationalities，Xining，Qinghai，810007 P. R. China)
Abstract:OBJECTIVE To establish an HPLC method for the determination of chlorogenic acid in Ajania tenuifolia.METHODS
The sample was separated on column of Hypersil ODS － 2(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)which eluted with a mixture of 19% of methanol
and 81% of water (containing 0. 04% phosphoric acid). The flow rate was 1mL·min －1 . The detective wavelength was at 328 nm and
the column temperature was 30 ℃ . RESULTS The peak area and concentration of chlorogenic acid showed a good linear relationship
within the ranges of 0. 0306 － 1. 530 μg with r of 0. 9999 and the average recovery rate was 99. 7% with RSD of 2. 6%(n = 5). The
content of chlorogenic acid in Ajania tenuifolia was 9. 457 mg·g －1 . CONCLUTION The method is rapid，simple，accurate and
reproducible. Chlorogenic acid as a probe component can be used for the quality control of Ajania tenuifolia.
Key words:HPLC;Ajania tenuifolia;Chlorogenic acid;Content determination
CLC number:R917 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2010)01 － 0074 － 02
细叶亚菊 Ajania tenuifolia(Jacq.)Tzvel.为菊科
多年生草本植物，广泛分布于青海、西藏、四川、甘肃
等省区海拔 2. 0 ～ 3. 8 km的草坡，为藏医常用草药，
其叶片白而油润，花朵黄色且味香，植株铺地成簇状
生长［1］。细叶亚菊味苦、性温而平，具有止血、消散
四肢肿胀等功效，尤其对疮伤、肾病有益。细叶亚菊
的质量控制以传统的性状和显微鉴别确定真伪，无
含量测定控制项［2］。绿原酸是细叶亚菊的主要药
用成分，具有清热解毒、抗菌消炎的作用［3 － 6］。为有
效控制药材的质量，现采用 HPLC 法测定细叶亚菊
中的绿原酸，方法简便、准确，适用于细叶亚菊的质
量分析，还可供细叶亚菊制剂借鉴。
1 实验部分
1. 1 仪器与材料
1100 高效液相色谱系统 (美国 Agilent) ;
KQ3200B超声波清洗器(昆仑超声仪器有限公司) ;
FZ102 微型植物试样粉碎机(天津市泰斯特仪器有
限公司)。绿原酸对照品(中国药品生物制品检定
所，批号:110753 － 200413) ;细叶亚菊样品于 2008
DOI:10.13375/j.cnki.wcjps.2010.01.029
年 8 月采自青海省互助北山林场，由中国科学院西
北高原生物研究所孙洪发研究员鉴定，样品阴干后
粉碎过 80 目筛，冷藏保存;甲醇为色谱纯;水为三重
蒸水;磷酸为分析纯。
1. 2 方法与结果
1. 2. 1 色谱条件 色谱柱为 Hypersil ODS － 2 柱
(250 mm ×4. 6 mm，5 μm) ，流动相用为醇 －0. 04%磷
酸的水溶液(19∶81) ，流速 1 mL·min －1，检测波长
328 nm，柱温 30 ℃，进样量 5 μL。该色谱条件下绿原
酸被洗脱且达到基线分离，tR =13. 57 min(图 1)。
t/min
0 5 10 15 0 5 10 15
ch
lo
ro
ge
ni
c
ac
id
ch
lo
ro
ge
ni
c
ac
id
A B
图 1 对照品(A)和样品(B)溶液的色谱图
Fig 1 Chromatograms of control solution(A)and sample solution(B)
1. 2. 2 溶液的配制 精密称取 0. 306 mg 绿原酸对
照品，置 1 mL 量瓶中，以甲醇定容，配成对照品溶
液。精密称取 0. 50 g 细叶亚菊样品粉末，加入 60
mL 75%的甲醇，超声提取 1. 5 h，抽滤，滤液浓缩后
定容至 50 mL量瓶中，过 0. 45 μm 滤膜，即得样品
溶液。
1. 2. 3 线性关系 精密量取绿原酸对照品溶液适
量，用甲醇准确稀释成 6. 12、30. 60、61. 20、122. 40、
183. 60、244. 80、306. 00 mg·L －1的系列对照品稀释
液，取各稀释液进样 5 μL，记录峰面积。以峰面积
为纵坐标、进样量(μg)为横坐标，求得绿原酸的回
归方程为:Y = 1. 592 × 103X + 4. 023(r = 0. 9999)。
线性范围为 0. 0306 ～ 1. 5300 μg。当 S /N = 3 时，绿
原酸的检测限为 0. 25 ng。
1. 2. 4 精密度试验 精密吸取 30. 60 mg·L －1的绿
原酸对照品稀释液 5 μL，在“1. 2. 1”项色谱条件下
重复进样 5 次，记录峰面积，计算 RSD = 0. 71%(n =
5) ，表明仪器精密度良好。
1. 2. 5 重复性实验 精密称取 0. 50 g 细叶亚菊样
品共 5 份，分别按“1. 2. 2”项下方法制备成样品溶
液，然后在“1. 2. 1”色谱条件下测定绿原酸的含量，
计算得 RSD = 1. 2%(n = 5) ，表明方法重复性良好。
1. 2. 6 稳定性试验 取新配制的样品溶液，分别在
0、2、4、6、8 h时进样，测定绿原酸的峰面积，计算得
RSD = 1. 1%(n = 5) ，表明样品溶液在 8 h内稳定。
1. 2. 7 回收率试验 精密称取已测知含量的细叶
亚菊 0. 50 g共 5 份，添加 30. 60 g·L －1绿原酸对照品
稀释液 10 μL，按“1. 2. 2”项下方法操作，测得绿原
酸的平均回收率为 99. 7%，RSD = 2. 6%(n = 5)。
1. 2. 8 样品的测定 取“1. 2. 2”项下制备的样品
溶液，按“1. 2. 1”项条件进行分析，经 DAD 检测器
验证绿原酸的峰纯度后，按外标法以峰面积计算，得
样品中绿原酸的含量为 9. 457 mg·g －1(n = 3)。
2 讨论
利用 DAD检测器在 200 ～ 400 nm 扫描对照品
溶液的吸收光谱，在 328 nm处有最大吸收，因此，选
择该波长为检测波长。绿原酸的色谱峰易拖尾，当
在水中加入 0. 01% ～0. 10%磷酸时，可改善绿原酸
的峰形，故选择甲醇 － 0. 04%的磷酸水溶液(19∶
81)为流动相。
曾考察冷浸、超声和回流对细叶亚菊中绿原酸
含量的影响。结果:超声法提取时间短，提取率最
高。又分别以水、甲醇、乙醇为溶剂，考察不同溶剂
对分析结果的影响，发现甲醇对绿原酸提取率最高。
利用正交试验进一步考察不同浓度甲醇、不同溶剂
量、不同提取时间和提取次数对绿原酸含量的影响，
方差分析结果表明:绿原酸提取率的影响因素依次
为甲醇浓度 >提取时间 >溶剂量 >提取次数。考虑
实际工作的方便、快捷，确定最佳提取方法为 75%
甲醇，溶剂量 60 mL，提取 1. 5 h、1 次。
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收稿日期:2009 － 05 － 20
57第 1 期 薛 敬，等。HPLC测定细叶亚菊中的绿原酸