全 文 ：藏药短管兔耳草中松果菊苷和麦角甾苷的含量测定*
星玉秀1，2，3，胡凤祖1，董琦1，彭敏1＊＊
(1．中国科学院西北高原生物研究所，西宁 810001;2．中国科学院研究生院，北京 100039;
3．青海省公安厅刑警总队刑事科学技术研究管理中心，西宁 810008)
摘要 目的:建立 RP － HPLC法同时测定松果菊苷和麦角甾苷的含量。方法:采用 ZORXDB C18(150 mm × 4. 6 mm，5 μm)色
谱柱，流动相为甲醇 － 0. 1%醋酸水溶液(3∶ 7) ，流速 1. 0 mL·min －1，检测波长 330 nm，柱温 25 ℃，进样量 20 μL。结果:本方
法可在 25 min内完成松果菊苷和麦角甾苷 2 个成分的色谱分析，且两成分色谱峰之间具有良好的分离度，线性范围分别为 25
～ 400 μg·mL －1(r = 0. 9996)和 19. 4 ～ 310 μg·mL －1(r = 0. 9985) ，平均加样回收率(n = 9)分别为 99. 8%和 97. 8%。结论:
以松果菊苷和麦角甾苷为目标成分时，青海省海北州热水地区为短管兔耳草的最佳采收地。该方法灵敏度高、准确、简便、快
速，可用于短管兔耳草的质量控制。
关键词:民族用药;藏药;短管兔耳草;藏黄连;松果菊苷;麦角甾苷;高效液相色谱;质量控制
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254 － 1793(2012)07 － 1183 － 04
Determination of echinacoside and acteoside in
Tibetan herb Lagotis brevituba Maxim*
XING Yu － xiu1，2. 3，HU Feng － zu1，DONG Qi1，PENG Min1＊＊
(1． Northwest Institute of Plateau Biology，Chinese Academy of Sciences，Xining 810001，China;
2． Graduate School of the Chinese Academy of Sciences，Beijing 100039，China;3． Criminal Police Contingent of Qinghai，Xining 810008，China)
Abstract Objective:To develop an RP － HPLC method for the simultaneous determination of echinacoside and
acteoside in Tibetan herb Lagotis brevituba Maxim．Methods:The sample was separated on an ZORXDB C18(150
mm ×4. 6 mm，5 μm)with the mobile phase consisting of methonal － 0. 1% acetic acid water solution(3∶ 7)at the
flow rate of 1. 0 mL·min －1，UV detection wavelength was set at 330 nm，and the column temperature was 25 ℃ ．
Results:Experimental results showed that a good separation of echinacoside and acteoside was achieved in 25 min
by HPLC method ;The method displayed good linearity of echinacoside and acteoside with the correlation coeffi-
cients and linear ranges of 25 － 400 μg·mL －1(r = 0. 9996)and 19. 4 － 310 μg·mL －1(r = 0. 9985) ;The aver-
age recoveries(n = 9)were 99. 8% and 97. 8% ． Conclusion:The best harvest region is Reshui of Haibei，when
echinacoside and acteoside are taken as target components． The method is sensitive，accurate，simple and fast，and
can be used for quality control of Lagotis brevituba Maxim．
Key words:ethnic drug;Tibetan medicine;Lagotis brevituba Maxim;Zanghuanglian;echinacoside;acteoside;
HPLC;quality control
* 科技部青海西宁国家农业科技园区农产品质量控制及服务体系建设项目(2006EA106 － 37)资助
＊＊ 通讯作者 Tel:(0971)8292738;E － mail:pengmin@ nwipb． ac． cn
短管兔耳草(Lagotis brevituba Maxim)又名短筒
兔耳草，藏黄连，为一种传统常用藏药。《中华人民
共和国卫生部药品标准·藏药》(第 1 册)载入的兔
耳草(藏名洪连)为玄参科植物短管兔耳草(Lagotis
brevituba Maxim) (藏名红林)［1］或全缘兔耳草 L． in-
tegra W． Smith(藏名洪连)［1］的干燥全草。主要分
布在甘肃西南部、青海东部及西藏等地。全草入药，
用于五脏有热，血分热毒，体虚潮热，高血压，急、慢
性肝炎，全身发热，肾炎，肺病，动脉粥样硬化，月经
不调，毒物中毒及“心热”症［1］。史高峰等［2］从甘肃
—3811—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2012，32(7)
DOI:10.16155/j.0254-1793.2012.07.005
短管兔耳草中分离鉴定了 5 个已知化合物，刘德铭
等［3］对青海产短管兔耳草脂溶性化学成分进行了
研究，金兰等［4］发现短管兔耳草具有一定的抗肿瘤
作用。目前，对于麦角甾苷和松果菊苷的测定已
有较多报道［5 ～ 9］。本文鉴于短管兔耳草的多种
功能作用，采用与文献报道中相似的分离、测定
方法，对分布在不同地区的短管兔耳草中主要成
分松果菊苷和麦角甾苷进行了多样点测定，测定
结果与海拔间关系表明:短管兔耳草在海拔
3. 500 ～ 4. 100 km 间的活性物质的含量较高且
较稳定，这为短管兔耳草的采收提供了一定的科
学依据。
1 实验仪器、试剂和材料
1. 1 仪器 Agilent 1200 型高效液相色谱仪，四元
梯度泵，DAD检测器。
1. 2 试药 松果菊苷、麦角甾苷的对照品(纯度达
99%)均购自中国食品药品检定研究院。甲醇为色
谱纯，水为超纯水。
1. 3 药材 野生短管兔耳草全草(采集于祁连县
达坂山，热水，大冬树山和野牛沟及玉树州杂多县长
拉山垭口，见表 1)粉碎后，过 80 目筛，冷藏保存
备用。
表 1 短管兔耳草采集地点
Tab 1 Origin of whole herb of Lagotis brevituba Maxim
编号
(No．)
位点
(sites)
海拔
(altitude)/m
纬度
(longitude)
经度
(latitude)
短
管
兔
耳
草
全
草
1 杂多县长拉垭口
(ChanglaYakou，Zaduoxian)
4525 95°5324″ 32°5836″
2 祁连县大冬树山
(Dadongshushan，Qilianxian)
4122 100°1431″ 38°0051″
3 祁连县野牛沟
(Yeniugou，Qilianxian)
4110 100°1431″ 38°0052″
4 海北州达坂山
(Dabanshan，Haibeizhou)
3924 100°2660″ 37°2925″
5 海北州热水
(Reshui，Haibeizhou)
3499 100°5141″ 37°4015″
2 方法与结果
2. 1 溶液制备
2. 1. 1 对照品储备液 精密称取对照品松果菊苷
4. 0 mg、麦角甾苷 3. 1 mg，置于 10 mL 量瓶中，加甲
醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配得质量浓度分别为
400 μg· mL － 1、310 μg· mL － 1 的 混 合 溶 液，
即得。
2. 1. 2 供试品溶液 分别称取不同采集地的短管
兔耳草粉末各 1. 0 g，精密称定，置 50 mL锥形瓶中，
精密加入甲醇 50 mL，称定质量，超声(功率 200 W，
频率 53 kHz)提取 30 min，放冷，再称定质量，用甲
醇补足减失的质量，摇匀，上清液用微孔滤膜
(0. 45 μm)滤过，即得。
2. 2 色谱条件 采用 ZORXDB C18(150 mm × 4. 6
mm，5 μm) ，流动相为甲醇 － 0. 1% 醋酸水溶液
(3 ∶ 7) ，流速 1. 0 mL·min － 1，检测波长 330 nm，
柱温 25 ℃，进样量 20 μL。在该色谱条件下，松
果菊苷、麦角甾苷均被洗脱并达到基线分离(图
1 － A、B)。
图 1 对照品(A)及采自祁连县大冬树山的短管兔耳草全草(B)色谱图
Fig 1 HPLC chromatograms of reference substances(A)and whole herb
of Lagotis brevituba Maxim from Dadongshushan of Qilianxian(B)
1．松果菊苷(echinacoside ) 2．麦角甾苷(acteoside)
2. 3 方法学考察
2. 3. 1 线性关系考察 用甲醇按 1 /2，1 /4，1 /8，1 /
16 倍稀释“2. 1. 1”项下的对照品储备液，即得系列
浓度对照品溶液。取系列对照品溶液及对照品储备
液，按“2. 2”项下色谱条件进样测定，以浓度对峰面
积作图，进行线性回归，得松果菊苷、麦角甾苷回归
方程分别为:
Y = 2 × 106X － 2. 153 × 104 r = 0. 9996
Y = 2 × 106X － 2. 113 × 104 r = 0. 9985
线性范围分别为 25 ～ 400 μg·mL －1和 19. 4 ～ 310
μg·mL －1
2. 3. 2 精密度试验 精密吸取对照品溶液 20 μL，
连续进样 5 次，测定峰面积，计算 RSD为 2. 0%。
—4811— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2012，32(7)
2. 3. 3 稳定性试验 取同一短管兔耳草全草样品
的供试品溶液，分别于 0，1，2，3，4，5，6，7，8 h 进样
测定，其质量分数的 RSD 为 1. 3%(n = 9)。结果表
明，供试品溶液在 8 h内稳定。
2. 3. 4 重复性试验 取同一短管兔耳草全草样品
5 份，按照“2. 1. 2”项下方法制成供试品溶液，依法
分别测定含量。结果松果菊苷和麦角甾苷平均含量
分别为 0. 12 和 0. 40 mg·g －1，RSD分别为 1. 6%和
2. 3%。
2. 3. 5 加样回收率试验 取“2. 4. 4”项下已测定
松果菊苷和麦角甾苷含量的短管兔耳草药材粉末 9
份，每 3 份为 1 组，每份约 0. 5 g，精密称定后，加入
“2. 1. 1”项下对照品储备液适量，使得加入对照品
的量分别约为样品中松果菊苷和麦角甾苷含有量的
80%，100%，120%，按“2. 1. 2”项下方法制备供试
溶液，按“2. 2”项下的色谱条件进样，计算回收率。
结果松果菊苷和麦角甾苷低浓度回收率(n = 3)分
别为 100. 5% 和 99. 7%，RSD 分别为 0. 7% 和
0. 6%;中浓度回收率(n = 3)分别为 99. 4% 和
97. 9%，RSD分别为 1. 1%和 1. 9%;高浓度回收率
(n = 3)分别为 99. 5%和 95. 9%，RSD分别为 1. 9%
和 0. 2%。低、中、高浓度平均回收率(n = 9)分别为
99. 8%和 97. 8%。
2. 4 样品测定 精密吸取供试品溶液 20 μL，按上
述“2. 2”项下色谱条件进样测定，以外标法计算样
品中松果菊苷和麦角甾苷的含量，结果见表 2 及
图 2。
表 2 短管兔耳草全草中松果菊苷和麦角甾苷
的含量(mg·g －1)
Tab 2 The contents of echinacoside and acteoside in
Lagotis brevituba
编号(No．)
松果菊苷
(echinacoside)
麦角甾苷
(acteoside)
总和
(total)
1 0. 12 0. 40 0. 53
2 1. 74 1. 12 2. 86
3 1. 56 0. 64 2. 20
4 1. 52 0. 74 2. 26
5 1. 18 3. 28 4. 46
3 讨论
3. 1 检测波长的选择 取混合对照品溶液在
210 ～ 400 nm 波长范围扫描，其中松果菊苷在
334 nm处有最大吸收，麦角甾苷在 331 nm处有最大
吸收。由于二者的最大吸收波长相差不大，为了便
于检测，最终确定 330 nm为测定波长。
图 2 短管兔耳草中松果菊苷(A)及麦角甾苷(B)的含量随海拔高
度的变化趋势图
Fig 2 The trendline of the content of echinacoside(A)and acteoside
(B)with the altitude
3. 2 流动相的选择 本实验考察了甲醇 －水、甲醇
－ 0. 1%醋酸水溶液和乙腈 －水体系，发现甲醇 －
0. 1%醋酸水溶液体系的分离效果较好，且无重叠
峰，因此选取甲醇 － 0. 1%醋酸水溶液(3∶ 7)作为流
动相进行洗脱。
3. 3 提取条件的选择 松果菊苷和麦角甾苷均易
溶于甲醇，因此本实验采用甲醇超声提取，并对提
取温度(25，35，45，55 ℃)、提取时间(10，20，30，
40，50 min)、提取次数(1，2，3，4 次)以及甲醇用量
(10，20，30，40，50 mL)进行考察。结果表明，以小
于 45 ℃的温度，超声提取 1 次，每次 30 min，甲醇
用量为 50 mL的条件对样品进行提取时，即可快速
有效地将短管兔耳草中的松果菊苷和麦角甾苷提取
完全。
3. 4 小结 从 5个不同采收地短管兔耳草中松果菊
苷和麦角甾苷的含量测定结果可以看出，采自祁连县
大冬树山的短管兔耳草药材中的松果菊苷含量最高，
达到 1. 74 mg·g －1，采自海北州热水地区的短管兔耳
草药材中的麦角甾苷含量最高，达到 3. 28 mg·g －1，
综合考虑后，初步推测海北州热水地区为短管兔耳草
的最佳采收地区。样品采集于青海省不同州县的环
境条件差异较大的 5个采样区，海拔高度从 3. 499 km
至 4. 526 km，图 2 － A中松果菊苷的含量随着海拔的
(下转第 1195页)
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(本文于 2011 年 10 月 16 日收到)
(上接第 1185 页)
增高含量逐渐提高，在海拔 4122 km，其含量逐渐下
降，这与青藏高原地区的特殊气候条件有关，如:气
压低、日辐射强、温度低，生长季节内植物经常遭受
冰冻的侵袭［10］。图 2 － B中麦角甾苷的含量由海拔
4525 km处的 0. 40 mg·g －1逐渐增加到海拔 3499
km 处的 3. 28 mg·g － 1，与图 2 － A 中松果菊苷在
海拔 4. 122 km 处含量达到最高后逐渐下降为一
个极小值的趋势大致相同，说明短管兔耳草在海
拔 3. 500 ～ 4. 100 km 间的活性物质的含量较高
且较稳定，这为短管兔耳草的采收提供了一定的
科学依据。
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(本文于 2012 年 5 月 13 日修改回)
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