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［收稿日期］２０１０－１１－２５
［基金项目］江苏省徐州市社会发展项目（编号：ＸＪ０８０６３） ［作者简介］仝俊太，男，副主任中药师，电话：０５１６－８５８０３１３９，Ｅ－ｍａｉｌ：ｔｏｎｇｊｕｎｔａｉ＠
１６３．ｃｏｍ ［通讯作者］徐圣秋，男，学士，副主任中药师，电话：０５１６－８５８０３２８６，Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｑｘｕ２１６＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
高效液相色谱法测定苍耳草中绿原酸
的含量
仝俊太１，徐圣秋１，李伟东２，雷雨２ （１．徐州市第一人
民医院药剂科，江苏 徐州２２１００２；２．南京中医药大学江苏省
中药炮制重点实验室，国家中医药管理局中药炮制标准重点
实验室，江苏 南京２１００２９）
［摘要］ 目的：考察苍耳草不同生长期时其绿原酸的含量变
化。方法：用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法测定不同生长期绿原
酸的含量。固定相为Ａｌｔｉｍａ ＴＭＣ１８柱（２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ，５
μｍ），流动相为甲醇－０．１％磷酸水溶液梯度洗脱，柱温２５℃，
流速０．８ ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长３２６ ｎｍ。结果：绿原酸在１１～
８８．６μｇ·ｍＬ
－１范围内其峰面积与浓度之间呈现良好的线性
关系（ｒ２＝０．９９９ ９），精密度的ＲＳＤ小于０．８１％，平均提取回
收率为９７．３３％。苍耳草中绿原酸的含量以５月份最高，依
次降低至８月份，然后９、１０月份陆续升高。结论：根据绿原
酸的含量，苍耳草的最佳采收期为５月份。
［关键词］ 苍耳草；不同采收期；绿原酸；高效液相色谱法；
含量测定
［中图分类号］Ｒ９２７．２ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１－
５２１３（２０１１）２０－１７３９－０２
苍耳草为菊科植物苍耳Ｘａｎｔｈｉｕｍ ｓｉｂｉｒｉｃｕｍ Ｐａｔｒ．的全
草，入药部位为地上干燥部分，全国均有分布。苍耳草具有
祛风散热，除湿解毒之功效；民间主要用于治疗感冒、头风、
头晕、鼻渊、目赤、目翳、风湿痹痛、拘挛麻木、风癞、疗疮、疥
癣、皮肤骚痒、痔疮、痢疾等症［１－３］。全草含绿原酸（ｃｈｌｏｒｏ－
ｇｅｎｉｃ ａｃｉｄ，ＣＨＡ）、苍耳苷（ｓｔｒｕｍａｒｏｓｉｄｅ）、隐苍耳内酯（ｘａｎ－
ｔｈｉｎｉｎ）、苍耳内酯（ｘａｎｔｈｕｍｉｎ）等［１］。有研究［４－７］表明，绿原
酸具有利胆、抗菌、降压、增加白细胞及兴奋中枢神经系统、
抗肿瘤、降脂、清除自由基等多种药理作用，同时也是众多药
材质量控制的重要指标。因此，本实验采用经典的 ＨＰＬＣ法
对不同生长采收期苍耳草的绿原酸含量变化进行比较，对确
定苍耳草的最佳采收期提供科学、翔实的依据，从而为制定
苍耳草质量标准奠定了基础。
１ 材料
１．１ 仪器与试药 Ａｇｉｌｅｎｔ１１００型高效液相色谱仪（包括在
线脱气机、四元梯度泵、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检
测器）；色谱甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯，水为纯化水；
绿原酸对照品购于中国药品生物制品检定所（批号１１０７５３－
２００４１３，纯度大于９８％）。
１．２ 样品来源 苍耳草分别于２００８年５－１０月每月１日
采自江苏徐州，经南京中医药大学药学院陈建伟教授鉴定为
菊科植物苍耳Ｘａｎｔｌｉｉｕｒｎ ｓｉｈｉｒｉｃｕｍＰａｔｒ．的地上干燥部分。
２ 方法与结果
２．１ 测定波长的选择 取绿原酸对照品适量，加５０％甲醇
制成质量浓度为０．４４３ ｍｇ·ｍＬ－１的溶液，在２００～４００ ｎｍ波
长范围扫描，测得绿原酸的最大吸收波长λｍａｘ为３２６ ｎｍ。
２．２ 色谱条件 色谱柱：ＡｌｔｉｍａＴＭ Ｃ１８（４．６ ｍｍ×２５０ ｍｍ，
５μｍ）柱；流动相：甲醇（Ａ）－０．１％磷酸水溶液（Ｂ），梯度洗脱
顺序：０～２０ ｍｉｎ，Ａ∶Ｂ为２０∶８０、２０～５０ ｍｉｎ，Ａ∶Ｂ为４０∶６０、
５０～６０ ｍｉｎ，Ａ∶Ｂ为５０∶５０；流速：０．８ ｍＬ·ｍｉｎ－１；柱温：２５
℃；检测波长：３２６ ｎｍ；进样量：２０μＬ；采样时间：６０ ｍｉｎ。在
此条件下，绿原酸与其他峰分离度良好，见图１。
２．３ 溶液的制备 （１）对照品储备液：精密称取绿原酸对照
品４．４３ ｍｇ，加５０％甲醇制成质量浓度为０．４４３ ｍｇ·ｍＬ－１的
溶液，作为绿原酸对照品储溶液。（２）供试品溶液：按照中国
药典２０１０年版一部附录高效液相色谱法试验，对样品进行
均匀取样，称样。精密称取５～１０月采收的苍耳草药材粉末
（过５０目筛）各５００ ｍｇ，置２５０ ｍＬ圆底烧瓶中，加入２５ ｍＬ
５０％甲醇，称重，８５℃加热回流１ ｈ，放置室温，用５０％甲醇
补足原重。离心后移取上清液，过０．４５μｍ滤膜，置于棕色样
品瓶中，作为供试品溶液。
２．４ 线性关系考察 分别精密吸取绿原酸对照品溶液
０．０２５，０．０５，０．１，０．２，０．５，１．０，２．０ｍＬ，置于１０ ｍＬ量瓶中，
加５０％甲醇至刻度，摇匀，进样２０μＬ，记录色谱图，详见图
１。
图１ 供试品（ａ）及对照品（ｂ）溶液色谱图
Ｆｉｇ１ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ｏｆ ｓａｍｐｌｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ａ）ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ｂ）
·９３７１·中国医院药学杂志２０１１年第３１卷第２０期Ｃｈｉｎ Ｈｏｓｐ Ｐｈａｒｍ Ｊ，２０１１ Ｏｃｔ，Ｖｏｌ ３１，Ｎｏ．２０
以质量浓度Ｃ（μｇ·ｍＬ
－１）为横坐标，峰面积值Ａ为纵坐
标，绘制绿原酸标准曲线，得回归方程为 Ａ＝０．０４２ ５ Ｃ－
０．０１９ ４（ｒ２＝０．９９９ ９），结果表明，绿原酸在１１～８８．６μｇ·
ｍＬ－１范围内与色谱峰面积线性关系良好。
２．５ 精密度试验 精密称取２号药材粉末１００ ｍｇ，按供试
品溶液的制备方法制备，按上述色谱条件连续进样６次，记
录绿原酸的保留时间及峰面积，其保留时间及峰面积的ＲＳＤ
分别为０．５１％及０．８１％，结果表明精密度良好。
２．６ 稳定性试验 精密称取２号药材粉末１００ ｍｇ，按供试
品溶液的制备方法制备，分别在０，２，４，６，８，１０，１２，２４ ｈ在上
述色谱条件下进样分析，记录绿原酸的保留时间及峰面积，
其保留时间及峰面积的 ＲＳＤ分别为０．３１％及０．９９％，结果
表明供试品溶液在２４ ｈ内基本稳定。
２．７ 重复性试验 取２号药材粉末，按供试品溶液的制备
方法，制备５份供试品溶液，在上述色谱条件下进样分析，记
录绿原酸的保留时间及峰面积，其保留时间及峰面积的ＲＳＤ
分别为０．５４％及２．２４％，结果表明本方法重复性良好。
２．８ 加样回收率 精密称取２号药材粉末５００ ｍｇ，共６份，
置于２５０ ｍＬ圆底烧瓶中，精密加入５０％甲醇２５ ｍＬ，加入
４４．３μｇ·ｍＬ
－１绿原酸对照溶液１．０ｍＬ，按供试品溶液制备
方法操作，在上述色谱条件下测定，结果平均回收率为
９７．３３％，ＲＳＤ为１．７６％（ｎ＝６）。
２．９ 样品含量测定 精密称取１～６号药材粉末各５００ ｍｇ，
平行３份，按供试品溶液制备方法操作，在以上色谱条件下
进样分析，２００８年不同采收期绿原酸含量测定结果见表１。
表１ 供试品含量测定结果 （ｎ＝３）
Ｔａｂ １ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄ ｓａｐｏｎｉｎ（ｎ＝３）
编号 采收时间 平均含量／％ ＲＳＤ／％
１ ５月１日 ０．３９６ ０ ２．４５
２ ６月１日 ０．０４７ ５ ０．２１
３ ７月１日 ０．００８ ９ １．９５
４ ８月１日 ０．００８ ４ ２．４９
５ ９月１日 ０．０２２ ７ ０．６７
６ １０月１日 ０．０３９ ９ ２．３２
［基金项目］云南省自然科学基金资助项目（编号：２０００Ｃ０１０６Ｍ） ［作者简介］屠文莲，女，学士，主管药师，电话：０８７１－３６３８４３５，Ｅ－ｍａｉ：ｔｕｗｅｎ－
ｌｉａｎ１８＠ｙａｈｏｏ．ｃｎ ［通讯作者］赵刚，男，学士，教授，主任药师，电话：３６３８４３５，Ｅ－ｍａｉ：ｚｈａｏｇａｎｇ８２１＠ｙａｈｏｏ．ｃｎ
３ 讨论
试验采用高效液相色谱法，以绿原酸为参照，在波长３２６
ｎｍ处测定绿原酸含量，其可行性分析结果证实：此方法的准
确性、精密度、稳定性、加样回收率、线性关系均较好，可作为
苍耳草中绿原酸的质控方法。
对于不同生长采收期的苍耳草中绿原酸的含量变化情
况的文献未见报道。本试验结果显示，以５月份含量最高，５
月之后随生长期的延长含量逐渐降低，９，１０月份后又逐渐升
高。这一结果与总酚酸的含量变化相吻合［９］。不同的生长
期、植株形态、光照时间、温度可能是引起苍耳草中绿原酸含
量变化的因素。
本试验结果为苍耳草最佳采收期的确定以及质量标准
的制订提供了科学依据。
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［收稿日期］２０１０－１２－２５
高效液相色谱法测定痂囊腔菌素Ａ的
含量
屠文莲，赵刚，王宇，夏爱博 （昆明医学院附属昆华医
院／云南省第一人民医院，云南 昆明６５００３２）
［摘要］ 目的：建立用高效液相色谱法测定痂囊腔菌素Ａ的
含量。方法：色谱柱为 Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ１８（２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ，５
μｍ），流动相为乙腈∶水（７０∶３０），检测波长为４６９ ｎｍ。结果：
痂囊腔菌素 Ａ在４～６０ ｍｇ·Ｌ－１范围内线性关系良好（ｒ＝
０．９９９ ９），平均加样回收率为１００．１０％（ＲＳＤ为０．４９％）。结
论：本法简便，快捷，准确，可有效地用于痂囊腔菌素 Ａ的测
定。
［关键词］ 高效液相色谱法；痂囊腔菌素Ａ；含量测定
［中图分类号］Ｒ９２７．２ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１－
５２１３（２０１１）２０－１７４０－０３
痂囊腔菌素Ａ（ｅｌｓｉｎｏｃｈｒｏｍｅ Ａ，ＥＡ）最早发现于苝醌类
光敏化合物中，含苝醌类化合物的植物和真菌的代谢产物在
民间常用于治疗胃痛、风湿性关节炎和某些皮肤病［１－２］。研
究［３］发现，苝醌类化合物具有良好的光敏杀伤肿瘤细胞和抑
制艾滋病病毒（ＨＩＶ－２）等作用，并且越来越引起人们的关
注，但有限的天然资源限制了该类化合物的开发应用。１９９８
年，黄坤等［４］从云南西部山区筛选到一株丝状真菌－１８号菌，
经鉴定为子囊菌纲，肉座菌科，菌寄生菌属的真菌，并在实验
室利用固体生物发酵方法培养成功，成批量地分离到ＥＡ单
体，从而解决了原料问题。
ＥＡ是目前已知可见光区内优良的光敏剂，在可见光照
射条件下产生的单重态氧、超氧阴离子和半醌自由基具有化
学反应活性，对有机体、癌细胞、革兰阳性细菌和病毒产生抑
制及伤害作用［４－１０］，临床使用安全，且毒性较小，是一种非常
有开发价值的天然药物［１１］。本实验用 ＨＰＬＣ测定ＥＡ的含
·０４７１· 中国医院药学杂志２０１１年第３１卷第２０期Ｃｈｉｎ Ｈｏｓｐ Ｐｈａｒｍ Ｊ，２０１１ Ｏｃｔ，Ｖｏｌ ３１，Ｎｏ．２０