全 文 :广西科技大学学报 第 26 卷
不同采收期倒地铃总黄酮及芦丁的含量变化
陈 君,裴世成,吴 钢
(广西科技大学 医学院,广西 柳州 545006)
摘 要:为确定倒地铃的最佳采收期,以芦丁为对照品,分别采用紫外-可见分光光度法和高效液相色谱法测定不同采
收期倒地铃中总黄酮及芦丁的含量. 结果表明: 倒地铃中总黄酮及芦丁含量在不同采收期中变化较大:5 月份倒地铃
中总黄酮含量最低为 0. 99% , 11 月份倒地铃中芦丁含量最低为 0. 006% ,8 月份倒地铃中总黄酮及芦丁的含量最高
为 4.16%,0.036%.通过以总黄酮及芦丁含量为指标,确定倒地铃的最佳采收期为 8 月份.
关键词:倒地铃;不同采收期;总黄酮;芦丁
中图分类号:R284.1 文献标志码:A
0 引言
倒地铃是无患子科植物倒地铃(Cardiospermum halicacabum L.)干燥全草,始载于《本草纲目》,味苦、
寒,具有清热解毒、凉血、消肿之效,民间多用于治疗百日咳、糖尿病、咽喉炎、湿疹、疔疮等[1-3].韦建华等[4-5]
从倒地铃中分离鉴定了:蒲公英赛醇、十五烷酸、棕榈酸、芹菜素、β-谷甾醇、原儿茶酸、β-香树脂醇、原儿
茶醛、正二十七烷、毛蕊异黄酮、芦丁、β-香树脂醇棕榈酸酯、槲皮素、β-胡萝卜苷、豆甾醇、豆甾醇-3-o-β-
D-葡萄糖苷、金圣草黄素、3β-赤杨醇.研究表明倒地铃含有萜类、黄酮、甾醇及有机酸等多种成分,其中黄
酮类化合物具有清除自由基、抗氧化、抗突变、抗肿瘤、抗菌、抗病毒和调节免疫、防治血管硬化、降血糖等
功能[6].实验研究不同采收期倒地铃总黄酮及芦丁的含量变化情况,观察倒地铃的最佳采收期.
1 仪器与试药
1.1 仪器
Agilent-1260 型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);Tu-190 双光束紫外-可见分光光度计(北京普析
通用仪器公司);AL104电子天平[梅特勒-托利多(上海)有限公司];水浴锅;超声清洗仪器.
1.2 试药
不同采收期的倒地铃采于广西柳州市郊区,采集时间为 2013年 5月~11月.经广西中医药大学廖月葵
高级实验师鉴定为无患子科植物倒地铃干燥全草;芦丁对照品(中国食品药品检定研究院,批号 100080-
200707);乙腈为色谱纯;其余试剂为分析纯.
2 方法与结果
2.1 紫外分光光度法测定样品中总黄酮含量[7]
2.1.1 对照品溶液的制备
取已烘干至恒重的芦丁对照品约 12 mg,精密称定,用 70%乙醇溶解,置于 50 mL 量瓶中,加 70%乙醇
定容,摇匀,得芦丁对照品溶液,质量浓度为 0.254 g·L-1,备用.
2.1.2 供试品溶液的制备
收稿日期:2015-09-14
基金项目:广西高校科学技术研究项目(2013YB287)资助.
作者简介:陈君,硕士,副教授,研究方向:中药、民族药的有效成分与质量标准, E-mail:lzyzchenjun@163.com.
文章编号 2095-7335(2015)04-0006-03
第 26 卷 第 4 期 广 西 科 技 大 学 学 报 Vol.26 No.4
2015 年 12 月 JOURNAL OF GUANGXI UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY Dec. 2015
DOI:10.16375/j.cnki.cn45-1395/t.2015.04.002
第 4 期
取不同采收期倒地铃粉末各约 2 g,精密称定,置于 100 mL 圆底烧瓶中,加 70%乙醇 50 mL,加热回流
1 h,滤过,药渣用 70%乙醇冲洗,滤液并入量瓶,定容到 100 mL.
2.1.3 测定波长的选择
取对照品溶液和供试品溶液各 1 mL,分别置于 50 mL 容量瓶中,加水适量,加入 0.3 mL 的 5%NaNO2
溶液,混匀后放置 6 min;加入 0.3 mL的 10%Al(NO3)3溶液,混匀后放置 6 min;加入 4 mL的 4%NaOH溶液
后用水稀释至刻度,混匀后放置 10 min.吸取 70%乙醇 1 mL 同法配制做空白,在 400 nm~800 nm 处进行扫
描,结果表明对照品溶液和供试品溶液均在 506 nm处有最大吸收,故选 506 nm为测定波长.
2.1.4 标准曲线的绘制
精密量取对照品溶液(0.254 g·L-1)0.5 mL,1.0 mL, 2.0 mL,3.0 mL, 4.0 mL,5.0 mL 于 50 mL 量瓶中, 按
2.1.3项自“加入 5%亚硝酸钠溶液”起同法操作,以相应溶剂作空白,于 506 nm 处测定吸光度.以吸光度为
纵坐标,浓度为横坐标,得回归方程为 Y=0.012 8X+0.012 5,r=0.999 3 ,总黄酮在 2.54 mg·L-1~25.4 mg·L-1呈
良好的线性关系.
2.1.5 精密度试验
精密取供试品溶液 1 mL,按 2.1.3项方法操作,重复测定 6次,结果 RSD为 1.17%,表明仪器精密度良好.
2.1.6 重现性试验
取倒地铃(7 月份)粉末约 2 g,6 份,精密称定,按照 2.1.2 项方法制备,精密吸取 1 mL 于 50 mL 量瓶
中,分别按 2.1.3 项自“加入 5%亚硝酸钠溶液”起同法操作,测定吸光度.结果 RSD 为 2.03%(n=6),表明重
现性良好.
2.1.7 稳定性试验
取倒地铃(7 月份)粉末约 2 g,1 份,精密称定,按照 2.1.2 项方法制备,精密吸取 1 mL 于 50 mL 量瓶
中,分别按 2.1.3 项自“加入 5%亚硝酸钠溶液”起同法操作,分别于 0 min,15 min,30 min,45 min,60 min 测
定吸光度.结果 RSD为 1.08%,表明供试品溶液在显色后 1 h内稳定.
2.1.8 加样回收率试验
取 6份已知总黄酮的倒地铃(7月份)粉末约 1 g,精密称定,加入适量的芦丁对照品,按 2.1.2项方法制
备,精密吸取 1 mL 于 50 mL 量瓶中,分别按 2.1.3 项自“加入 5%亚硝酸钠溶液”起同法操作,测定吸光度,
计算回收率,得平均回收率为 98.4%,RSD为 1.95%.
2.1.9 总黄酮含量测定
取不同采收期的倒地铃粉末约 2 g, 按 2.1.2
项方法制备,精密吸取 1 mL 于 50 mL 量瓶中,分
别按 2.1.3 项自“加入 5%亚硝酸钠溶液”起同法
操作,测定吸光度,结果见表 1.
2.2 HPLC法测定样品中芦丁的含量[8-9]
2.2.1 芦丁的色谱条件
Inertsil ODS-3 色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈∶0.1%磷酸溶液(21∶79);检测波长:257 nm;
流速:1 mL·min-1;进样量 10 μL;室温.
2.2.2 对照品溶液的制备
取已烘干至恒重的芦丁对照品约 12 mg,精密称定,用甲醇溶解,转移至 100 mL 量瓶中,加甲醇定容,
摇匀,得芦丁对照品溶液,质量浓度为 0.125 g·L-1,备用.
2.2.3 供试品溶液的制备
取不同采收期倒地铃粉末各约 1 g, 精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入 10 mL 的 70%乙醇, 密塞,
称定重量. 超声提取 30 min, 放冷后再称定重量, 用 70%乙醇补足减失的重量, 摇匀, 滤过, 取上清液过
0.45 μm的微孔滤膜即得.
2.2.4 标准曲线的绘制
表 1 不同采收期倒地铃总黄酮的含量测定结果
陈 君等:不同采收期倒地铃总黄酮及芦丁的含量变化 7
广西科技大学学报 第 26 卷
精密吸取芦丁的对照品溶液 (0.125 g·L-1)0.2 mL,0.6 mL,1.0 mL,2.0 mL,3.0 mL,4.0 mL分别置于 10 mL
量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,按照相同的色谱条件测定峰面积,以对照品进样量为横坐标,峰面积为纵
坐标,计算回归方程:Y=1 113.0 X-0.679 9,r=0.999 7,芦丁在 0.025 μg~0.50 μg的范围内线性关系良好.
2.2.5 精密度试验
精密吸取对照品溶液 1.0 mL 置 10 mL 容量瓶中,加甲醇稀释至刻度.按照相同的色谱条件测定,进样
10 μL,重复测定 6次,记录色谱峰面积,RSD为 1.06%,表明仪器的精密度良好.
2.2.6 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液(7 月份)10 μL,按照相同的色谱条件测定,分别在时间为 0 h,1 h,2 h,4 h,
6 h,8 h进样,记录色谱峰面积,RSD%为 1.23%,表明供试品溶液在 8 h内稳定.
2.2.7 重现性试验
取倒地铃粉末(7 月份)6 份,各约 1 g ,精密称定,分别按 2.2.3 方法制备,在色谱条件 2.2.1 下分别进
样,记录色谱峰面积,RSD为 1.87%,表明重复性良好.
2.2.8 加样回收实验
取 6 份已知芦丁含量的倒地铃(7 月份)粉末
约 0.5 g, 精密称取, 加入适量的芦丁对照品,按
2.2.3项方法制备,在色谱条件 2.2.1 下分别进样,
记录色谱峰面积, 计算平均回收率为 100.6%,
RSD为 2.35%.
2.2.9 芦丁含量测定
取不同采收期的倒地铃粉末约 1 g, 精密称
定,分别按 2.2.3方法制备,在色谱条件 2.2.1下分别进样,记录色谱峰面积,按外标法计算芦丁的含量.结果
见图 1和表 2.
3 讨论
倒地铃中的黄酮类物质主要有芹菜素、毛蕊异黄酮、芦丁、槲皮素、金圣草黄素等,本试验在同一地点不
同季节采集倒地铃,通过以总黄酮及芦丁为指标成分,初步对倒地铃最佳采收期进行探索研究.实验结果表
明:8月份采收的倒地铃中总黄酮及芦丁的含量为 4.16%,0.036%,明显高于其他月份,建议 8月份采收.
参考文献
[1] 江苏新医学院.中药大辞典[M].上海:上海人民出版社,1977.
[2]《中华本草》编委会.中华本草[M].上海:上海科学技术出版社,1999.
[3]黄燮才.常用中草药原色图谱[M].南宁:广西科学技术出版社,2007.
[4]韦建华,陈君,蔡少芳,等.倒地铃化学成分研究[J].中草药,2011,42(8):1509-1511.
[5]陈君,韦建华,蔡少芳,等.倒地铃有效部位化学成分研究[J].中药材,2013,36(2):228-230.
[6]刘星雨,周敏,孙休健.天然黄酮类化合物的药理活性及分离提取[J].中国药物与临床,2014,14(5):621-624.
[7]廖春燕,黄瑶,黄丽丹.鸡骨草总黄酮提取方法的比较[J].广西科技大学学报,2014,25(2):82-85,94.
[8]周吴萍.丝瓜藤和叶中齐墩果酸的提取与含量分析[J].广西科技大学学报,2014,25(2):86-89.
[9]蒋珍藕,赖茂祥,孙翠,等.苦丁茶中熊果酸和齐墩果酸的同步分析方法研究[J].广西科学,2014(3):271-274.
表 2 不同采收期倒地铃中芦丁的含量测定结果
(下转第 16页)
图 1 HPLC 图谱
A
mAU
80
60
40
20
0
0 2 4 6 8 10
BmAU80
60
40
20
0
0 2 4 6 8 10
(A)芦丁对照品 (B)倒地铃提取液
t / m i n t / m i n
8
广西科技大学学报 第 26 卷
Changes of total flavonoids and rutin contents
in Cardiospermum halicacabum L. from different harvest time
CHEN Jun, PEI Shi-cheng, WU Gang
(Medical School, Guangxi University of Science and Technology, Liuzhou 545006, China)
Abstract: Objective: Comparing the contents of total flavonoids and rutin in different harvesting periods to
evaluate the optimal harvest time. Method: The content of total flavonoids in Cardiospermum halicacabum L was
determined by UV with rutin as standard control, and rutin in Cardiospermum halicacabum L was determined
by HPLC. Results: The content of flavonoids and rutin in Cardiospermum halicacabum L changed in different
harvest time. Total flavonoids in Cardiospermum halicacabum L in May was 0.99%, rutin in Cardiospermum
halicacabum L in November was 0.006%, and those of August were 4.16% and 0.036%. Conclusion: The best
time for harvesting of Cardiospermum halicacabum L is in August with total flavonoids and rutin content as
indexes.
Key words: Cardiospermum halicacabum L.; different harvest time; total flavonoids; rutin
(责任编辑:黎娅)
Meromorphic travel solutions of
(3+1) dimensional Kdv-Zakharov-Kuznetsev equation
XIONG Wei-ling, LIANG Hai-zhen
(College of Science, Guangxi University of Science and Technology, Liuzhou 545006, China)
Abstract: Through the traveling wave transformation in the paper, we transform the solutions of the complex
(3 +1) dimensional Kdv -Zakharov -Kuznetsev equation, and obtain meromorphic travel solutions of (3 +1)
dimensional Kdv-Zakharov-Kuznetsev equation.
Key words: ZK-MEW equation; traveling wave solutions; meromorphic function
(责任编辑: 张玉凤)
(上接第 8页)
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
16