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收稿日期:2014-08-29; 修订日期:2015-01-30
基金项目:贵州省中药现代化重大专项项目(黔科合重大专项字［2012］
6010 号);
贵州省贵阳市科技计划项目(筑科合同［2011204］8 号)
作者简介:徐东升(1988-)男(汉族)，湖北孝感人，贵阳中医学院在读硕士
研究生，学士学位，主要从事中药质量控制及新药研究工作．
* 通讯作者简介:高言明(1956 －)，男(汉族)，贵州贵阳人，贵阳中医学院
教授，硕士研究生导师，学士学位，主要从事中药质量控制及新药研究工
作．
不同采收期毛钩藤药材中钩藤碱等
3 种成分的含量变化研究
徐东升1，高言明1* ，杨 春2，林昌虎3，吴明花1，唐才林1
(1．贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002; 2． 贵州理工学院，贵州 贵阳 550003;
3．贵州科学院，贵州 贵阳 550001)
摘要:目的 测定不同采收期毛钩藤中钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的含量变化，为毛钩藤的合理采收及品质评价
提供依据。方法 采用高效液相色谱法，色谱条件:WondaSil C18(4． 6 mm × 200 mm，5μm)色谱柱，以乙腈 － 0． 2%氨水梯
度洗脱，流速为 1ml·min －1，检测波长为 254nm，柱温为 25℃。结果 1 ～ 12 月采收的毛钩藤中的钩藤碱、去氢钩藤碱、异
去氢钩藤碱的含量得到准确测定。结论 当年秋季至次年初夏采收的毛钩藤药材质量相对较好。
关键词:毛钩藤; 钩藤碱; 去氢钩藤碱; 异去氢钩藤碱; 不同采收期; 高效液相色谱
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 06． 081
中图分类号:Ｒ284． 2;Ｒ567 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)06-1478-02
在现行使用的《中国药典》2010 版上没有采用某个有效成分
含量测定指标作为中药钩藤质量评价的标准［1］，因此钩藤药材
的采收期是根据民间习惯于秋、冬二季采收。用具有降压药效作
用的钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱含量［2 ～ 4］来研究中药钩
藤不同采收期的质量就有一定的意义。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪(Agilent1260)，DAD 检测器，安捷伦化学工
作站;AE － 240 双量程电子分析天平，量程:万分之一和十万分之
一两档(梅特勒 －托利多上海有限公司)，Dela320 型 pH计(梅特
勒 －托利多上海有限公司)，超声波清洗器(KQ5200DE 型，昆山
市超声仪器有限公司)。钩藤碱对照品购自中国食品药品检定
研究院，(批号:111927 － 201102)，去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱对
照品均购自天津马克生物技术有限公司(批号分别为:PCM －
GT20010304 － 3，PCM － GT20010304 － 4);乙腈、甲醇、氨水和三
氯甲烷均为分析纯，水为娃哈哈纯净水。药材样品均采自贵州省
开阳县翁昭村钩藤种植基地人工种植五年生毛钩藤，采样于
2012 年 1 月至 2012 年 12 月，按每月 1 至 10 号之内在同一毛钩
藤种植区域中采取带钩老茎枝作为样品，经贵阳中医学院讲师付
志明鉴定为茜草科植物毛钩藤 Uncaria hirsute Havil，药材样品在
室内阴干经粉碎后于 45℃烘至恒重并置于干燥器中备用。
2 方法与结果
2． 1 对照品溶液的制备 分别精密称取钩藤碱、去氢钩藤碱和异
去氢钩藤碱各适量，用甲醇配制成以上 3 种对照品浓度均为
0． 10mg·ml －1的混合对照品溶液。
2． 2 供试品溶液的制备 精密称取各毛钩藤样品约 2． 0g，加入
2ml氨水浸泡 30min，再加入三氯甲烷 30ml，甲醇 5ml，超声提取
1h，取出，放冷，过滤，滤液置于 60℃水浴上挥干，残渣用甲醇溶
解于 10mL量瓶中并定容至刻度，摇匀，用 0． 45μm 微孔滤膜虑
过，即得供试品溶液。
2． 3 色谱条件［5］ 色谱柱为 WondaSil C18柱(4． 6 mm × 200 mm，
5μm);流动相 A为乙腈 － B为 0． 2%氨水，梯度洗脱，0 ～ 45min，
72% ～45% B;45 ～ 60min，45% ～37% B。检测波长 254nm;柱温
25℃;流速 1． 0ml·min －1;进样量 20μl，分离效果见图 1 和图 2。
A －去氢钩藤碱 B －异去氢钩藤碱 C －钩藤碱
图 1 毛钩藤供试品色谱图
2． 4 线性关系考察 精密量取“2． 2”项下的混合对照品溶液
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时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 6 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 6
0． 1，0． 4，0． 7，1． 0，1． 3，1． 6ml于 6 个 10ml容量瓶中，分别用甲醇
定容至刻度，摇匀。按“2． 3”项下色谱条件进行测定，以浓度(X)
为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，得钩藤碱，去氢钩藤碱和异去氢
钩藤碱的回归方程和线性范围为分别为:Y1 = 30． 868X1 +
7． 8086，1 ～ 16μg·ml －1，r1 = 0． 9990;Y2 = 46． 472X2 + 3． 7848，1
～ 16μg·ml －1，r2 = 0． 9995;和 Y3 = 40． 368X3 + 10． 775，1 ～
16μg·ml －1，r3 = 0． 9990。
A －去氢钩藤碱 B －异去氢钩藤碱 C －钩藤碱
图 2 混合对照品色谱图
2． 5 检测限和定量限 在选定的色谱条件下，经试验并按信噪比
的 3 倍值和 10 倍值计算，最低检测限:钩藤碱为 0． 83ng，去氢钩
藤碱为 0． 65 ng，异去氢钩藤碱为 0． 69 ng;定量限:钩藤碱为 3． 90
ng，去氢钩藤碱为 3． 33 ng，异去氢钩藤碱为 3． 57 ng。
2． 6 精密度试验 取“2． 2”项下混合对照品溶液，连续进样 6
次，按“2． 3”项下色谱条件测定，用各对照品峰面积考察精密度，
计算钩藤碱，去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱的 ＲSD 值分别为
0． 46%，0． 27%，0． 37%，表明仪器的精密度良好。
2． 7 稳定性试验 取 11 月份采收的毛钩藤样品按“2． 2”项下制
备供试品溶液，按“2． 3”项下色谱条件下分别在 0，2，4，6，8，10，
12h进行检测，用各峰面积考察稳定性，计算钩藤碱，去氢钩藤碱
和异去氢钩藤碱 ＲSD值分别为 0． 73%，0． 92%和 1． 17%，表明供
试品溶液在 12h内稳定。
2． 8 重复性试验 精密称取 11 月份采收的毛钩藤样品 6 份，每
份约 2g，按“2． 2”项制备供试品溶液，按“2． 3”项的色谱条件进行
测定，得钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱的平均含量(μg·
g －1)分别为:15． 65，30． 83，20． 08 ，ＲSD值分别为 2． 77%，1． 39%
和 1． 66%。
2． 9 加样回收试验 精密称取 11 月份采收且已知钩藤碱、去氢
钩藤碱和异去氢钩藤碱平均含量的毛钩藤样品 6 份，每份约 1g，
加入 2ml氨水浸泡 30min，再加入三氯甲烷 30ml 和浓度分别为:
钩藤碱 3． 14μg·ml －1，去氢钩藤碱 6． 22μg·ml －1和异去氢钩藤
碱 4． 00μg·ml －1的甲醇混合溶液 5ml，按“2． 2”项下方法制备供
试品溶液，按“2． 3”项下色谱条件测定，得钩藤碱、去氢钩藤碱和
异去氢钩藤碱的平均回收率分别为 100． 32%，99． 07%，98． 36%，
ＲSD分别为 2． 55%，1． 89%，2． 41%。
2． 10 样品含量测定 分别精密称取各药材样品粉末约 2g，每个
样品各 3 份，按“2． 2”项下样品溶液的制备方法制备供试液，
按“2． 3”项下的“色谱条件”进行测定。结果见表 1。
表 1 毛钩藤不同采收期钩藤碱、去氢钩藤碱、
异去氢钩藤碱含量测定结果(珋x ± s)
采收月份
钩藤碱平
均含量
/μg·g － 1
去氢钩藤碱
平均含量
/ μg·g － 1
异去氢钩
藤碱平均含量
/μg·g － 1
三种生物
碱平均合量
/μg·g － 1
1 12． 64 20． 54 11． 42 44． 60
2 9． 84 15． 98 7． 78 33． 60
3 38． 58 47． 03 36． 38 121． 99
4 9． 25 14． 03 5． 45 28． 73
5 24． 65 35． 85 23． 44 83． 94
6 定量限以下 7． 69 8． 82 16． 51
7 10． 96 7． 53 5． 79 24． 28
8 9． 38 5． 15 6． 34 20． 87
9 定量限以下 定量限以下 4． 34 4． 34
10 11． 14 17． 18 9． 28 37． 60
11 15． 65 30． 83 20． 08 66． 56
12 5． 76 10． 76 5． 24 21． 76
n =3
3 讨论
异钩藤碱是钩藤药材中的药效成分，但在所选定的条件下未
能检测到。中药钩藤的有效成分主要是生物碱类，但每一种生物
碱含量均较低，因此采用检测到的三种生物碱的加和量能较好反
映钩藤的质量。
通过表 1 可以看出，开阳县翁昭种植的毛钩藤中三种生物碱
在全年气温相对较高的 6 ～ 9 月份含量却较低，而在当年秋季至
次年初夏气温相对较温和时节含量相对较高，此时段应该是该地
采收毛钩藤的最佳时期。
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