全 文 ：沈阳农业大学学报 , 2000一 06 , 31 (3 ): 2 54一 2 57
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o f Sh e n y a n g A g r ic ul t ur a l U in ve r s it y
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2000一 06 , 3 1( 3 ): 254一 257
新铁炮百合微繁的研究
罗凤霞 , 徐桂华 , 金丽丽 , 孙晓梅 , 朱 明
(沈阳 农业大学 , 辽宁沈阳 1101 6 1)
摘要 : 以新铁炮百合叶片 、 花瓣 、 花丝 、 鳞片和种子为外植体 , 进行组织培养再生研究 。 结果表明 : 不同外植体诱导
分化的能力不 同 , 其中种子 > 鳞 片 > 花 丝 > 花 瓣 > 叶片 , 诱 导率分别为 98 .2 7% , 95 .8 3% , 86 .5 0% , 1.4 63 % 和
1
.
43 %
。 不同继代培养基对新铁炮离体快繁有显著影响 , 选用 M S作为基本培养基 , 附加不 同浓 度的 B A 和 N A A 配
合成 or 个组合 , 并进行随机区组实验 , 结果表 明 : M S + BAZ gm
·
L
一 ’ 十 N A A O.Z gm
·
L 一 ` 继代 繁殖效果 最佳 , 繁殖倍数
4侧 达 14 ~ 17 株苗 。 不同生根培养基对新铁炮百合继代苗生根影响差 异显 著 , 其中以 M S 不附加任何激素 为最佳 ,
生根率为 9 % , 平均每株苗生粗根 .6 9条 。 不同移栽基质对新铁炮百合生根苗移栽成活率影响不 同 , 其 中以细河 沙 :
草炭 (2 : D 为最佳 , 移栽成活率可达 92 % .
关键词 : 新铁炮百合 ; 组织培养 ; 快速繁殖
中图分类号 : 5 6 82 . 2 + 9 文献标识码 : A 文章编号 : 100 0一 170 0 (200 0)0 3一 02 54 一 04
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新铁炮百合 ( iL 加m xl on g尹ort `m )是近年来 日本利用铁炮百合和台湾百合等做亲本育成的 F ,代 ,
是切花百合中的皎皎者 , 它主要靠种子繁殖 , 种子播种后 8个月 即可开花 。 但新铁炮种球较小 , 一般
直径仅 1. sc m 左右 , 分生籽球能力极低 , 因而不能靠百合的常规繁殖方法分生籽球和鳞片扦插法繁
殖 。 近年我国主要靠从 日本进 口种子繁殖 , 但引种价格昂贵 。 关于百合的组织培养自 1957 年 R o b b 首
次发表了百合的组培文章后 , 一直有人研究 , 成功的百合已有 40 多种 `1 , 但主要限于原种百合 。 新铁
炮百合为近年出现的新品种 , 关于它的组培研究报道极少 , 仅有温春秀等 lz[] 997 年利用鳞片组培研究
的文章 。 沈阳农业大学林学院园林系于 19 97 年从 日本引进部分种子 , 经过多次试验 , 利用种子 、 鳞
片 、 花瓣 、 花丝 、 叶片等多种外植体进行诱导分化 、 继代 、 生根 、 移栽 , 并 已进行批量生产 , 由组培
苗下地至开花仅需 4个月左右时间 , 大大缩短了新铁炮百合的生育周期 , 为新铁炮百合的快繁及利用
提供了较佳的途径 。
1 试验材料与方法
L l 材料
供试材料为 1997 年春从 日本引进的新铁炮百合种子 , 由种子播后长成的优质开花植株上的叶片 、
收稿日期 : 20 0一 04 一 10
作者简介 : 罗凤级 ( 19 58 一 ) , 沈阳农业大学林学院副教授 , 硕士 , 从事园林植物教学与科研工作 。
. 研究报告 R ES E A RC H R EP O R T
第 3期 . 罗凤霞等 : 新铁炮百合微繁的研究 _ _ _ 一 一生全廷二
花瓣 、 花丝及地下鳞茎上的鳞片 。
L Z 培养基
诱导培养基选用了 M S和 SH 两种基本培养基 , 附加了同种激素 ; 继代培养基选用了 M S 为基本
培养基 , 附加了不同浓度的 B A 和 N A A , 共配置 10 种组合 , 进行了随机区组试验 ; 生根培养基选用
了 M S 和 1/MZ S 附加或不附加生长素等 4 种组合
。 所有培养基都采用了固体培养基 , 琼脂 6g 一 ’ , 蔗
糖 309一 ’ , p H 值为 .5 8。
L 3 培养条件
在组培室的培养室中光照培养 , 温度 ( 23 士 3) ℃ , 日光灯每天光照 1h4 , 光强 10 0 一 12 0 L xo
L 4 移栽条件
生根苗开瓶炼苗 48 h 后移栽到温室苗床中 , 苗床以塑料小拱棚保湿 , 苗床基质 为细河沙 、 草炭 、
珍珠岩及它们各种 比例的组合 , 苗床温度 ( 23 士 5) ℃ , 空气相对湿度 85 % ~ 90 % , 基质湿度 30 % ~
40 %
。
L S 年增殖率的计算方法
年增殖率的理论值为 Y = 尸 , 其中 , Y 为年增殖率 ; X 为每一个继代周期的增殖倍数 , 即继代转接
1株芽苗 , 一个周期后形成的总苗数 ; n 为全年可增殖的周期数 , n = 365d /每周期天数 。
2 结果与分析
.2 1 不同外植体和培养基对诱导愈伤组织和芽分化的影响
以种子 、 鳞片 、 叶片 、 花瓣 、 花丝为外植体 , 把它们分别接种在 M S 附加激素和 S H 附加激素的
培养基上 , 分化结果见表 1。
表 1 不同外植体在不同的培养基上形成愈伤组织和芽的能力比较
T a价 e 1 T h e e
外值体
E x P la n t NO
叩科绝翌公9 .咧 ilt 蒸二旦!迎些照 c烈拜二 ”竺鲤止些 st vitI h 鱼犷些丝丛 丝坦丝】竺丝应亚塑些些些
M S + B A lm g
·
L
一 , + N A AO
.
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·
L 一 , SH + B A lm g
·
L
一 , + N A A O
.
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·
L 一 ,
接种数 形成愈伤数 成芽数
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.
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e x P l a n st e a ll i
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诱导率 ( % ) 接种数 形成愈伤数 成芽数 诱导率 ( % )
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叶片 L e a v es
花瓣 eP t al s
花丝 iF la n l e n st
鳞片 S e a les
从表 1中可以看出 , 不同外植体诱导分化的能力依次为种子 > 鳞片 > 花丝 > 花瓣 > 叶片 。 并
且种子接种后在 1 ~ 1 . 5个月之间直接萌发成苗 , 鳞片接种 2d0 后陆续萌发 , 60 % 左右先形成愈伤组
织 , 由愈伤组织形成小鳞茎状突起 , 随后生成芽 。 但有 40 % 左右没有明显的愈伤组织形成 , 而是直
接形成小鳞茎状突起 , 随后生成芽 。 花丝也是一种优良的外植体 , 绝大部分先形成愈伤组织 , 随后出
现小鳞茎状突起 , 最后成芽 。 仅有少量直接生成小鳞茎 。 花瓣和肠卜片诱导效果不佳 , 花瓣诱导率为
.14 63 %
, 而叶片仅为 1 . 43 % 。 但无论何种外植体 , 最初形成的芽仅有小鳞茎状突起和其上着生条形
叶 , 无茎 (图 l) , 转接 2 ~ 3次后 , 幼芽才有茎生成 。 两种培养基比较 , M S 优于 S H 。
.2 2 不同继代培养基对新铁炮百合成苗率的影响
本试验选用 M S为基本培养基 , 附加不同浓度的细胞分裂素 B A 和生长素 N AA , 配置成 10 个组
合 , 并进行了随机区组试验 。 继代培养应用的中间繁殖体为诱导阶段形成的带茎幼芽 (图 2) , 新铁炮
自然生长的地上茎无分枝习性 , 因基茎节上无侧芽存在 。 本试验转接 15d 后 , 从转接幼茎基部形成大
量不定芽 , 4沉时 , 不定芽已形成 6 一 8 片叶 (图 3) , 此时 , 以每个芽生长的新 芽数为繁殖倍数 , 调
. 研究报告 RES EA RC 日 R印O R T
2 56 沈 阳 农 业 大 学 学 报 第 31 卷
查结果如表 2o
表 2 不同处理 (培养基 )对不定芽分化的影响
T a b l e 2 T h e b u d d if fe re n t ia t io n in t h e d ill泛r e n t m ed i一 m
处理 (培养基 ) 区组 D l
s t r i e t s 出芽数
1 1 总和
出芽数 (接种芽数 ) 出芽数 (接种芽数 ) (接种芽数 )
N o
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.
o f b u ds N o
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(N o
.
o f b u d s in o eu l a t ed )倒。 . o f b ud s i n o e u l a t ed ) (N 0 . o f b u d s in o e lu a t ed )
平均繁殖倍数
T r e a t l n e n t A ve
.
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o f P ro P a ga t io n
(M e d i u n l )
B : 洲 S + B A lm g· L 一 , ) 22 0(3 0) 24 0 (30 ) - - 一一而 O嘟了一一一一下亏厂一
B: 洲 S + BZA m g · L 一 , ) 27 2(24 ) 3 04 (30 ) 57 6 (5 4) 10 . 6 7
几娜 S + BA 3m g · L 一 , ) 2 18(24 ) 2 25 (30 ) 4 3(5 4) 8 . 20
氏伽 S + BA 4m g · L 一 ’ ) 25 2(4 2) 173( 18 ) 4 2 5 (6 0) 7 . 0 8
B S 洲 S + B ZA m g · L 一 , + N AA O. Zm g · L 一 , ) 180 ( 15) 3 36 (2 1) 5 16(3 6) 14 . 33
B。 归 S + B A I . 5 ,飞 · L一 , + N AOA . smg · L 一 , ) 100 (2 0) 72( 18 ) 17 2(3 8) 4 . 53
B, 洲 S + B A l m g · L一 , + N AA O. lm g · L 一 , ) 2 8 1(2 9) 135( 18 ) 4 16(4 7) 8 . 8 5
B。 洲 S + B A lm g · L 一 `+ NA A lgm
·
L
一 ,
) 76 ( 18) 10 6( 25) 18 2(4 3) 4
.
23
B, 洲 S + B AO . smg · L 一 ’ + N AA I . smg · L 一 ’ ) 184 (2 1) 7 5( 15) 2 59 (3 6) 了. 19
B: 。 (M S+ B AO
.
ZM g一 , + N A A Z,n g · L一 ` ) 1 15( 16) 162 ( 18 ) 2 2 7(34) 8 . 15
把不同处理 (培养基 )按随机区组设计方案进行方差分析 , 结果为 : 区组间的均方比 F 值为 .0 0023 ,
而 0F 0s( 1, 9) 的值为 5 . 12 , F 值 < F : , 这说明 区组问差异不显著 ; 而不同处理间即不同培养基间的均
方比 F 值为 .5 07 , 而 0F 05 (9 , 9) 的值为 3 . 18 , F 值 > F : , 这说明不同的培养基配方对新铁炮百合继代
培养的繁殖系数有显著影响 。 从表 2 中可以看出 M s + B 2A m g’ L 一 ’ + N A A .O Zmg 一 ’ 为最佳培养基 , 平
均繁殖倍数为 14 . 3 。
通过方差分析虽得到了不同培养基对繁殖倍数有显著影响的结论 , 但这种差异可能是 1种或几种培
养基造成的 , 显著差异者常常会掩盖无差异者 , 因此对以上 9种培养基处理进行多重 比较 。 多重比较
结果为 B S处理和 B : , B 3 , B ; , B 6 , B 7, B 。 , B , 7 种培养基处理差异显著 , 而 B S与 B Z处理差异不显著 。 B S
培养基为 M S + B A Zm g一 ’ + N A A .O Zmg 一 ’ , 平均繁殖倍数为 14 . 3 ; 而 B Z为 M S 十 B A Zm g一 ’ , 平均繁
倍数为 .10 0 。 这表明 , 在 M S 培养基中 , 加人 B A Z雌一 ’ 后 , 是否再加人微量的生长素对继代繁殖率
影响不大 , 都能取得较好的效果 。
对新铁炮百合以 B , 配方进行了多次继代 , 随着继代次数的增加 , 繁殖倍数有扩大的趋势 , 一般接
种一个芽在 3叱左右即能形成 14 ~ 巧株继代苗 , 如 40d 转接 , 则形成 17 ~ 18 株继代苗 。
.2 3 不同生根培养基对新铁炮百合试管苗生根率的影响
继代苗长到 2 ~ c3 m 左右时即可切下转人生根培养基 , 转人生根培养基 1d8 左右开始生根 , 3d0
后调查 4 种生根培养基的生根情况 , 结果如表 3 。
表 3 不同生根培养基对试管芽生根率的影响
培养基
M e id a
卫创竺 3止 f应丝区 鱼亚四睡 m心 “ 热少.s r卯itn 食哄兮』仁红lbe bl 电一接种苗数 生根苗数 生根率 平均苗根数
N o
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No
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试管苗长势
C o n d i ti o n o f t u be
sP or t一t s , g r o wt h
根粗 , 苗壮
根细 , 苗弱
根 中等粗 , 苗黄
根细 , 苗弱
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CIZ34
从表 3可 以看出 , 加生长素的培养基生根数目较多 , 但根较细 , 苗弱 。 不加生长素的两种培养基
生根数目偏少 , 但是 M S 明显优于 l/ ZM S , M S平均有 6 .9 条粗壮根 , 并且苗的长势好 , 所以选用 M S
为新铁炮百合试管苗生根培养基 。
. 研究报告 R ES E A R C H R EP O R T