全 文 ：［作者简介］ 王恒(1981 －) ，男，硕士，主管技师，主要从事理化
检验工作。
【调查报告】
舟山海域贝类海产品中软骨藻酸含量调查
王恒
(浙江省舟山市疾病预防控制中心，浙江舟山 316021)
［摘要］ 目的:对舟山海域贝类等海产品中软骨藻酸含量进行初步调查。方法:采集舟山海域出产的贝类等海产品，使
用高效液相色谱法对其中的软骨藻酸含量进行定量分析。结果:舟山海域贝类等海产品中软骨藻酸的总检出率为 64%，
含量范围为 ND －1． 68 mg /kg，含量中值 0． 21 mg /kg，贻贝等海产品中毒素含量相对较高。结论:舟山海域贝类等海产品
中软骨藻酸总体含量远低于卫生标准限值，目前暂不存在食用风险。
［关键词］ 记忆缺失性贝类毒素;软骨藻酸;舟山海域;贝类
［中图分类号］ R155． 5 + 5 ［文献标识码］ B ［文章编号］ 1004 － 8685(2011)12 － 2986 － 04
An investigation of domoic acid content in shellfish in Zhoushan islands
WANG Heng
(Zhoushan Municipal Center for Disease Control and Prevention，Zhoushan 316021，China)
［Abstract］ Objective:To investigate the contents of domoic acid in shellfish in Zhoushan islands． Methods:The shellfish in
Zhoushan islands were collected and the contents of the domoic acid in these shellfish were detected with HPLC． Results:The to-
tal detectable rate of domoic acid in shellfish was 64% with the content range from 0 to1． 68 mg /kg，and the median was
0． 21 mg /kg． The content of domoic acid in mussels was relatively high． Conclusion:The contents of domoic acid in shellfish in
Zhoushan islands were lower than the hygienic standard． So there was no risk involved with shellfish．
［Key words］ Amnesia shellfish poison;Domoic acid;Zhoushan islands;Shellfish
软骨藻酸(domoic acid，DA)是记忆缺失性贝类毒素(ASP)
中最主要的一种神经毒素［1］。DA的生成与拟菱形藻(Pseudo －
nitzschia spp．)密切相关，并且会在以滤食藻类为生的贝类等动
物中积累以致对人类产生危害。迄今为止，在世界各大海域均
发现产毒藻［2］，因此包括我国在内的许多国家和地区均对贝类
产品中的 DA含量作出了规定(不得超过 20 mg /kg)。
目前 DA的分析方法主要有高效液相色谱法［3 ～ 8］、液相色
谱 －质谱法［9，10］、毛细管电泳法等［11，12］。由于 DA的卫生标准
限值较高，因此高效液相色谱法是最常用的分析方法。国内
关于海产品中 DA的调查报道较少，大多集中于分析方法的建
立，对于舟山海域海产品中的 DA含量调查尚没有报道。近年
来，随着海洋环境污染日趋严重，藻类暴发日渐频繁，贝类等
海产品中毒素积聚的风险也日益增大，因此有必要开展相关
海产品中 DA含量的监测研究，为相关食品的安全提供早期预
警。本研究对文献报道的 DA检测方法做了改进，并分析了舟
山海域贝类等海产品中 DA的本底含量，为 DA的监测及相关
海产品的食用安全提供参考依据。
1 材料与方法
1． 1 主要仪器与试剂
Agilent1100 高效液相色谱仪，包括四元泵、在线真空脱气
机、柱温箱、100 位自动进样器、紫外 －可见检测器(美国 Agi-
lent公司) ;全玻璃溶剂过滤器(天津津腾) ;SHB － 3 循环水真
空泵(上海申生科技有限公司) ;Milli － Q 超纯水系统(Milli-
pore公司) ;雷磁 PHS － 3CpH计(上海精科)。
甲醇、乙腈均为 HPLC 级(TEDIA 公司) ，一水柠檬酸、柠
檬酸三铵、磷酸、三氟乙酸、氨水均为分析纯(沪试) ，SAX固相
萃取柱(500 mg /3 ml，CNW公司) ，超纯水(18． 2 MΩ) ，软骨藻
酸标准品(Sigma，纯度≥90%)。
标准系列的配制:先将固体标准品分别配成 1 mg /ml的母
液，再分别配成 0． 1 mg /L、0． 2 mg /L、0． 5 mg /L、1． 0 mg /L、
2． 0 mg /L的标准溶液，于 4℃冰箱内保存。
0． 1%三氟乙酸溶液:吸取 1． 0 ml 三氟乙酸于 1000 ml 容
量瓶，超纯水定容至刻度。
pH2． 5磷酸溶液:量取 1． 0 L超纯水，用磷酸调节 pH至 2． 5。
乙腈 /水及甲醇 /水混合溶液:分别量取适量体积的乙腈 /
甲醇和超纯水，混匀。
洗脱溶液(0． 5 mol /L柠檬酸溶液，pH = 3． 2) :称取 40． 4 g
一水柠檬酸和 14． 0 g柠檬酸三铵溶解于 400 ml 超纯水，以浓
氨水调节 pH 至 3． 2，加入 50 ml 乙腈，混匀，超纯水定容至
500 ml。
1． 2 样品制备
样品去壳，沥水，匀浆。取 5． 00 g 均匀样品置于 50 ml 的
离心管中，加提取溶剂 15 ml，13000 转匀浆 2 min，5000 rpm离
心 10 min，移出上清液。另取一支 50 ml离心管，加入 10 ml提
取溶剂清洗匀浆机刀头，将清洗过刀头的提取溶剂转移到前
支离心管中，匀浆，离心，合并两次的上清液。将合并的上清
6892 中国卫生检验杂志 2011 年 12 月 第 21 卷 第 12 期 Chinese Journal of Health Laboratory Technology，Dec 2011;Vol 21 No 12
液事先经 3 ml 甲醇、3 ml 水和 3 ml 提取溶液活化的 SAX 小
柱，弃去流出液，分别以 3 ml乙腈 +水(1 + 9)、0． 5 ml 洗脱溶
液淋洗小柱，抽干，最后以 2 ml洗脱液洗脱，得待测试液。
1． 3 色谱条件
色谱柱:ZORBAX C18柱(250 mm × 4． 6 mm，5 μm) ;流动
相:pH2． 5 磷酸溶液 +乙腈(88 + 12) ;流速:1． 0 ml /min;检测
波长:242 nm;柱温:30℃;进样体积:10 μl。
2 结果与讨论
2． 1 固相萃取条件
固相萃取过程中提取液的组成往往会影响待测组分在固
相萃取柱上的吸附作用，由于在预实验中发现甲醇 +水(1 +
1)作为提取溶剂时提取溶液较为浑浊，后续的固相萃取过程
不易操作，因此考虑适当提高提取溶液中甲醇的比例。本研
究先考察了甲醇 +水(1 + 1)、甲醇 +水(6 + 4)、甲醇 +水(7 +
3)、甲醇 +水(8 + 2)、甲醇 +水(9 + 1)及纯甲醇对吸附过程的
影响。具体操作步骤为:分别吸取 100 mg /L 的 DA 标准溶液
200 μl，用不同组成的提取溶剂 10 ml溶解，分别进行固相萃取
操作，分别检测上样流出液及最终洗脱液中 DA的含量。结果
显示，在这 6 种提取溶剂条件下，DA 均可充分保留在固相萃
取小柱上。
2． 2 提取方法的选择
现有文献报道使用的提取溶剂主要为酸溶液［4］、甲醇 +
水(7 + 3)［6］或甲醇 +水(1 + 1)［1 ～ 3，5，7，8］。但是在实际检测过
程中发现，甲醇 +水(1 + 1)的提取液较为浑浊，提取的蛋白质
等杂质较多，易堵塞固相萃取小柱。酸溶液煮沸提取的优点
是可以同时检测麻痹性贝类毒素(PSP) ，但是 DA 在酸溶液中
不稳定，容易降解［4，6］。提高甲醇的浓度可以较好的沉淀蛋白
质，但是由于蛋白质的包埋作用，对 DA 的回收率会造成一定
的影响，因此本研究尝试以甲醇 +水(6 + 4)、甲醇 +水(7 +
3)、甲醇 +水(8 + 2)、甲醇 +水(9 + 1)及纯甲醇分别提取，考
察其提取效果及回收率。结果表明，甲醇 +水(6 + 4)对提取
液浑浊度改善不明显，而甲醇 +水(7 + 3)、甲醇 +水(8 + 2)、
甲醇 +水(9 + 1)及纯甲醇提取离心后，溶液均较澄清，后续的
固相萃取操作容易进行。但是回收率随着甲醇含量的提高逐
步下降，这四种提取溶剂的回收率分别为 89． 6%，88． 2%、
84． 1%、79． 9%(图 1) ，89． 6%的回收率虽低于卫锋等［7］报道
的 97． 23%的回收率，但于 Philipp Hess 等［5］报道的 90%的回
收率相当，因此选择甲醇 +水(7 + 3)作为提取溶剂。
图 1 提取溶液中甲醇含量对回收率的影响
2． 3 流动相的选择
国标方法［3］及部分文献［5，7］中使用 0． 1%三氟乙酸与乙
腈配比作为流动相，但是 0． 1%三氟乙酸的 pH 值为 1． 76，超
出了大多数液相色谱柱的 pH 承受范围，除非使用能耐受低
pH范围的色谱柱，因此该法的应用范围受到了一定程度的局
限。而 James F． Lawrence 等［4］指出，pH2． 5 时 DA的峰型对称
性最好，因此本研究尝试以 pH2． 5 磷酸溶液与乙腈配比流动
相。结果表明，pH2． 5 磷酸溶液 +乙腈(88 + 12)亦可得到良
好的峰型与保留时间，同时，DA与杂质的分离度也较好，因此
选择 pH2． 5 磷酸溶液 +乙腈(88 + 12)作为流动相。DA 标准
品及部分典型样品色谱图见图 2 ～图 4。
2． 4 舟山海域贝类等海产品中 DA含量
分别于 2010． 02、2010． 05 和 2010． 08 采集舟山海域出产
的 13 种贝类海产品共 39 份样品，分别检测其中的 DA 含量。
结果显示，39 份样品中，第一批次有 7 份检出，检出率 54%;第
二批次和第三批次各有 4 份样品未检出 DA，检出率均为
69%;总体检出率为 64%。具体检测结果见表 1。
从现有的文献报道来看，海产品中 DA的检出率较为不一
致。张一兵等［13］于 1998 年检测了渤海地区的 6 份贝类样本，
均未检出 DA。宋琍琍等［9］在浙江沿海的贝类样品中检出 1
份样品有 DA，含量为 0． 02 mg /kg。李大志等［11］采集了大连海
域的 5 份贝类样品，其中一份扇贝样品中检出，含量为
5． 2 mg /kg。陈西平等［14］检测了 14 份贝壳类等海产品，其中 7
份检出 DA，含量在 0． 43 mg /kg ～ 8． 14 mg /kg，检出率达 50%，
但未注明样品产地。吉薇等［15］在南海海域采集了 11 份海产
品，DA的检出率为 82%，是目前国内报道的检出率最高的报
道，其检出的含量最高值达 18． 202 mg /kg，已接近卫生标准限
值。相比之下，国外文献报道的检出率总体略高于国内，如
Philipp Hess等［5］采集了苏格兰海域的 782 份贝类样品，其中
289份检出有 DA，检出率为 37%。Kevin J James等［16］检测了
爱尔兰地区 346 份贝类产品中的 DA 含量，平均检出率为
48%，部分种类的检出率高达 89%。此次舟山海域的检出率
低于吉薇［15］等报道的南海海域的检出率，高于 Philipp Hess等
7892中国卫生检验杂志 2011 年 12 月 第 21 卷 第 12 期 Chinese Journal of Health Laboratory Technology，Dec 2011;Vol 21 No 12
报道的苏格兰海域的检出率，与 Kevin J James 等报道的爱尔
兰地区的检出率较为接近。
从含量来看，所采集的三个批次样品中，缢蛏(Sinonovacu-
la constrzcta Lamarck)、毛蚶(Scapharca subcrenata)和南沙笠贝
(Acmaea nanshaensis)中均未检出 DA(检测限 0． 10 mg /kg) ，其
余样品中 DA 的含量范围在 0． 10 mg /kg ～ 1． 68 mg /kg 之间。
除了第一批采集的厚壳贻贝(Mytilus coruscus)含量相对较高，
其 DA 含量达到了 1． 68 mg /kg，其余样品的含量均小于
1 mg /kg。三 个 批 次 的 含 量 中 值 分 别 为 0． 10 mg /kg、
0． 32 mg /kg和 0． 21 mg /kg，全部 39 份样品的含量中值为
0． 21 mg /kg，其中虹光亮樱蛤(Moerella iridescens)、脉红螺
(Rapana venosa)、厚壳贻贝(Mytilus coruscus)、毛拉玉螺
(Mammilla maura)、环文蛤(Cyclina sinensis)和方形马珂蛤
(Mactra veneriformis)中 DA含量相对较高，均大于 0． 20 mg /kg
(图 2)。在其他文献中，吉薇等［15］报道的南海海域海产品中
的 DA含量范围为 ND －18． 202 mg /kg，含量中值0． 498 mg /kg;
Philipp Hess等［5］的报道显示，在有 DA检出的样品中，79%样
品的含量在 2． 5 mg /kg 以下;Kevin J James 等［16］的报道中除
部分扇贝(P． maximus)样品含量偏高以外，其他样品的检出
含量范围为 ND － 0． 90 mg /kg(检出限 0． 01 mg /kg)。总体来
看，舟山海域贝类海产品中 DA的含量相对略低于其他文献报
道，除非有大规模的藻类暴发，舟山海域贝类海产品中 DA 的
本底含量应远低于 20 mg /kg 的卫生标准限值，引发食用中毒
的风险较低。
从季节变化来看，在有 DA 检出的样品中，除厚壳贻贝
(Mytilus coruscus)以外，其他贝类样品的 DA 含量高值均出现
在第二批次即 5 月份(图 3) ，3 月份和 8 月份的含量相对较
低。3 月份采集的贻贝 DA含量较高，可能是由于采样的偶然
性导致，也有可能是贻贝这一品种的特殊性导致，有待进一步
研究确认。
表 1 舟山海域贝类等海产品中软骨藻酸含量
采样时间俗名 种类 学名
含量
(mg /kg)
2010． 03 海瓜子 虹光亮樱蛤 Moerella iridescens 0． 10
海螺 扁玉螺 Neverita didyma ND
海螺 脉红螺 Rapana venosa 0． 12
淡菜 厚壳贻贝 Mytilus coruscus 1． 68
蛏子 缢蛏 Sinonovacula constrzcta Lamarck ND
扇贝 栉孔扇贝 Chlamys farreri ND
牡蛎 牡蛎 Concha Ostreae 0． 11
花蛤 菲律宾帘蛤 Ruditapes philippinarum ND
海螺 毛拉玉螺 Mammilla maura 0． 36
毛蚶 毛蚶 Scapharca subcrenata ND
胭脂 南沙笠贝 Acmaea nanshaensis ND
青蛤 环文蛤 Cyclina sinensis 0． 50
白蛤 方形马珂蛤 Mactra veneriformis 0． 37
2010． 05 海瓜子 虹光亮樱蛤 Moerella iridescens 0． 54
海螺 扁玉螺 Neverita didyma 0． 26
海螺 脉红螺 Rapana venosa 0． 32
淡菜 厚壳贻贝 Mytilus coruscus 0． 62
蛏子 缢蛏 Sinonovacula constrzcta Lamarck ND
扇贝 栉孔扇贝 Chlamys farreri 0． 39
牡蛎 牡蛎 Concha Ostreae ND
花蛤 菲律宾帘蛤 Ruditapes philippinarum 0． 19
海螺 毛拉玉螺 Mammilla maura 0． 54
毛蚶 毛蚶 Scapharca subcrenata ND
胭脂 南沙笠贝 Acmaea nanshaensis ND
青蛤 环文蛤 Cyclina sinensis 0． 94
白蛤 方形马珂蛤 Mactra veneriformis 0． 53
2010． 08 海瓜子 虹光亮樱蛤 Moerella iridescens 0． 21
海螺 扁玉螺 Neverita didyma 0． 13
海螺 脉红螺 Rapana venosa 0． 31
淡菜 厚壳贻贝 Mytilus coruscus 0． 56
蛏子 缢蛏 Sinonovacula constrzcta Lamarck ND
扇贝 栉孔扇贝 Chlamys farreri 0． 34
牡蛎 牡蛎 Concha Ostreae ND
花蛤 菲律宾帘蛤 Ruditapes philippinarum 0． 10
海螺 毛拉玉螺 Mammilla maura 0． 48
毛蚶 毛蚶 Scapharca subcrenata ND
胭脂 南沙笠贝 Acmaea nanshaensis ND
青蛤 环文蛤 Cyclina sinensis 0． 23
白蛤 方形马珂蛤 Mactra veneriformis 0． 43
注:ND表示未检出，检测限 0． 1 mg /kg．
(下转第 2992 页)
8892 中国卫生检验杂志 2011 年 12 月 第 21 卷 第 12 期 Chinese Journal of Health Laboratory Technology，Dec 2011;Vol 21 No 12
［10］Plata K，Rosato AE，Wegrzyn G，et al． Staphylococcus aureus as an
infectious agent:overview of biochemistry and molecular genetics of
its pathogenicity［J］． Acta Biochim Pol，2009，56(4) :597 － 612．
［11］Aktas Z，Aridogan A，Kayacan CB，et al． Resistance to macrolide，
lincosamide and streptogramin antibiotics in staphylococci isolated in
Istanbul，Turkey［J］． J Microbiol，2007，45(4) :286 － 290．
［12］何伟． 革兰阳性菌对四环素耐药的生化和遗传机制［J］． 国外医
药抗生素分册，2005，26(5) :201 － 204．
［13］Chandrakanth RK，Raju S，Aminoglycoside － resistance mechanisms
in multidrug － resistant Staphylococcus aureus clinical isolates［J］．
Curr Microbiol，2008，56(6) :558 – 562．
［14］Zhang K，Sparling J，Chow BL，et al． New quadriplex PCR assay for
detection of methicillin and mupirocin resistance and simultaneous
discrimination of Staphylococcus aureus from coagulase － negative
staphylococci［J］． J Clin Microbiol，2004，42(11) :4947 － 4955．
［15］Pantosti A，Sanchini A，Monaco M． Mechanisms of antibiotic resist-
ance in Staphylococcus aureus［J］． Future Microbiol，2007，2(3) :
323 － 234．
［16］Morandi S，Brasca M，Lodi R，et al． Biochemical profiles，restric-
tion fragment length polymorphism (RFLP) ，random amplified poly-
morphic DNA (RAPD)and multilocus variable number tandem re-
peat analysis (MLVA)for typing Staphylococcus aureus isolated from
dairy products［J］． Res Vet Sci，2010，88(3) :427 － 435．
(收稿日期:2011 － 07 － 26)
(上接第 2988 页)
3 结论
本文对海产品中软骨藻酸的液相色谱检测方法进行了局
部改进，并利用改进的方法对舟山海域的贝类等海产品中软
骨藻酸的含量进行了初步的研究。结果显示舟山海域贝类等
海产品中软骨藻酸的总体检出率为 64%，含量范围为
ND －1． 68 mg /kg，含量中值 0． 21 mg /kg，5 月份时含量相对较
高，但总体含量远低于 20 mg /kg的卫生标准限值，除非有大规
模的产毒藻类暴发，舟山海域贝类等海产品中记忆缺失性贝
类毒素软骨藻酸导致食源性疾病的风险较低。但是，对贻贝
等含量相对较高的海产品应注意保持监测。
［参考文献］
［1］Michael A Quilliam，Jeffrey L C Wright． The amnesic shellfish poison-
ing mystery［J］． Anal Chem，1989，61(18) :1053A － 1060A．
［2］刘仁沿，许道艳，董玉华，等． 海水和贝类中软骨藻酸的酶联免疫
吸附分析方法研究［J］．卫生研究，2009，38(5) :622 － 624．
［3］GB /T 5009． 198 － 2003．贝类 记忆丧失性贝类毒素软骨藻酸的测
定［S］．
［4］ James F Lawrence，Claudette F Charbonneau，Cathie Ménard，et al．
Liquid chromatographic determination of domoic acid in shellfish prod-
ucts using the paralytic shellfish poison extraction procedure of the as-
sociation of official analytical chemists［J］． Journal of Chromatography，
1989，462:349 － 356．
［5］ Philipp Hess，Susan Gallacher，Lesley A，et al． Determination and
confirmation of the amnesic shellfish poisoning toxin，domoic acid，in
shellfish from Scotland by liquid chromatography and mass spectrometry
［J］． Journal of AOAC international，2001，84(5) :1657 － 1667．
［6］ JLC Wright，RK Boyd，ASW de Freitas，et al． Identification of domoic
acid，a neuroexcitatory amino acid， in toxic mussels from eastern
Prince Edward Island［J］． Canadian Journal of Chemistry，1989，67:
481 － 490．
［7］卫锋，程昉，宫静宏，等． 高效液相色谱法测定贝类中的软骨藻酸
［J］．色谱，2001，19(3) :248 － 250．
［8］汪国权，柳泳刚，Au Alice． 鲜淡菜中软骨藻酸的液相色谱紫外法
研究［J］．环境与职业医学，2005，22(3) :214 － 216．
［9］宋琍琍，张海琪，侯镜德，等． 液相色谱 －串联质谱法测定贝类毒
素软骨藻酸的残留［J］．水产学报，2008，32(6) :950 － 955．
［10］卫锋，赵守成，李大志． 液相色谱 －电喷雾离子阱质谱法测定贝
类中软骨藻酸［J］．分析测试学报，2004，23(增刊) :220 － 222．
［11］李大志，祝文君，宋文斌，等． 记忆缺失性贝类毒素的主要成
分———软骨藻酸的毛细管电泳分析［J］． 色谱，2002，20(2) :125
－ 128．
［12］卫锋，王竹天．毛细管电泳法分析贝类食品中的软骨藻酸［J］．中
国食品卫生杂志，2003，15(2) :107 － 109．
［13］张一兵，李敏，刘宁，等． 记忆丧失性贝类毒素 － 软骨藻酸的
HPLC方法检测［J］．中国公共卫生，2000，16(4) :323 － 324．
［14］陈西平，王成斌，胡俊明，等． HPLC 方法检测水及水生动物中软
骨藻酸［J］．卫生研究，2001，30(4) :247 － 248．
［15］吉薇，郑洁莹，曾雪萍，等． 南海海域软骨藻酸(DA)贝类毒素的
HPLC方法检测［J］．现代食品科技，2011，27(1) :120 － 122．
［16］Kevin J． James，Marion Gillman，Mónica Fernández Amandi，et al．
Amnesic shellfish poisoning toxins in bivalve molluscs in Ireland［J］．
Toxicon，2005，46(8) :852 － 858．
(收稿日期:2011 － 08 － 23)
2992 中国卫生检验杂志 2011 年 12 月 第 21 卷 第 12 期 Chinese Journal of Health Laboratory Technology，Dec 2011;Vol 21 No 12