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富贵竹炭疽病菌生物学特性及抑菌力研究



全 文 :富贵竹炭疽病菌生物学特性及抑菌力研究
徐 婧1, 夏 瑞2
(1.中山大学新华学院,广东 广州 510520;2. 广东省农科院果树研究所,广东 广州 510640)
摘 要:研究了温度、pH 值、培养基对富贵竹炭疽病菌生长、产孢和孢子萌发率的影响,并测定了 3 种药剂对富贵竹炭
疽病菌的室内抑菌力。 经测定该菌菌丝在 10~35℃均能生长,其中 28℃为最适;产生分生孢子的温度范围为 15~35℃,30~
35℃产生较多;分生孢子萌发的温度范围为 10~35℃,15~30℃萌发较好。 在 pH3.0~10.0 的范围内该菌均能生长和产孢,菌
丝生长最适 pH 值为 5.0~7.0;产生分生孢子最适 pH 值为 9.0~10.0,分生孢子萌发最适 pH 值为 6.0~7.0。 在供试的 3 种培
养基中,PDA 是最适合该菌生长的培养基,用燕麦片琼脂培养基培养菌丝生长速度减缓,但产孢量更高。 药剂抑菌力测定
试验显示,72% 疽仙试剂对富贵竹的炭疽病菌抑菌力和药效的保持能力较好,推荐使用浓度为 800~1 000 倍。
关键词:富贵竹; 炭疽病菌; 生物学特性; 抑菌力
中图分类号:S436.8 文献标识码:A 文章编号:1004-874X(2009)03-0087-04
Studies on the biological Characteristics and bacteriostatic ability
of Colletotrichum gloeosporioides on Dracaena Sanderiana
XU Jing1, XIA Rui2
(1.Xinhua college of Sun Yat-sen University, Guangzhou 510520, China; 2. Institute of fruit tree research, Guangdong academy
of agricultural sciences, Guangzhou 510640, China)
Abstract: In this paper the effects to the pathogens growth, the condition of sporulation and conidial germination had been
studied when the pathogen was cultivated in different temperature, pH and culture medium. Bacteriostatic abilities of different
chemicals to the pathogen were also determined. The mycelia of the pathogen can live in the temperature from 10℃ to 35℃, and
the 28℃ is the optimum growing temperature. Between 15℃ to 35℃ the pathogen is able to produce conidiophores, and the
range between 30℃ to 35℃ is more suitable. When the temperature is from 10℃ to 35℃ the conidiophores can germinate, and
the range from 15℃ to 30℃ is much better. As far as the pH is concerned, the range from 3 to 10 is suitable for the growth of
the pathogen and the production of conidiophores. The optimum range for the mycelia growth is 5 to 6. The ideal pH for the
conidial production is 9 to 10, and that for conidial germination is 6 to 7. The light does not influenced the pathogen growth
greatly. Ordinarily when it is below 28℃ the presence of light would be good, but above 28℃ no light would be better. For the
culture medium, PDA is most suitable for the growth of the pathogen. If the pathogen is cultivated with agar medium plus oat
pieces the conidial production would be better. Moreover, the 72% Juxian solution gets greater bacteriostatic ability and higher
efficacy maintaining ability in the comparing experiments, and the recommended dilution times is 800~1 000.
Key words:Dracaena Sanderiana; Colletotrichum gloeosporioides; symptom identification; biological characters;
bacteriostatic ability
富贵竹 (Dracaena Sanderiana Virens)[1] 学名绿
叶龙血树,别名仙达龙血树、绿叶竹蕉、万年竹、开运
竹等,属龙舌兰科龙血树属常绿直立灌木状植物。富
贵竹寓富贵、长寿之意,因其茎叶形态酷似翠竹,长
势旺,被广泛应用于家庭瓶插或盆栽护养,同时还被
开发成“塔状”造型,观赏价值极高,深受国内外市场
欢迎。 但炭疽病是花木常发病害,发病率很高,危害
也较重, 特别是我国南方地区高温湿闷的小气候条
件有利其发生传播。 目前炭疽病已成为危害富贵竹
生产的主要病害之一,它主要危害叶片,引起叶斑,
叶片被害后形成褐色病斑, 从而严重降低其观赏性
和经济价值。
本试验通过对富贵竹炭疽病菌的生物学特性及其
抑菌力进行研究,以期为富贵竹炭疽病防治提供了理
论依据。
收稿日期:2008-01-20
基金项目:广东省科技攻关项目(2003C201023)
作者简介:徐婧(1982-),硕士,助教,E-mail:jw_xj@163.com
广东农业科学 2009 年第 3 期 87
DOI:10.16768/j.issn.1004-874x.2009.03.051
1 材料与方法
1.1 供试菌种的分离和鉴定
取新鲜感病叶片及茎部, 带回实验室→自来水冲
洗 1~2 h,擦干或晾干→切取病健交界 5 mm×5 mm 的
感病组织→70%酒精浸泡 30s,作表面消毒→无菌水冲
洗 2~3 次 (也可直接转入下一步)→0.1%升汞浸泡 15
s→无菌水冲洗 3~4次, 除去残留消毒剂, 接种到 PDA
(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)平板培养基上→置于(26±
1)℃培养箱中培养 5~6 d,得炭疽菌纯培养物。
将已分离纯化并验证其致病性的具有代表性的
菌株移入 PDA 培养基平板上(28℃)培养 6 d 后供测
试用。 参照方中达 [2]等方法进行鉴定。
1.2 温度试验
对菌丝生长情况及产孢的影响:将菌丝在 PDA 培
养基平板上培养 6 d,然后取¢5 mm 的打孔器,以无菌
操作法,在菌落周围以同心圆方式打孔,把菌块移入新
制成的 PDA平板中央, 分别置于 5、10、15、20、25、28、
30、35℃等 8 种温度下培养 5 d 后测量菌落直径,培养
8d 后记录产孢情况(用血球记数板测定产孢量),每处
理 8皿,3次重复。
对孢子萌发的影响: 取 28℃下培养 6 d 的炭疽病
菌用无菌水配成孢子的悬浮液,滴于载玻片上,分别置
于上述 8种温度下保湿培养 24 h,观察孢子萌发率。
1.3 pH值试验
设 pH3、4、5、6、7、8、9、10 共 8 个处理, 将 PDA 培
养基灭菌前用 ZD-2 型精密酸度计标定 pH 值,高压灭
菌后用 0.1 mol HCl和 0.1 mol NaOH 分别进行调节,同
时加入缓冲液,维持恒定的 pH值培养。 每个皿内倒入
20 mL 培养基,移入直径为 5 mm 的菌苔,培养温度为
28℃, 每处理 8皿,3次重复。培养 5d后测量菌落直径,
观察厚度;培养 8d后记录分生孢子量。
用缓冲液配制孢子悬浮液滴于载玻片上, 保湿培
养 24 h镜检萌发率。
1.4 培养基的影响
设置 3 种培养基 : 马铃薯葡萄糖琼脂培养基
(PDA)、燕麦片琼脂培养基、察贝克(Czapek),按常规方
法配制(PDA:马铃薯 200 g,葡萄糖 10~20 g,琼脂 17~
20 g,蒸馏水 1 000 mL;燕麦片琼脂培养基:燕麦片 30
g,琼脂 17~20 g,蒸馏水 1 000 mL;察贝克:NaNO3 2.00
g, K2HPO4 1.00 g, KCl 0.50 g, MgSO4·7H2O 0.50 g,
FeSO4 0.01g, 蔗糖 30.00 g, 琼脂 17.00 g, 蒸馏水 1 000
mL),分别制成平板。在上述 3种培养基平板上,分别接
种直径 5 mm的炭疽病菌菌丝, 每处理 8皿,3次重复。
于 25℃条件下恒温培养 5 d, 测量菌落直径; 培养 8d
后观察炭疽病菌分生孢子产生情况。
1.5 抑菌力研究
试验设 65% 好生灵 500 倍 、40% 炭疽福美 500
倍、72% 疽仙 500倍等 3个处理。
先把各药剂稀释 500 倍,进行第 1 次抑菌力实验,
分别在 48 h、72 h 观察、记录,药剂间对比以比较其抑
菌力和药效保持能力。根据以上测量值,逐渐增加药剂
浓度以求增强其抑菌力和药效保持能力; 逐渐降低药
剂浓度,找出比较经济的使用浓度。
2 结果与分析
2.1 病原菌的分离鉴定
病原菌在 PDA 上,菌丝成放射状生长,气生菌丝
灰白色,短绒毛状,较发达。病原菌平铺于培养基上,初
期菌落为纯白色,随即出现灰色圆环,圆环由灰色转为
褐色,最后由褐色转为黑褐色,培养皿背面也呈黑褐色
同心圆环条纹状。分生孢子梭型,采用分生孢子人工接
种,获得炭疽病菌的典型症状。
2.2 温度对菌丝生长、产孢及孢子萌发的影响
富贵竹炭疽病病原菌在 5~35℃间的菌丝生长情
况如图 1所示。经测定温度对该菌生长的影响很大,病
原菌在 5℃不能生长,10℃开始生长,35℃以后生长开
始受抑制。 试验结果表明,15~35℃是该菌生长适宜温
度区,20~30℃生长较为良好。最适生长温度为 28℃,5d
后菌落直径达 80 cm。 低于 20℃或高于 30℃病菌生长
均趋缓。 20~28℃菌丝直径增加相对较缓慢,28~30℃菌
丝直径减少较快, 说明高温对菌丝生长的影响比低温
大,高温抑制菌丝生长。
富贵竹在南方以 5~6月发病最重, 夏季多阴雨天
气,温度合适,适宜炭疽病菌滋长,病情发展快。
在 5~35℃温度范围间,富贵竹炭疽病病原菌产孢
情况如图 2 所示。 试验结果表明,15~35℃均能产生分
生孢子;在 30~35℃病菌形成的分生孢子量最多,大约
是 25℃时的 7~9倍;15~28℃时病菌产孢量增加幅度较
缓慢,28~35℃产孢量迅速增加。
温度地宝贵竹炭疽病菌孢子萌发率的影响如图 3
所示。 分生孢子在 15~30℃萌发较好,孢子萌发率可达
80%以上。 表明病菌分生孢子的萌发偏向于较温暖的
环境条件。
从图 1~3可以看出, 富贵竹炭疽病病原菌菌丝在
10~35℃均能生长,其中 28℃为最适温度;病菌产生分
生孢子的温度范围为 15~35℃, 以 30~35℃产生较多;
分生孢子萌发的温度范围为 10~35℃,15~30℃条件下
88
图 1 温度对富贵竹炭疽病菌菌丝生长的影响
图 6 pH 值对富贵竹炭疽病菌孢子萌发率的影响
图 5 pH 值对富贵竹炭疽病菌产孢的影响
图 4 pH 值对富贵竹炭疽病菌菌丝生长的影响
图 3 温度对富贵竹炭疽病菌孢子萌发率的影响
图 2 温度对富贵竹炭疽病菌产孢的影响
萌发较好,其中,30℃为分生孢子最适萌发温度。
2.3 pH值对菌丝生长、产孢及孢子萌发的影响
从试验结果(图 4~5)所示,病原菌菌丝在 pH 值
3.0~10.0的 PDA培养基上均能生长和产孢。pH5.0~7.0
时菌丝生长较快,生长最适宜 pH 值为 pH6.0,培养 5d
后菌落直径就达 66 cm。 富贵竹炭疽病菌在 pH3.0~
10.0 范围内均可形成分生孢子,以 pH9.0~10.0 时形成
数量最多。另外,分生孢子的产生量随着培养时间的增
加而增加,且产孢量与菌落直径不呈正比例关系。
在 pH6.0时菌丝生长情况较其他的 pH值的 PDA培养
基情况好,在 pH10.0时产孢量较其他的好。 表明病原
菌有较强的耐酸碱能力, 但最适宜在偏酸的环境中生
长,偏碱的环境中产孢。
经测定富贵竹炭疽病菌分生孢子在 pH 值 3.0~
10.0 范围内均能萌发(图 6),但其萌发率有明显差异,
pH值为 5.0~8.0时分生孢子萌发率较高, 以 pH6.0 时
萌发率最高,达 81.3%。 这与菌丝生长的最适 pH 范围
一致,说明它们喜欢微酸性环境。
89
表 1 不同培养基对菌丝生长及分生孢子形成的影响
培养 10 d分生
孢子量(×105个/皿)
36.17b
5.07c
89.90a
菌落厚薄

一般

菌落直径(mm)
6.73a
5.47b
5.80b
培养基
PDA
Czapek
燕麦片琼脂培养基
培养 5d
注:表中同列数据后小写英文字母不同者表示经 SSR 测验
差异显著。
表 2 不同药剂 500 倍浓度对富贵竹炭疽病菌抑制力的测定
抑制圈直径减小比例
(%)
27.78
25.29
7.14
抑制圈直径降幅
(cm)
0.4
0.87
0.26
药后 72h
1.04
2.57
3.38
药后 48h
1.44
3.44
3.64
处 理
65% 好生灵 500 倍
40% 炭疽福美 500 倍
72%疽仙 500 倍
抑制圈直径平均值(cm)
注:(1)抑制圈直径平均值为测定 24 个抑制圈直径所得到的平均值;(2)抑制圈直径降幅=48h 抑制圈直径平均值-72h 抑制圈直
径平均值;(3)抑制圈直径减小比例=抑制圈直径降幅/48h 抑制圈直径平均值。 表 3 同。
抑制圈直径减小比例
(%)
20.71
26.85
12.47
20.05
7.22
8.62
抑制圈直径降幅
(cm)
0.35
0.40
0.50
0.74
0.26
0.30
药后 72h
1.34
1.09
3.51
2.95
3.34
3.18
药后 48h
1.69
1.49
4.01
3.69
3.60
3.48
处 理
65% 好生灵 200
65% 好生灵 350
40% 炭疽福美 200
40% 炭疽福美 350
72%疽仙 750
72%疽仙 1000
抑制圈直径平均值(cm)
表 3 不同药剂浓度对富贵竹炭疽病菌抑制力的测定
2.4 不同培养基对病菌菌丝生长及产孢的影响
对于菌丝生长情况,供试的 3 种培养基中 PDA 与
Czapek、燕麦片琼脂培养基差异显著。富贵竹炭疽病病
原菌在 PDA 培养基上菌丝生长最好。 同样,对于病原
菌产孢情况, 燕麦片琼脂培养基与 PDA、Czapek 差异
显著。 燕麦片琼脂培养基能明显地促进分生孢子的形
成,其分生孢子产生数量为在 PDA 上的 2 倍多,达到
89.90×105 个/皿。 察贝克(Czapek)培养基既不利于富贵
竹炭疽病病原菌菌丝的生长,又不利于其产孢。
2.5 3种药剂对富贵竹炭疽病菌室内抑菌力的测定
从试验结果(表 2)可知,65% 好生灵对富贵竹炭
疽菌的抑菌力以及药效的保持能力都较差,40% 炭疽
福美和 72%疽仙对富贵竹炭疽菌的抑菌力较好,72%
疽仙的药效保持能力最强。
逐渐增加 65% 好生灵和40% 炭疽福美的浓度以
求增强其抑菌力和药效保持能力;逐渐降低 72%疽仙
的浓度,找出较经济的使用浓度。
对比表 2、表 3结果可知:对 65% 好生灵药剂而言,
增加浓度不能有效增强抑菌力及药效保持能力;对 40%
炭疽福美药剂而言,增加浓度对抑菌力和药效保持能力
的增强有较大效果;而对于 72%疽仙药剂,降低浓度对
富贵竹炭疽病菌抑菌力和药效保持能力影响较小。
3 讨论
根据病原菌形态特征、 培养性状和致病性测定结
果,按照王晓明 [3]、吴文平 [4]、Von Arx[5]和 Sutton[6]所述分
类系统分种检索,参考魏景超 [7]、陆家云 [8]、刘富春 [9]的
记载判断该病原为 Colletotrichum gloeosporioides,属半
知菌亚门(Deuteromycotina)刺盘孢属的真菌。
富贵竹炭疽病病原菌在 10~35℃范围内均可生
长,这个温度范围与张锦秀等 [10]对枸杞炭疽病菌(C.
gloeosporioides)的研究结果相比稍窄,而与黄炳金等 [11]
对银杏炭疽病菌(C. gloeosporioides)的研究结果基本
吻合;该菌菌丝体生长的 pH 值范围为 3.0~10.0,与杨
泮川[12]对烟草炭疽病菌(C. gloeosporioides)的研究结果
基本一致。
从实验结果可知 20~30℃为富贵竹炭疽病病原菌
生长的最适温度区,这与广东气候条件较为一致,因此
非常适宜该菌的生长繁殖, 将对富贵竹生产造成严重
损失。富贵竹的市场潜力很大,认真抓好由炭疽病病原
菌引起的富贵竹炭疽病的综合防治工作对广东富贵竹
生产的成败具有举足轻重的作用。
另外,通过对比试验,我们发现 72%疽仙药剂稀释
800~1 000 倍在富贵竹炭疽病菌防治实际应用中比较
经济,在生产应用中具有一定的参考价值。
(下转第 99页)
90
2.4 雌性和雄性成虫的性行为
据观察, 条螟成虫一般在早上 7:00 前后羽化,羽
化后白天潜伏于暗处,潜伏时触角平伏于前翅上。黄昏
后成虫开始出来活动,一般爬于蔗叶上。此时雌蛾腹部
末端的性外激素腺体会翻突出来,释放性外激素。性外
激素为气体化合物,在空间可随气流扩散。雄蛾在蔗叶
上会竖起触角并不停地摆动, 当触角上的感觉器官感
受到雌蛾发出的性外激素信号时, 便会沿着信号源方
向移动。晚上约 11:00 后,雄蛾若找到雌蛾则会表现得
非常兴奋,绕着雌蛾周围上下飞舞,此时雄蛾腹部末端
的阳具会伸出,当雄蛾飞扑到雌蛾身上时尾部相接后,
抱握器抱握着雌蛾腹部末端,阳具插入交配孔,雌雄蛾
便开始交配 (图 5)。 交配的高峰期一般在凌晨 1:00~
3:00,交配时间最短为 15 min,最长可达 2 h,一般为
45~60 min。 交配结束后雄蛾会绕着雌蛾飞舞一段时
间后才离去。一晚每对雌雄蛾均只交配 1次。但在经后
的晚上不同个体的雌蛾与雄蛾之间具有重复交配的现
象。此结果与黎教良等[5]的观察结果相同。
3 讨论
在甘蔗条螟蛹的性别区分上,生殖孔的位置及形
态用肉眼便能较好地进行观察, 且观察结果直观准
确,因此生殖孔的位置及形态是区分条螟雌蛹和雄蛹
的主要依据。 而雌雄蛹触角鞘的长度虽然有所区别,
但它不是生殖器的特征且只用肉眼难以观察,因此只
能作为性别区分的辅助特征。蛹性别的区分大大便于
在条螟的相关试验中对采集会来的雌蛹和雄蛹分别
进行预处理,而对成虫性别的区分及其性行为的了解
也有助于条螟相关试验的开展。
本研究主要是针对条螟雌性和雄性蛹与成虫各
自的外部特征及成虫的性行为进行观察和描述,但未
对雌雄成虫内生殖器的构造、交配过程中精包的形成
及受精过程等作进一步的观察和探讨,这有待于在今
后的观察和试验中进一步完善。
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A:雌蛾触角
B:雄蛾触角
图 4 雌、雄蛾触角比较
图 5 雌蛾与雄蛾交配
(上接第 90页)
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