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山葵试管繁殖技术



全 文 :王 俐,女,讲师,云南农业大学园林园艺学院,昆明 !#$#%,电话:
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龙春林,中国科学院昆明植物研究所
收稿日期:$##%(#’(%);修回日期:$##%(#&($#
中 国 蔬 菜
*+,-. /0102.3405 $##$6 $7 8 % 9 %!!试验研究!
山 葵 试 管 繁 殖 技 术
王 俐 龙春林
摘 要 将山葵带腋芽的叶柄基部接种于不同激素浓度的 :5培养基上,在不同温度、不同 ;+值下培养。结
果表明::5 < !(3. $=# >?·4@ % < -.. #=#) >?·4@ %对芽的分化、增殖效果最好;最佳的生根培养基为 % A $ :5 < -..
%=# >?·4@ % < ,3. #=# >?·4@ % < .* #=) B;最适的培养温度为 %! C;最佳的 ;+值为 !。
关键词 山葵 试管繁殖
山葵(!#$%&’ (’)’*+’ :DEF>=)也称山嵛菜,是
十字花科山嵛菜属多年生草本半阴性植物,原产中
国和日本〔%〕。主要用其新鲜根茎和叶柄磨碎作香
料,具有强烈的辛辣味和特殊的芳香,兼具杀菌和助
消化的功能。在日本及东南亚地区,主要作为鲜食
生鱼片等海鲜的高级调味品。近年来我国也开始引
种栽培,且需求量日益增加。山葵主要以分株和播
种繁殖为主,但繁殖速度慢,且有性繁殖易产生退
化,离体培养可以弥补这些不足。然而山葵的离体
培养在国内少有报道,王广东等利用带侧芽的山葵
根状茎作为外植体进行离体培养,繁殖系数在 G = #
9 =#〔$〕。为了寻求一种耗材少、繁殖速度高的离体
培养方法,笔者从 %HHH年开始利用山葵的叶柄作为
外植体并调节培养条件,成功育出了新生植株,把繁
殖系数提高到 ’ = # 9 & = #,使该项技术距实用化又前
进了一步。
! 材料与方法
! !! 材料
岛根 )号山葵叶柄。
! ! 方法
将叶柄从山葵植株上分离下来,在 ’# B的酒精
中浸泡 )# 9 !# I(秒),再放入 # = B的升汞溶液中
消毒 ! 9 & >FJ(分),最后用无菌水冲洗 G 9 次。将
消毒好的带腋芽的山葵叶柄基部接种于附加 !(3.
和 -..的 :5培养基(表 %)上进行芽的诱导和分化
(每瓶 $块外植体)。培养基附加蔗糖 ) = # B、琼脂
# = B,;+ = &,培养温度为恒温 $# C,每天光照
%% K(小时),光照强度 % ## LE。然后将诱导分化的
芽体进行继代培养,在蔗糖、琼脂浓度不变的情况下
进行以下处理。
% =$ =% 培养基 ;+值处理 用于继代的单个芽体去
掉 % A )顶端并纵切,转入不同 ;+值的培养基中培养
(每瓶 %个芽体),并选用在诱导分化中最佳的激素
组合。;+值梯度为 G、、!、’、&,观察 ;+值对芽的分
化和生长的影响。
% =$ = $ 温度处理 芽体处理及培养基的激素组合
同 % =$ = %,;+值选用在 % = $ = %中最佳的值。温度梯
度为 %$、%!、$#、$G C,观察温度对芽的分化和生长
的影响。
结果与分析
!! 芽的诱导及分化
在 )种激素组合的培养基上进行芽的诱导分
化。观察得知,叶柄在 :5 < !(3. $ >?·4@ % < -..
#=#) >?·4@ %培养基中经 M(天)左右,叶柄基部的
腋芽开始萌发,且基部变大;在 :5 < !(3. %= # >?·
4@ % < -.. #=#) >?·4@ %培养基中,叶柄基部的腋芽
萌发需 %# M(天)左右;:5 < !(3. #= >?·4@ % < -..
表 ! 芽在不同培养基中的诱导分化效果
激 素 组 合
>?·4@ %
接种
瓶数
分化
瓶数
分化率
B
总芽数

每瓶
芽数

平均
芽高
N>
:5 < !(3. $=# < -.. #=#) %$ %$ %## %$# %# ) =
:5 < !(3. %=# < -.. #=#) %$ %# &) &G ’ $ =&
:5 < !(3. #= < -.. #=#) %$ H ’ !# % =
—%—
! !# $%·&’ (培养基中,腋芽萌发更晚。
从接种后第 #! 天的观察结果看(表 ():)*+,
- $%·&’ ( . /,, ! !# $%·&’ (组合诱导不定芽效果
最好,每个外植体形成不定芽平均为 (!个,平均芽
高 # 0 1$,且生长旺盛;随着 )*+,和 /,,的比值减
小,不定芽的形成量减少。
! ! 培养基 #$对芽的继代增殖影响
在不同 23的培养基上培养芽体,-! 4(天)后观
察结果(表 -):230 5 )时较适于芽的分化及生长,且
23 6 )时芽的分化及生长最好。
表 ! #$对山葵继代增殖的影响
23 继代瓶数 平均芽数 7个 平均芽长 7 1$
8 -! 8 ! 8 -
0 -! 0 ! 0 0
) -! 9 ! ) !
9 -! 8 0 8 0
: -! # 0 8 !
! !% 温度对芽的继代增殖影响
分别在不同的温度下培养芽体,-! 4(天)后观
察结果(表 #):温度在 () ;时最适于山葵芽的分化
及生长,温度超过 -! ;,其营养生长受抑制。
表 % 温度对山葵继代增殖的影响
温度 7 ; 继代瓶数 平均芽数 7个 平均芽长 7 1$
(- -! 98 ) 0
() -! :! 9 !
-! -! 9! ) !
-8 -! 00 0 !
! !& 根的诱导
继代培育出的无根幼苗,苗高 0 ! 1$左右,将
其转接于 #种激素组合的培养基上进行诱导生根。
转接后第 (0天的统计结果(表 8):在 #种培养基中
植株均能生根,单独采用 /,,比单独使用 <+,效果
好,/,,与 <+,配合使用效果最佳。( 7 - => . /,,
!( $%·&’ ( . <+, ! !0 $%·&’ ( . ,? ! # @培养基
根诱导率达 A9 @,且根系生活力强,易栽培。
表 & 根 的 诱 导 结 果
激素组合
$%·&’ (
芽生长
情况
不定根的
诱导率
@
根生长情况
( 7 - => . <+, !( . ,? !# @ 生长正常 9! 生活力弱,根粗
( 7 - => . /,, !( . ,? !# @ 生长正常 :0 生活力强,有细根
( 7 - => . /,, !( . <+, !!0 生长正常 A9 生活力强,有侧根
. ,? !# @
! !’ 炼苗与移栽
将已生根的再生植株,先打开瓶盖炼苗 9 4
(天)左右,洗去培养基,移栽于经过消毒的砂质土壤
中,保持温度在 -0 ;以下,湿度在 :0 @以上,并加
盖遮阴网,成活率可达 A8 @。
% 讨论
% !( 细胞分裂素与培养过程中多酚类物质的污染
山葵植株中含有的多酚氧化酶,在培养过程中,
培养基的细胞分裂素物质(如 BC,)*+,)有增进多酚
氧化酶活性的作用,从而在培养基内产生并积累了
酚、醌类深褐色色素物质。这类物质常产生毒害,抑
制组织生长,严重时组织完全褐化而死亡。褐化的
程度随细胞分裂素浓度的提高而加深。在本试验
中,笔者在培养基中加入 DED . E?抗氧化剂来克服
或减轻褐化现象。
% !! 培养条件的确定
山葵适宜的气候条件是平均温度低于 (0 ;,夏
季平均气温不高于 -0 ;,营养生长的适温为 (# 5
() ;,在 23为 0 5 )的砂质土壤中生长良好。所以
在本试验中,根据其生长习性,来调节其培养条件,
从而得出了最佳的培养温度 () ;和 23值 )。并且
将繁殖系数提高到 9 ! 5 : !(表 -、表 #),这对山葵
的种苗生产具有一定指导作用。
参考文献
( 吴征缢(主编) 云南植物志(第 )卷) 北京:科学出版社,(AA0
- 王广东,李式军 山葵的离体培养和植株再生 植株生理学通
讯,#8(8):-)9
)*++,- .,/0,1- 234 ! #$%&’ 516#2720*63 68 ()%&*+, -,.,/$, FGH% &I(,&JH% ?KLHMIH-((?JMMN%N JO 3JPQI1LMQLPN,RLHHGH
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