全 文 ：第 40卷 第 4期
2016年 7月
南京林业大学学报( 自然科学版)
Journal of Nanjing Forestry University (Natural Sciences Edition)
Vol．40，No．4
Jul．，2016
doi:10．3969 / j．issn．1000－2006．2016．04．010
收稿日期:2015－07－30 修回日期:2015－11－30
基金项目:广东省科技计划项目(2013B020415015，2014A030304012) ;湛江市科技计划项目(2014A03020) ;广东省工业技术研究院
生物工程研究所科技基金项目(C201307) ; 广东省糖－能甘蔗育种与产业技术创新重点科研基地二期项目( 粤科财字
［2013］82号)
第一作者:官锦燕(guanjinyan1987@ 126．com )。* 通信作者:陈月桂(jiana2001friend@ 163．com) ，高级农艺师。
引文格式:官锦燕，谭嘉娜，罗剑飘，等． 牛樟的组织培养和植株再生［J］． 南京林业大学学报( 自然科学版) ，2016，40(4) :63－68．
牛樟的组织培养和植株再生
官锦燕，谭嘉娜，罗剑飘，黄海英，罗青文，杨俊贤，陈月桂*
(广州甘蔗糖业研究所湛江甘蔗研究中心，广东 湛江 524000)
摘要:以牛樟侧枝茎段为外植体，建立了牛樟高效离体再生体系，研究取材季节、消毒方式、不同激素配比等因素对
茎段再生的影响。结果表明:牛樟外植体采集最佳季节为春夏两季，此时采集的外植体其污染率与褐化率均较低，
且出芽快、出芽率高。依次用 1 000倍甲基托布津处理 10 min、75%酒精消毒 30 s和 0．1% HgCl2 消毒 8～10 min的
消毒方式能明显降低牛樟外植体的污染率，且对外植体伤害较小。MS培养基为牛樟生长最适基本培养基，牛樟外
植体诱导的最佳培养基为 MS + 6－BA (1．0 mg /L)+ IBA (0. 1 mg /L)，芽诱导率高且芽体粗壮;丛芽增殖的最佳培
养基为 MS + 6－BA (1．5 mg /L)+ IBA (0. 1 mg /L)，丛芽增殖率高且芽体健壮;生根培养的最佳培养基为1/2MS +
ABT(0．2 mg /L)+ IBA (0．05 mg /L)+ 活性炭(0．5 g /L)，30 d后生根率可达 100%且根系状态较好。
关键词:牛樟;组织培养;植株再生
中图分类号:S339．4 文献标志码:A 文章编号:1000－2006(2016)04－0063－06
Tissue culture and plant regeneration of Cinnamomum kanehirae Hay
GUAN Jinyan，TAN Jiana，LUO Jianpiao，HUANG Haiying，LUO Qingwen，YANG Junxian，CHEN Yuegui*
(Zhanjiang Sugarcane Ｒesearch Center，Guangzhou Sugarcane Industry Ｒesearch Institute，Zhanjiang 524000，China)
Abstract:In order to establish a high efficient regeneration system of Cinnamomum kanehirae，its stems were used as
explants to study the effects of collection season，sterilization methods and different hormone concentrations on stem re-
generation in the processes of buds induction． The results were as follows:The lower infecting and browning rate，quic-
ker differentiation speed and higher germination rate were observed when explants were collected in spring and summer．
The infectious rate significantly decreased if the explants were treated by thiophanate-methyl solution diluted 1 000 times
for 10 min，75% alcohol for 30 s and 0．1% mercuric chloride for 8－10 min． And these treatments were harmless to ex-
plants． MS was an optimal basic medium． The optimum medium for buds induction was MS+1．0 mg /L 6－BA + 0．1 mg /L
IBA，which exhibited higher bud induction rate and thicker buds． MS+ 1．5 mg /L 6－BA+ 0．1 mg /L IBA was the optimal
medium for bud subculture proliferation，which exhibited higher cluster bud proliferation rate and strong bud． 1 /2MS +
0．2 mg /L ABT + 0．05 mg /L IBA +0．5 g /L AC was the optimal medium for root differentiation，with the rooting percent-
age 100% after 30 days． Establishment of stable plant regeneration system of C． kanehirae will be useful for saving the
resources of endangered species and expanding its living space． Also，it will lay a foundation for the improvement of
breeding and the genetic transformation system in the future．
Keywords:Cinnamomum kanehirae Hay;tissue culture;plant regeneration
牛樟(Cinnamomum kanehirae Hay) 隶属于樟
科樟属，又名黑樟，为台湾本土特有常绿阔叶树种。
牛樟是一种极具发展潜力的景观树种，其木材也是
建筑、家具及雕刻工艺的上等原料，且全株可提炼
牛樟精油。此外，牛樟木段寄生真菌牛樟芝在癌症
治疗上具有极高的药用价值，被称为“森林中的红
宝石”［1－4］。目前，现存牛樟多为逾龄老树，零星分
布在台湾高山地区。牛樟花属黏质虫媒花，母树间
授粉困难，且多开于树冠顶端，易遭风害，偶有种子
形成在成熟前即遭鸟、兽食害，因此采种困难。在
自然状态下，种子自落，但林下光照不足、枯枝落叶
层过厚使种子不易着床发芽等原因，导致牛樟自然
南 京 林 业 大 学 学 报 ( 自 然 科 学 版 ) 第40卷
成苗困难［2］。因此，牛樟数量极其稀少，已列为台
湾一级保育类植物。
近年来，国内外科研人员对牛樟芝的有效成
分、药理药效和临床试验等方面展开了较深入的研
究，但对牛樟芝的宿主———牛樟，尤其对其育苗技
术的研究甚少。1993年，高毓斌等［3］发现 14 年生
的牛樟发根困难，扦插成活率低; 曾群生［4］用 800
mg /L ABT6处理的扦插苗成活率达 80．6%;周张德
堂［5］则认为用 2 000 mg /L 的 IBA 浸泡 1 s 的枝条
生根率最高(87．0%)。由于牛樟材料稀缺、受季节
影响大且自身的生理特性特殊，导致牛樟扦插季节
短、成活率不高，不能进行大规模的繁育生产。而
成熟的组培快繁技术能快速批量地生产牛樟组培
苗，解决繁育规模小的问题。林新春等［6］以牛樟
体胚为材料，研究了适合牛樟体胚快繁的培养基配
方;刘荣忠［7］和周张德堂［5］则以牛樟茎段为材料，
对牛樟组培快繁体系进行了初步研究。笔者以牛
樟茎段为外植体，探索不同取材季节、消毒方式、激
素配比等因素对牛樟植株再生的影响，旨在构建牛
樟稳定的无性繁殖体系，拯救和扩大牛樟种质资
源，为牛樟的品种改良和遗传转化体系的建立奠定
基础。
1 材料与方法
1．1 供试材料及处理
供试材料采自广州甘蔗研究所湛江甘蔗研究
中心牛樟试验基地的 3 年生牛樟母树。采集健康
母树中当年生、腋芽饱满且未萌发的幼嫩侧枝，除
去叶片并保留 1 ～ 2 cm 的叶柄，切成长4～6 cm 的
茎段，先用洗衣粉溶液浸泡 30 min，再用自来水冲
洗 30 min，然后采用以下 3 种方法进行消毒:
①75%酒精浸泡 30 s后再用 2%次氯酸钙消毒 5 ～
15 min;②75%酒精浸泡 30 s 后再用 0．1% HgCl2
消毒 5 ～ 15 min;③先用 1 000 倍甲基托布津浸泡
10 min，75%酒精浸泡 30 s 后再用 0．1% HgCl2 消
毒 5～ 15 min。消毒处理完后均采用无菌水冲洗
4～6次。两端及叶柄各切去 1 cm，并切成带 1 ～ 2
个腋芽的茎段，接种于诱导培养基上，30 d 后统计
不同消毒处理的污染率和死亡率。
不同季节采集牛樟茎段，按照筛选出的较有效
的消毒方法进行牛樟外植体消毒，30 d 后统计出
芽率、出芽时间、污染率和褐化率。
1．2 培养基的筛选和优化
诱导、增殖和生根的培养基均添加 30 g /L 蔗
糖和 7．5 g /L卡拉胶，pH为 5．8。
1．2．1 茎段诱导培养基
以 MS、1 /2 MS、B5 和 WPS 为基本培养基，不
添加任何激素的条件下进行牛樟茎段诱导试验，筛
选出最佳基本培养基种类。在最佳培养基中添加不
同质量浓度的细胞分裂素 6－BA(0．5～3．0 mg /L) 和
生长素 IBA(0．05 ～ 0．20 mg /L) 进行诱导培养基的
优化试验。每种处理接种 40 个茎段，试验重复 3
次。外植体诱导 30 d 后，统计出芽时间、出芽率、
有效芽( 能继续正常生长发育的芽所占的比例)、
芽增殖系数、芽均高和生长势，再进行综合评分。
1．2．2 增殖培养基
以 MS培养基为有效芽增殖的基本培养基，添
加不同质量浓度的 6－BA(1．0 ～ 2．5 mg /L) 和IBA
(0．05～0．30 mg /L) 进行牛樟芽增殖试验。切取诱
导的芽，接种于不同激素组合的增殖培养基上，每
种培养基接种 40个芽，试验重复 3 次。45 d 后从
120个处理中随机选择 80 个样本统计各试验的新
芽个数、芽均高、愈伤组织情况( 分别以+、+ +、
+++、++++表示愈伤组织小、一般、较大、大且硬等
生长情况) 和生长势。
1．2．3 生根培养基
以 1 /2MS为基本生根培养基，添加不同浓度
的 5号 ABT生根粉和生长素 IBA对生根培养基进
行优化试验。将增殖培养基中 2 ～ 3 cm 带叶片的
小苗接种于不同激素组合的生根培养基上，每种培
养基接种 30株小苗，试验重复 3次，30 d后统一计
算生根段数、生根率、平均根条数、愈伤组织情况和
生长势。
1．3 牛樟再生植株的移栽
将生根的植株先置于大棚炼苗 7 d，再移栽至
栽培基质中并于 5 000～10 000 lx光照下培养，30 d
后调查移栽成活率。
2 结果与分析
2．1 消毒剂和消毒时间对牛樟茎段消毒效果的
影响
不同消毒剂和消毒时间对牛樟外植体的消毒
具有较明显的影响( 表1)。2%次氯酸钙处理 8 ～
20 min 时消毒效果均不理想，污染率高于 85%。
0. 1% HgCl2 的消毒效果明显优于 2%次氯酸钙，外
植体污染率均随着 HgCl2 消毒时间增加而下降，死
亡率随着 HgCl2 消毒时间增加而增加。当 0． 1%
HgCl2 处理时间相同时，使用甲基托布津处理的消
毒效果明显比未使用的好，外植体污染率明显降
低，而死亡率却没有明显差异，可见甲基托布津明
46
第 4期 官锦燕，等:牛樟的组织培养和植株再生
显地增强了牛樟外植体消毒效果。由表 1可得出，
1 000 倍甲基托布津浸泡 10 min、75%酒精浸泡
0. 5 min 和 0．1% HgCl2 消毒 10 min这 3 种消毒方
式配合使用的消毒效果最佳。
表 1 不同消毒剂及消毒时间对茎段消毒的影响
Table 1 Effects of different disinfectants and sterilizing
times on disinfectant effects of stem
处理时间 /min
sterilizing times
1 000倍
甲基托布津
topstn-
methy
75%
酒精
alcohol
0．1%
HgCl2
mercuric
chloride
2%
次氯酸钙
calcium
hypochlorite
污染率 /
%
contam-
ination rate
死亡率 /%
death
rate
－ 0．5 － 8 100．00 －
－ 0．5 － 10 100．00 －
－ 0．5 － 12 100．00 －
－ 0．5 － 15 95．00 10．23
－ 0．5 － 20 85．00 11．76
－ 0．5 5 － 80．22 0
－ 0．5 8 － 59．75 1．56
－ 0．5 10 － 38．67 3．83
－ 0．5 12 － 30．54 6．25
－ 0．5 15 － 22．23 10．45
10 0．5 5 － 62．23 0
10 0．5 8 － 48．50 1．89
10 0．5 10 － 22．92 3．43
10 0．5 12 － 20．07 7．65
10 0．5 15 － 18．40 10．90
2．2 取材季节对牛樟芽诱导的影响
取材季节对牛樟芽的诱导具有较明显的影响
( 表2)。从表 2可知:春季和初夏的出芽率均明显
高于秋冬季节，污染率和褐化率明显低于秋冬季
节，出芽时间也明显较短。春季刚抽出新枝条，没
有吸附太多的杂菌且新陈代谢旺盛，最适合取材;
高温的夏季使牛樟生长旺盛，迅速抽出大量侧枝，
杂菌较少，也是取材的较好季节。秋冬季节牛樟枝
条和叶片逐渐成熟，有些芽点已处在半休眠状态，
且吸附较多杂菌，该季节采集的材料即使前期出芽
不污染，但 1～2个月后仍有大量真菌逐渐长出，说
明枝条自身携带有内源菌，不适合作为外植体，即
秋冬季不适合采集外植体。
表 2 不同采集季节对芽诱导的影响
Table 2 Effects of different collection season
on the induction of axillary buds
取材时间
collection
time
出芽率 /%
budding
rate
污染率 /%
contam-
ination rate
褐化率 /%
browning
rate
出芽时间 /d
days before
sprouting
春季(3—4月) 85．56 23．74 2．01 11～15
初夏(6月) 80．05 20．15 3．87 14～18
秋季(9—10月) 62．91 39．73 20．34 16～22
初冬(12月) 12．74 86．04 42．62 ＞20
2．3 基本培养基对牛樟茎段芽诱导的影响
不添加任何激素的 MS、1 /2MS、B5 和 WPS 均
能诱导腋芽萌发，但在不同培养基中，牛樟茎段出
芽率和萌芽后生长势均有差异( 表3)。从表 3 可
知:MS培养基中牛樟茎段出芽时间 20～23 d，出芽
率为 52．3%，30 d芽均高为(0. 83±0. 02)cm，各项
指标均高于其他培养基，且芽体比较粗壮呈翠绿
色，叶片正常伸展。分析不同基本培养基对茎段诱
导效果可知:MS与其他培养基相比，MS上牛樟茎段
出芽率和出芽时间差异达显著水平(P＜0. 05) ，30 d
芽均高差异达极显著水平(P＜0. 01) ，该培养基对牛
樟芽的诱导和生长均有明显的促进作用。因此，MS
培养基可作为牛樟茎段诱导的首选基本培养基。
表 3 不同的基本培养基对茎段芽诱导的影响
Table 3 Effects of different basic mediums on the
induction of stem
培养基
media
样本数
sample
number
出芽时间 /d
days before
sprouting
出芽率 /%
budding
rate
30 d芽均高 / cm
average bud
height after 30 d
芽的长势
description
of bud
MS 83 20～23 52．3 aA 0．83±0．02 aA 较粗壮、翠绿
1 /2MS 78 23～26 46．8 abA 0．54±0．04 bcAB 正常
B5 86 22～25 44．0 bAB 0．71±0．08 abAB 较细弱
WPS 71 23～27 34．9 cB 0．37±0．04 cB 较细弱、黄
注:样本数= 接种数－污染数;出芽时间为茎段接种到腋芽萌发的天数;同列不同大
小写字母分别表示差异达极显著(P＜0．01) 和显著水平(P＜0．05)。下同。Sample number
is incubation number minus contamination number． Sprouting time refers to the days from incu-
bation to budding． Different letters in same column show very significant differences (capital
letters，P＜0．01)and significant differences (small letters，P＜0．05)among different basic
medias． The same below．
图 1 牛樟植株再生体系几个连续阶段的培养情况
Fig．1 The cultivation of plant regeneration
system for continuous phase
注:a．外植体诱导 4周，explant induced for 4 weeks;b．诱导的
芽在 增 殖 培 养 基 上 培 养 5 周，induced shoots culture on
proliferation medium for 5 weeks;c．丛生芽在增殖培养基上培养
12周，multiple shoots culture on proliferation medium for 12 weeks;
d．小苗在壮苗培养基中培养 4 周，seedlings culture on strong
seeding medium for 4 weeks;e．健壮苗在生根培养基培养 4 周，ro-
bust seedlings culture on rooting medium for 4 weeks;f．生根苗在基
质中移栽 5周，rooted seeds transplanted on substrate for 5 weeks．
2．4 不同激素组合对牛樟茎段芽诱导的影响
外植体在诱导培养基中培养 11～19 d 后，鳞芽
萌发并逐渐抽长;25～35 d 后，有新叶长出( 图1a)。
56
南 京 林 业 大 学 学 报 ( 自 然 科 学 版 ) 第40卷
从表 4可知，在 MS基本培养基中添加不同浓度的
6－BA 和 IBA，均可明显提高牛樟芽的诱导分化能
力。与单一基本培养基相比( 表3) ，激素培养基的
茎段诱导出芽率、芽平均高度增加，出芽时间缩短，
但芽基部均有愈伤组织。7 种培养基的培养结果
表明:在中低浓度的6－BA(0．5 ～ 1．5 mg /L) 处理
下，牛樟外植体出芽快、出芽率较高且芽体长势好，
有利于牛樟茎段的成功诱导;而较高浓度的6－BA
(2．0～3．0 mg /L) 反而对茎段诱导有一定的抑制作
用，出芽慢、出芽率较低、愈伤组织多、长势差且有
玻璃化现象。当 6－BA /IBA 用量比为 10 ～ 20 时，
株高和有效芽比率均较高，且芽体粗壮长势良好。
对不同培养基的芽诱导效果进行显著性分析表明:
2号培养基诱导的出芽率与其他 6 种培养基诱导
的差异显著，30 d 芽均高和有效芽差异极显著，且
芽体健壮、长势好、愈伤组织块小( 表4)。因此，
MS+ 6－BA (1．0 mg /L)+ IBA (0．1 mg /L) 是牛樟
茎段诱导的最佳培养基配方。
表 4 不同激素组合对茎段芽诱导的影响
Table 4 Effects of different hormone combinations on buds’induction induced from stems
序号
No．
激素组合 /
(mg·L－1)
hormone
combinations
样本数
sample
number
出芽时间 /d
day before
sprouting
出芽率 /%
germination
rate
30 d芽均高 / cm
average
bud height
after 30 d
有效芽 /%
effective
buds
愈伤组织
growth
of callus
芽的长势
description of bud
1 6－BA 0．5+ IBA 0．1 69 11～13 81．4 bA 2．02±0．05 bB 87．2 bBC + 芽细弱，伸长较快，长势较好
2 6－BA 1．0+IBA 0．1 75 12～13 88．2 aA 2．51±0．08 aA 96．9 aA + 芽健壮，伸长快，长势好
3 6－BA 1．5+IBA 0．1 77 12～14 83．8 abA 2．23±0．05 bAB 92．5 aAB ++ 芽粗壮，伸长快，长势较好
4 6－BA 2．0+IBA 0．1 60 14～16 73．5 cB 2．21±0．02 bAB 84．3 bcCD ++ 芽细长，伸长一般，长势一般
5 6－BA 2．0+IBA 0．2 80 15～18 72．1 cdB 2．18±0．03 bAB 87．6 bBC +++ 芽矮小，伸长缓慢，长势差
6 6－BA 2．5+IBA 0．1 88 16～18 60．9 eC 1．64±0．08 cC 52．6 dE +++ 芽短小，伸长慢，长势差
7 6－BA 3．0+IBA 0．2 56 17～19 67．8 dB 1．57±0．07 cC 40．6 fF ++++ 芽短小，微玻璃化，长势差
2．5 不同激素配比对牛樟芽增殖的影响
诱导出的牛樟芽在增殖培养基上培养 30 d
后，可分化出丛生芽( 图1b) ，再经过多次转接，丛
生芽分化出大量丛芽( 图1c)。6－BA 和 IBA 的不
同浓度配比对牛樟丛芽增殖的影响较大( 表5)。
表 5 不同激素组合对芽增殖的影响
Table 5 Effects of different hormone combinations on cluster buds proliferation
序号
No．
激素组合 /
(mg·L－1)
hormone
combinations
增殖系数
multiplication
coefficient
继代 3次后
芽均高 / cm
bud height
after subculture
for 3 times
愈伤组织
growth of
callus
芽的长势
description
of bud
1 6－BA 1．0 + IBA 0．1 1．28±0．02 fD 3．23±0．10 aA + 芽健壮，叶片嫩绿，继代多次后不易褐化
2 6－BA 1．5 + IBA 0．05 5．21±0．19 aA 1．92±0．04 dD 无 芽细弱，细长，继代多次后不易褐化
3 6－BA 1．5 + IBA 0．1 4．29±0．10 bB 2．68±0．01 bB + 芽健壮，叶片翠绿，继代多次后少量褐化
4 6－BA 1．5 + IBA 0．2 2．76±0．03 dC 2．10±0．05 dCD ++ 芽一般，老叶变黄，继代多次后轻度褐化
5 6－BA 2．0 + IBA 0．1 3．38±0．19 cC 2．35±0．03 cC + 芽一般，叶片翠绿，继代多次后轻度褐化
6 6－BA 2．0 + IBA 0．2 3．03±0．18 cdC 2．04±0．05 dCD ++ 芽健壮、叶片黄绿，继代多次后中度褐化
7 6－BA 2．0 + IBA 0．3 1．89±0．06 eD 2．01±0．05 dCD +++ 新叶干枯、脱落，继代多次后中度褐化
8 6－BA 2．5 + IBA 0．1 4．15±0．13 bB 2．12±0．06 cdCD + 芽健壮，微玻璃化，继代多次严重褐化
9 6－BA 2．5 + IBA 0．3 2．84±0．06 cdC 1．97±0．06 dD +++ 掉老叶，微玻璃化，继代多次严重褐化
注:样本数为80。The sample number is 80．
从表 5可知，6－BA 与 IBA 浓度比越大，芽的
增殖率越高，但芽体较细弱;IBA 浓度越高，愈伤组
织越大，抑制苗的增殖和生长。当 6－BA与 IBA浓
度比为 10～20(6－BA质量浓度 1．5～2．0 mg /L、IBA
质量浓度 0．1 ～ 0．2 mg /L) 时，牛樟芽体生长正常，
叶片嫩绿，增殖系数较高，多次继代后轻度褐化。
对不同激素配比处理下丛芽增殖效果进行显著性
分析表明:3号培养基中芽增殖系数和继代 3次后
株高与4～9号培养基( 表5) 相比差异达极显著水
平，芽生长健壮叶片翠绿、无老叶脱落、新叶干枯和
玻璃化现象。1号培养基株高最高，但增殖系数最
低;而2号培养基增殖系数最大，但芽细弱矮小，两
66
第 4期 官锦燕，等:牛樟的组织培养和植株再生
者均不适合牛樟丛芽的增殖培养。因此，牛樟增殖
的最佳培养基配方为 MS + 6－BA (1．5 mg /L)+
IBA (0. 1 mg /L)。
2．6 不同激素配比对牛樟组培苗生根的影响
经壮苗的再生植株( 图1d) 在生根培养基中培
养 7 d后，开始有白色的根出现;培养2 ～ 3 周后再
生植株基部长出大量白色粗壮的根，且植株叶片增
多( 图1e)。不同浓度的激素组合对牛樟组培苗生
根影响较大( 表6)。从表 6 可知，低浓度的 ABT
或 IBA均比较容易诱导牛樟苗生根，且生根率在
90%以上; 而较高浓度的ABT 和 IBA 均严重抑制
牛樟组培苗生根乃至枯萎死亡。IBA 协同 ABT 生
根粉，使牛樟组培苗的根系发育良好，茎干粗壮高
大、叶片茂盛且翠绿，比单独使用 ABT 生根粉或
IBA的效果好。对不同激素配比处理下牛樟组培
苗生根效果进行显著性分析表明: 添加ABT 与
IBA的 5号培养基中苗生根率、平均每株根数与苗
高与其他培养基相比差异达极显著水平，且几乎没
有愈伤组织。因此，1 /2MS + ABT (0．20 mg /L)+
IBA (0．05 mg /L)+活性炭 (0．5 g /L) 是该试验中
最佳配方的生根培养基。
表 6 不同浓度的 ABT/IBA组合对组培苗生根的影响
Table 6 Influence of different concentrations of ABT /IBA combinations on rooting of seedlings in vitro
序号
No．
激素组合 /(mg·L－1)
hormone combinations
ABT IBA
生根株数
number of
rooting
生根率 /%
rooting rate
平均每株根数
average root
number
苗高 / cm
height
愈伤组织
growth of
callus
1 0．10 0 20 96．7 abA 5．10 cCD 3．50±0．05 deCD 无
2 0．25 0 20 95．2 bAB 6．30 bB 4．60±0．06 abcAB +
3 0．50 0 20 90．2 cB 4．30 dDE 4．40±0．17 bcABC ++
4 1．00 0 20 0 eD 0．00 fF 0．00±0．00 fE ++++
5 0．20 0．05 20 100．0 aA 7．50 aA 5．20±0．27 aA +
6 0．05 0．20 20 95．7 abAB 5．80 bcBC 4．10±0．09 cdBCD +
7 0 0．25 20 97．4 abA 5．10 cCD 4．90±0．34 abAB +
8 0 0．50 20 89．4 cB 5．10 cCD 4．30±0．10 bcABCD +
9 0 1．00 20 32．8 dC 3．40 eE 3．30±0．19 eD +++
10 0 1．50 20 0 eD 0．00 fF 0．00±0．00 fE ++++
2．7 牛樟再生植株的驯化移栽
生根培养 4 周后的再生植株，长势健壮，叶色
翠绿，进行驯化移栽。再生植株于大棚内炼苗 7 d
后，用自来水冲洗干净培养基，再用多菌灵 1 000
倍液消毒，移栽于灭菌的泥炭、沙子、珍珠岩质量比
为1 ∶1 ∶1的基质中，并用薄膜覆盖，喷雾保持湿度。
30 d后，苗茎干和叶片变浓绿，植株变粗壮，根系
愈加发达，移栽成活率为 62%( 图1f)。
3 讨 论
研究发现，采集于春夏两季的牛樟外植体，其
出芽率、污染率、出芽时间及褐化率均比在秋冬季
节采集的要理想很多。这可能由于牛樟是热带植
物，春夏两季的外植体生命力旺盛，外界杂菌污染
较少，适合取材;秋季虽然采集的是二次抽梢的嫩
枝茎段，但气温降低，外植体生理代谢活动减弱;冬
季外植体逐渐成熟老化，且携带内源菌不利于外植
体的采集，这与对美国枫香［8］和雪落樱［9］的研究
结果相似。
牛樟属木本植物的鳞芽裸露在外，消毒比较困
难。试验发现，先用 1 000 倍甲基托布津消毒 10
min，再用酒精消毒 30 s，最后用 0．1% HgCl2 消毒
8～10 min的消毒方式能有效地控制外植体污染，
污染率和死亡率明显低于其他消毒方式。这可能
由于甲基托布津是一种广谱性的内吸性杀菌剂，被
植物吸收后转化为多菌灵，对真菌的消毒效果较
强;而HgCl2 对细菌的消毒能力比真菌强。两者配
合使用能有效地杀死真菌细菌，效果优于单一消毒
剂。另外，需严格控制消毒剂的浓度和消毒时间，
防止杀死外植体细胞，影响诱导率。
牛樟增殖的代数会影响牛樟的增殖系数，随着
继代次数增加，不定芽的增殖率呈递增趋势，但继
代到一定代数后，不定芽质量逐渐下降，出现玻璃
化苗。邹永梅等［10］在北美悬铃木的组培研究中也
发现类似现象，认为主要是由细胞分裂素在植物细
胞内的积累所致。此次研究发现牛樟继代 3代后，
新叶容易出现叶片卷曲、变厚、褐化并逐渐脱落的
现象，严重时可导致芽体褐化，这可能也与 6－BA
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南 京 林 业 大 学 学 报 ( 自 然 科 学 版 ) 第40卷
在植株细胞内的积累有关。笔者发现通过采用植
株每继代 3次，6－BA质量浓度下降 0．1 mg /L的方
法可有效地解决此问题，同时增殖系数会逐渐降低
但出现玻璃化苗的概率也随之下降。
龚峥等［11］、周丽华等［12］研究表明: 较高质量
浓度(＞1．5 mg /L) 的生长素有利于提高樟树的生
根率，而脑樟却在低质量浓度(0．2mg /L) 或不添加
生长素的情况生根率高。可见，樟科中不同品种的
樟树生根所需激素浓度差异较大。该试验发现牛
樟在低质量浓度(0 ～ 0．5 mg /L) 生长素作用下生
根率较高，但稍高质量浓度(1 ～ 1．5 mg /L) 生长素
不仅抑制苗生根，还导致叶片变黄脱落最后死亡，
这与周张德堂［5］和刘荣忠［7］的研究结果不完全一
致，可能与研究材料及季节有关。IBA 和 ABT 的
配合使用有利于提高牛樟的生根率，在邓恩桉的生
根研究［13］中也有相似的结论。而牛樟生根苗在移
栽过程中出现容易褐化、成活率不高的现象，其原
因还需要进一步分析。
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( 责任编辑 郑琰邁)
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