全 文 ：北方园艺 2007(9):193 ～ 194 ·生物技术 ·
第一作者简介:张晓申(1976-),男,河南镇平人 ,助理研究员,主要
研究方向为林果花卉组织培养。
基金项目:河南省重点科技攻关资助项目(0623010500)。
收稿日期:2007-04-06
蝴 蝶 石 斛 的 组 培 快 繁 技 术 研 究
张 晓申 , 王慧 瑜 , 李 晓青
(郑州市农林科学研究所生物技术中心,河南 郑州 450005)
　　摘　要:以蝴蝶石斛的嫩茎为外植体研究其组培快繁技术。结果表明:芽的最佳诱导培养基
为KC+BA 1.0mg/L+NAA 0.3 mg/L+100 mL/L 的椰乳;小苗的最佳增殖培养基为 KC+BA
1.0mg/L+NAA 0.5 mg/ L+100 mL/L 的椰乳 ,增殖系数达到 10.0左右;最佳生根培养基为
KC+NAA 0.3mg/L+100 g/ L香蕉泥+1 g/ L活性炭 ,生根率达到 98%。移栽基质为水草 ,移栽
成活率达到 95%以上。
关键词:蝴蝶石斛;组织培养;快繁
中图分类号:S 682.31　文献标识码:A　文章编号:1001-0009(2007)09-0193-02
　　石斛是兰科石斛属(Dendrobium)多年生草本植物 ,
并与卡特兰 ,蝴蝶兰 ,万代兰并列为观赏价值最高的四
大观赏兰类[ 1] 。秋石斛由于其花形似蝴蝶 ,因此又称为
蝴蝶石斛(D.phalanopsis)。秋石斛的原种分布在澳大
利亚 、巴布亚新几内亚及太平洋一些岛屿上 ,它们的共
同特点是均在秋季开花。经过人类的杂交培育 ,如今秋
石斛的品种几乎全年有花 ,一年四季均有不同的开花品
种供应花卉市场[ 2] 。由于秋石斛养殖管理简单 ,一般春
节开花 ,繁殖方式以分株繁殖 、无菌播种和原球茎增殖 ,
试验以红色蝴蝶石斛的嫩茎为材料 ,进行丛生芽方式进
行增殖 ,保持了原品种的特征特性 ,目前未见报道 ,为秋
石斛繁殖增加了一条途径。
1　材料与方法
1.1　试验材料
在蝴蝶石斛播种苗的红色品种开花之后的生长季
节 ,采取新抽生的5 ～ 10 cm高的嫩茎为外植体。
1.2　方法
1.2.1　外植体的消毒　将外植体剥去外面叶片 ,在无菌
条件下 ,先用70%的酒精消毒 30 s ,再用 0.1%的升汞消
毒 ,消毒时间选择 1、2 、3 、4、5 min ,切取带腋芽茎段接种
到启动培养基上 ,每瓶接种 1个芽 ,每处理10瓶 ,重复 2
次 ,生长 20 d ,调查成活率。
1.2.2　诱导培养基　诱导培养基的选择进行正交试验 ,
基本培养基选择 MS 、KC 、1/2MS;细胞分裂素 BA选择
0.5、1.0 、1.5 mg/L;生长素 NAA 选择 0.1、0.2 、
0.3mg/L。每瓶接1个芽 ,每处理接种 20个芽 ,重复 2
次 ,生长30 d统计芽的诱导率 ,并进行极差分析 ,选择最
佳启动培养基。
1.2.3　增殖培养基　以 KC为基本培养基 ,对增殖进行
正交试验设计 ,细胞分裂素BA选择0.5 、1.0 、1.5mg/L;
生长素 NAA选择 0.1 、0.3 、0.5 mg/L;生长素 IBA选择
0 、0.1 、0.3mg/L ,每瓶接种 5个芽 ,每处理10瓶 ,重复2
次 ,生长30 d ,调查增殖系数 ,并进行极差分析。
1.2.4　生根培养基　将丛生芽分切成单芽 ,接种到以
KC为基本培养基 ,附加不同浓度的生长素上 ,生长30 d ,
调查平均生根率 ,平均根长和平均苗高。每处理 10瓶 ,
每瓶接种 5个芽 ,重复 3次。
1.2.5　移栽　试管苗生长到4 cm左右高 ,根长3 cm左
右 ,叶片3片以上 ,即可进行移栽。移栽基质为水草 ,移
栽 30 d后 ,调查移栽成活率。
1.2.6　培养条件　诱导培养基和增殖培养基都附加
100ml/ L椰乳 ,生根培养基附加100 g/L 香蕉泥和1 g/ L
的活性炭 ,以上培养基均附加白砂糖 20 g/ L , 琼脂
6.5 g/ L ,培养基pH 值5.5。光照强度 1 500 Lx ,光照时
间 12 h/d ,培养温度为(25±2)℃。
2　结果与分析
2.1　不同消毒时间对蝴蝶石斛成活率的影响
　　表 1　不同消毒时间对蝴蝶石斛成活率的影响
处理组合 消毒时间/ min 成活率/ %Ⅰ 成活率/ %Ⅱ 成活率/ %Ⅰ+Ⅱ
1 1 20 30 25.0
2 2 60 55 57.5
3 3 80 85 87.5
4 4 70 60 65.0
5 5 45 50 47.5
　　对蝴蝶石斛的嫩茎进行消毒杀菌 ,试验在相同的酒精
处理后 ,在不同的升汞消毒时间下 ,外植体的成活率不一
样。试验重复 2次 ,从表 1可以看出 ,随着升汞消毒时间
的延长 ,芽的成活率不断提高 ,当升汞消毒 3min时 ,成活
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率最高达 87.5%,再随时间增加 ,成活率呈下降趋势。因
此 ,蝴蝶石斛外植体的升汞最佳消毒时间为3 min。
2.2　诱导培养基的筛选
对蝴蝶石斛诱导培养基的筛选 ,采用正交极差分
析 ,基本培养基选用了 3种 ,细胞分裂素选用 3个水平 ,
生长素选用了 3个水平。从表 2试验结果可以看出 ,对
蝴蝶石斛芽诱导影响最大的是基本培养基 ,其次是细胞分
裂素BA ,最弱的是生长素NAA 。在观察中发现 ,带腋芽
茎段接入培养基中10 d后 ,芽开始萌动 ,20 d后已有2个
叶片的小苗形成。蝴蝶石斛芽诱导的最佳培养基是KC+
BA 1.0mg/L+NAA 0.3mg/L+100ml/L 的椰乳。
表2　基本培养基 、BA 、NAA对蝴蝶石斛芽诱导的影响
处理组合 基本培养基 BA/mg·L-1 NAA/mg·L-1 平均诱导率/ %
1 MS 0.5 0.1 53.0
2 MS 1.0 0.2 76.0
3 MS 1.5 0.3 56.0
4 KC 0.5 0.2 74.5
5 KC 1.0 0.3 81.0
6 KC 1.5 0.1 58.0
7 1/ 2MS 0.5 0.3 42.0
8 1/ 2MS 1.0 0.1 62.0
9 1/ 2MS 1.5 0.2 48.0
K1 185.00 169.50 163.0
K2 213.50＊ 219.00＊ 198.50＊
K3 152.00 162.00 179.00
X1 61.67 56.50 54.33
X2 71.17＊ 73.00＊ 66.17＊
X3 50.67 54.00 59.67
R 20.50＊ 19.00 11.84
2.3　增殖培养基的筛选
　　表 3　BA 、NAA 、IBA对蝴蝶石斛增殖的影响
处理组合 BA/mg·L-1 NAA/mg·L-1 IBA/ mg·L-1 平均增殖系数
1 0.5 0.1 0 3.7
2 0.5 0.3 0.1 4.1
3 0.5 0.5 0.3 4.7
4 1.0 0.1 0.1 8.0
5 1.0 0.3 0.3 9.2
6 1.0 0.5 0 10.8
7 1.5 0.1 0.3 9.3
8 1.5 0.3 0 8.9
9 1.5 0.5 0.1 7.5
K1 12.50 21.00 23.40＊
K2 28.00＊ 22.20 19.60
K3 25.70 23.00＊ 23.20
X1 4.17 7.00 7.80＊
X2 9.33＊ 7.40 6.53
X3 8.57 7.67＊ 7.73
R 5.16＊ 0.67 1.27
　　增殖系数影响组织培养的速度和质量 ,试验采用三
因素三因子正交试验对蝴蝶石斛的增殖进行研究 ,基本
培养基采用 KC ,激素种类选择 BA 、NAA 、IBA ,每种激
素选择3个水平 ,共9个组合 ,重复2次 ,接种30 d后 ,调
查增殖系数 ,取平均值 ,并进行极差分析。从表 3调查
结果可以看出 ,对蝴蝶石斛增殖影响最大的因素是BA ,
其次是 IBA ,最弱为 NAA 。当BA浓度为1.0mg/L 时 ,
增殖系数最大 , IBA 选择 0 mg/L 最好 ,NAA 最适浓度
为 0.5 mg/ L ,增殖系数最高平均达 10.4。因此 ,蝴蝶石
斛增殖的最佳培养基为 KC+BA 1.0 mg/L +NAA
0.5mg/L+100ml/L的椰乳。
2.4　生根培养基的筛选
当蝴蝶石斛增殖到一定的量时对其进行生根 ,生根
培养基选择 KC为基本培养基 ,附加香蕉泥 100 g/ L ,生
长素选择 NAA和 IBA ,分别对蝴蝶石斛的生根进行研
究。从表 4可以看出 ,NAA对蝴蝶石斛的生根效果比
IBA好 ,并且都随浓度的增大 ,生根率不断提高 ,生根条
数也增加 ,平均株高也呈递增趋势。蝴蝶石斛的最佳生
根培养基为 KC+NAA 0.3 mg/L +100 g/L 香蕉泥+
1 g/L的活性炭。
　　表 4　　　NAA 、IBA对蝴蝶石斛生根的影响
处理
组合
NAA
/mg·L-1
IBA
/ mg·L-1
平均生
根率/ %
平均生根
条数/条
平均根
长/cm
平均株
高/cm
1 0.1 0 75.5 2.5 2.3 2.2
2 0.3 0 86.0 3.2 2.2 3.5
3 0.5 0 98.0 3.5 2.8 3.7
4 0 0.1 40.5 1.8 2.0 2.1
5 0 0.3 62.5 2.4 2.2 2.3
6 0 0.5 68.5 2.6 2.4 2.9
2.5　移栽
当蝴蝶石斛的试管苗生根 30 d后 ,对蝴蝶石斛试管
苗进行驯化移栽 ,首先将水草用清水浸泡 2 h ,然后对其
进行脱水甩干 ,最后用甩干的水草将洗净的蝴蝶石斛试
管苗根部裹紧栽入育苗盘内 ,定期进行浇水 ,生长 30 d ,
调查成活率 ,经调查成活率达到95%以上。
3　小结
研究对红花蝴蝶石斛的组织培养进行了研究 ,主要
是丛生芽的增殖方式 ,这在秋石斛的组织培养中未见报
道 ,对于非常有观赏价值的蝴蝶石斛采用这种方法进行
快速繁殖是很有效的 ,较好地保持了原物种的特征特
性。研究探索出红花蝴蝶石斛的芽的最佳诱导培养基
为 KC+BA 1.0mg/L+NAA 0.3mg/L+100ml/L的椰
乳;小苗的最佳增殖培养基为KC+BA 1.0mg/ L+NAA
0.5mg/L+100ml/L的椰乳 ,增殖系数达到 10.0左右;
最佳生根培养基为KC+NAA 0.3 mg/ L+100 g/ L香蕉
泥+1 g/L活性炭 ,生根率达到 98%。移栽基质为水草 ,
移栽成活率达到95%以上。
参考文献
[ 1] 　卢思聪.中国兰与洋兰[ M] .北京:金盾出版社, 1994:90.
[ 2] 　胡松华.热带兰花[ M] .北京:中国林业出版社, 2002:93.
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