全 文 ：介绍一 种单胞藻的快速定量方法
养殖系 海养专业 陈明耀 廖玉钊 .郭斯兴二 余手 .”
在马氏珠母贝 、 翡翠贻贝… …等贝类的人工育苗生产中 , 投喂的单胞藻饵料 量 是 否 适
宜 , 对育苗效果影响很大 。 投饵量过少 , 幼虫生长缓慢 , 严重的逐渐死亡 ; 投饵 量 过 大 ,
幼 虫活动力减弱 , 索饵量减少 , 严重的可造成幼虫大量下沉 、 死亡 。 因此 , 掌握幼虫各发育
阶段对饵料量的要求 , 业根据水质和幼虫生长活动的具体情况 , 进行合理的投饵 , 是育苗工
作中重要的技术环节 。 而准确的投饵量 , 必须建立在对作为幼虫饵料的单胞藻个体数量 ( 浓
度 ) 进行准确测定的基础上 。
最常用的单胞藻的定量方法是使用血球计数板或浮游植物计数玻片进行个体数量测定 。
但这种个体数量测定法手续麻烦 、 费时多 , 在群众性人工育苗生产中难以普遍推广应用 。 目
前在马氏珠母贝等贝类的人工育苗生产中 , 由于没有适宜的定量方法 , 只靠用肉眼观察藻液
的颜色深浅 、 浓淡程度作大概的估计 , 这对有经验的同志来说 , 还可能在一定程度上接近于
实际情况 , 但误差比较大 。而不少同志还没有这样的经验 , 所以无法考虑饵料的浓度 , 只根据
体积量投放饵料 。 由于以上原因 , 造成投饵量不准确 、 不科学 , 影响育苗效果 。 因此 , 研究
一种适于生产中使用的简便而快速的单胞藻饵料定量方法 , 对人工育苗生产具有一定的现实
意义 。 据了解 , 近年来一些单位对此进行了试验研究 。其中有利用色阶进行比色法定量的 , 也
有使用搪瓷量杯或大头针利用透明度法进行定量的 。
遵照伟大领袖毛主席关于 “ 教育必须为无产阶级政治服务 , 必须 同生产劳动相结合 。 ”
的教导 , 我们于一九七四年五 、 六月份在广西东兴珍珠场开门办学期间 , 根据搪瓷量杯定量
方法存在着准确度较差及低浓度藻液不能测定的缺点 。 研究使用 1。。0毫升容量的玻璃量筒 ,
制成定量量筒 , 利用透明度法进行饵料扁藻定量 。 经过三年来在马氏珠母贝的人工育苗中试
验使用 , 初步认为此法简便 、 快速 , 准确度达到生产上的要求 , 适于生产中使用 。 为了互通
情报 , 交流讨论 。 把此方法介绍于下 :
一 、 透明度定量法的原理
水的透明度 , 受悬浮于水中的无机及有机颗粒性物质的影响 。 在静水体中培养单胞藻 ,
. 珍珠养殖进修班工人教师 , 东兴珍珠场技术员。
二珍珠养殖进修班工农兵学员 , 海南岛琼海第一海水养殖场工人 .
” . 珍珠养殖进修班工农兵学员 . 海康县流沙大队珍珠场工人 。
培养液用水经过砂滤或沉淀 , 一般藻液中的无机悬浮颗粒性物质很少 , 影响藻 液 透 明度主
要是藻细胞。 藻液中藻细胞的数量与透明度值有密切关系 : 藻液中藻细胞的数量愈多 , 藻液
的透明度值愈小 ; 藻液中藻细胞的数量愈少 , 藻液的透明度值愈大 。 根据这个关系 , 只要测
定一定数量的藻细胞个数和透明度值的相关数据 , 绘出相关曲线图 , 即可以直接测定其池任
何藻液的透明度值 , 查对出藻细胞数量来 。
二 、 透明度定量方法
1
。 定量量筒的制作
取 1。。0毫升容量的玻璃量筒一个 , 用黑色腊光纸 , 根据国际标准视力表 。 . 3号 “ E ” 字的
规格 (长 、 宽为 24 毫米 , 见图一 ) , 剪成一 “ E ” 字 , 把此 “ E ” 字黑 色面向上贴在 一块 长 、
宽为 30 毫米的正方形白纸上 , 再把这块有 “ E ” 字的小白纸 “ E ” 字面向上贴在玻璃量 筒 的
底部 ( 不是从量筒 口贴进去 , 而是把量筒翻过来 , 贴在底部 ) , 业在纸上涂一层腊 , 防止水
渗透进去 。 这样 , 从量筒 口向量筒底部观察 , 透过底部玻璃可 以看到一个明显的 “ E ” 字 。
此 “ E ” 字是测定透明度值时观察的标志 。
2
。 透明度的测定方法
把需要定量的藻液充分搅拌 , 使藻细胞分布均匀后取样
约 10 0 0毫升· 。 测定者站在靠窗 口光亮处 ( 但不应有直射光直
接照射在定量量筒上 ) , 面对窗 口 , 左手持定量量筒 _ L部 ,
量筒垂直位于体前方 , 量筒 口的高度大约与腰部相等 , 测定
者眼睛可由量筒 口看到量筒底部的 “ E ” 字 。 右手把需测定
的液藻摇动均匀后 , 迅速从量筒壁倒入量筒中 , 同时进行观
察 , 由于藻液慢 `漫加高 , 量筒底部的 “ E ” 字由清楚慢慢变
图 1
国际标准视力表
0
.
3号 “ E ” 字大小规格
为供彻 , 直到 “ E , 字黑 自条极为模糊但整个 “ E ” 字轮廓尚能隐约看见为止 。 此时 , 可从
量筒侧面的刻度 读出藻液高度的数值 , 此即藻液的 “ 透明度值 ” 。 ( 必须注意 , 这不是藻液
由量筒底部到液面的实际高度值 , 而是利用原量筒的刻度来反映液面高低程度的相对值 , 来
代表藻液的 “ 透明度值 ” 。 ) 测定观察时动作要迅速 , 时闻一长 , 由于扁藻有趋光性向量筒
四壁浓集 , 藻细胞分布不均匀 , 致使测定的 “ 透明度值 ” 偏高 。 所以在测定过程中如时间过
长 , 应不时摇动量筒 , 使藻细胞在量筒中分布均匀后再观察 。 每一藻液的测定可反复调节液
面高低 , 直至观察准确为止 。
3
。 藻液中藻细胞数量与藻液 “ 透明度值 ” 相关数据的测定
在扁藻上浮浓集时 , 取此浓藻液约 1 1 0。毫升 , 用血球计数玻片或其他个体计数法 计算出
每毫升藻液中藻细胞的数量 , 最好测定十次以上取其平均值 , 使所测数据尽可能准确 。 再把
此浓藻液逐级稀释成每毫升细胞数为 60 万 、 5 万 、 50 万 、 45 万 、 40 万 、 35 万 、 30 万 、 25 万 、
20 万 、 15 万 、 10 万的浓度 ( 因为扁藻大量生产达到的浓度幅度多在 10 一 60 万个 /毫升之间 ) ,
业分别测定各级浓度藻液的 “ 透明度值 ” , 共获得十 一对相关数值 。
浓藻液稀释时可依下列公式计算 :
稀释 1 0 0 0毫升浓藻液
应加入的过虑水量
委霆委馨万个 /毫升x 1 0 0 0毫升
夏霆象馨万个`毫升 一 1 0 0 0毫升
例如 :测得浓藻液的细胞数量为 67 .5万个 /毫升 , 需稀释为每毫升 60 万个藻细胞的浓度 ,
稀释 1。。。毫升浓藻液需加入的过滤海水量计算如下 :
代入上式 :
67
.
5万个 /毫升 x 10 0 0毫升 , 。 。 。 , `℃匕二之一卜长架斤一泛乌竿兰
~
, 一 1 0 0 0毫升60万个/毫升 ` “ “ , “ ’
= 1 1 2 5毫升 一 2 0 0 0毫升
= 1 2 5毫升
由计算结果 , 把浓度为 67 . 5万个 /毫升的藻液 1 0 0。毫升 , 加入过滤海水 1 25 毫升稀释之 ,
即可获得浓度为 60 万个 /毫升浓度的藻液 。
从 60 万个 /毫升浓度的藻液 , 稀释到 10 万个 /毫升各级的浓度 , 每 1。。。毫升需加入的过滤
海水量 , 列于表一 , 可依表逐级稀释之 。
浓 藻 液 的 浓 度 需 稀 释 的 浓 度 每 1 0 0 0毫升浓藻液需
6 0 万个 /毫升
5 5 ”
5 0 ”
4 5 ”
4 0 ,
3 5 ,
3 0 ,
习5 ,
2 0 ,
1 5 ”
5 5 万个 /毫升
5 0 ,
4 5 ,
4 0 ,
3 5 ”
3 0 ,
2 5 ”
2 0 ,
1 5 ,
1 0 ,
加入的过滤海水量
9 1 毫升
1 0 0 ,
1 1 1 ,
1 2 5 ,
1 4 3 ,
1 6 6 ”
2 0 0 ,
2 5 0 ,
3 3 3 ,
5 0 0 ,
4
. 绘制藻细胞数量和 “ 透明度值” 的相关曲线图
根据测定 出来的藻细胞数量与 “ 透明度值” 的相关数据 , 以纵轴表示细胞的数量 , 横轴
表示 “ 透明度值 ” , 把测定的各对相关数据在这个平面直角坐标 , 定点。 然后把这些点相连
成一曲线 , 即藻细胞数量与 “ 透明度值” 的相关曲线图 ( 图二 ) 。
相关曲线图绘好后 , 我们就可以直接测定任何扁藻藻液的 “ 透明度值 ” , 再从曲线图查
对出与此 “ 透明度值” 相对应的藻细胞数量来 。
藻胞数细量ǎ单位 :万/ 毫升à
图 2
湛江水专 1号扁藻定量量筒藻细胞数量与 “ 透明度值 ” 的相关曲线图
在马 氏珠母贝等贝类的人工育苗生产巾 , 因为投饵量可以有一定的变化幅度 ,所以允许有
一定的变动范围 。 因此 , 在育苗生产中饵料的定量可以不必绘制藻细胞数量与 “ 透明度值 ”
相关 曲线图 , 只要把测定的相关数值列成一表 , 测定时取其相近 的数值即成 ( 见表二 ) 。
表二 湛江水专 1 号扁藻定量量筒藻液的细胞数量和 “ 透 明度值 ” 相关数据表
量筒刻度 ( 代 表 “透明 度值” ) 藻 液 的 细 胞 数 量
””
9 5 0
7 0 0
5 7 5
5 1 5
4 5 0
4 0 0
3 7 0
3 4 0
3 1 0
2 8 5
2 7 0
毫升 1 0 万个 /毫升
1 5 ,
2 0 ,
巧 ”
3 0 ”
3 5 ”
4 0 ”
4 5 ”
5 0 ,
5 5 ”
6 0 ,
三 、 几 点 说 明
1
。 定量量筒的制作 。 藻液中藻细胞数量与藻液 “ 透明度值 ” 相关数据的测 定 比 较 麻
烦 , 一般需要半天的时间 。 不同的定量量筒 , 由于量筒的规格 、 玻璃的颜色与厚度 、 量筒底
5 6
部玻璃的凸起程度等方面存在着差异 , 所以 , 每一个定量量筒都必须作一次相关数据的测定 ,
绘出相关曲线图或列出相关数据表 , 才能使用 。 一个定量量筒的相关曲线图 , 不适用于另一
个定量量筒。
2
. 利用测定藻液 “ 透明度值 ” 对单胞藻进行定量的方法 , 操作简单 , 快 速 , 可 以 在
二 、 三分钟内把藻细胞数量测定出来 , 适于生产中使用 。
3
. 利用测定藻液 “ 透明度值 ” 对单胞藻进行定量的方法 , 其准确度的高低 , 决定于测
定人员 的熟练程度 。 关键的是观察 “ E ” 字达到止点时模糊程度的标准必须很 好 掌 握 。 所
以 , 测定人员最好相对固定 。 业应该参加相关数据的测定及制表工作 , 使测定人员掌握相关
数据测定达到止点时 “ E ” 字的模糊程度 , 以便在后来的测定中保持同一的标准 。 只要使用
熟练 , 其准确度完全可以达到育苗生产的要求 。
4
. 使用 1 0。。毫升容量的玻璃量筒作定量量筒 , 主要是利用量筒壁上的现成刻度 , 不需
经什么加工 。 如果有条件 , 也可考虑用普通玻璃管按实际高度作刻度 , 测定 出来的就是真正
的透明度值。 此外 , 定量量筒上还可 以考虑安装上排灌藻液的小管道 , 使藻液注入和排出方
便 , 能更好调节液面高低 , 观察更容易准确一些 。
扁藻培养的一些问题及其处理’
广西 东兴珍珠场
扁藻是一种具有四根鞭毛的单细胞绿藻 。 我场于一九六五年用作马 氏珠母贝幼虫人工食
料。 经过多年的实践 , 它是马氏珠母贝浮游幼虫的良好食料之一 。 随着我国海产动物养殖业
的发展 , 扁藻已被用于翡翠贻贝、 紫贻贝及海参幼虫的食料 。 如何培养好 ( 尤其 大 面 积 培
养 ) 扁藻 , 已成为 同行者共同关心的问题 。 遵照毛主席 “ 在生产斗争和科学实验范围内 , 人
类总是不断发展的 , 自然界也总是不断发展的 , 永远不会停止在 一个水平上 。 因此 , 人类总
得不断地总结经验 , 有所发现 , 有所发明 , 有所创造 , 有所前进 ” 的伟大教导 , 我们在扁藻
培养高产和防止敌害方面做了一些工作 , 初步取得一些效果 。 为了互通情报 , 交流经验 , 现
将一些体会总结如下 , 以供参考 。 由于水平有限 , 错误在所难免 , 恳望同志们指正 。
一 、 藻体 “ 老化” ( 沉淀 、 附壁 )
在扁藻培养中常常遇到藻体 “ 老化” 问题 , 所谓藻体 “ 老化 ” 通常是指培养液无发现其
. 本文是由黄惠全执笔整理 , 曾在广东湛江水产专科学校海养专业珍珠班学员来我场实行开门办 学 中
交流 .