全 文 ：兰州大学学才民( 自然科学版 》
24 ( 1 ): 1 0。一 21 0, 19 5 5 研 究 简 究
伊贝母组织培养中体细胞胚的形成及细胞学观察 `
王斋山 杨汉民 王亚馥 李 芳
( 兰 州 大 学 生 物 系 )
贾 廷 耀
( 甘肃省科 学院 生物 研究所 )
伊贝母是百合科贝母属多年生草本植物 , 是常用名贵稀有中药材之一 , 用种子繁殖
约需 5 一 6 年 , 用鳞茎繁殖 ,系数也只有 1 . 5一 1 . 6 . 为加速伊贝母的繁殖 , 育廷耀 、 郝玉
蓉等 〔 ’ 1 已用组织培养方法获得了再生植株 ,但体细胞胚形成的研究在 国内外至今 尚未见
报导 . 诱导胚状体在理论上对于研究细胞分化和形态发生机理以及基因表达 的调节控制
有重要意义 , 在实践上 , 利用胚状体发生 具有数量多 、 速度快 、 成苗率高 、 遗传性稳定
等特点 , 可作为建立优 良无性繁殖系的手段 , 所 以我们于 1 9 8 6一 1 9 8 7年对此 进 行 了 研
究 , 现将结果简要报告如下 :
供试材料为本系生物园栽种的 3 一 4 年生伊贝母 ( F r i 才i l l a r i a e P a l l`d `f l o r a e ) 鳞
茎 . 将鳞茎的鳞瓣册下 , 经表面消毒后 , 切成 4 一 5 毫米见方 , 2 一 3毫米厚的小块 ,
接种在 固体培养基上 .
基本培养基为M S , 附加不 同的生长素 、 激动素和有机物组成 5 种培 养 基 : ( 1 )
N A A I 毫克 /升 + kt 0 . 5毫克 /升 . ( 2 ) N A A I 毫克 /升 + 6 一 B A Z 毫 克 / 升 . ( 3 )
2
,
4 一 D l 毫克 /升 、 · kt o . 5毫克 /升 . ( 4 ) 酵 母 汁 1 0 0 0 毫 克 /升 + 2 , 4 一 D l 毫
克 /升 . ( 5 ) 无生长素和激 动 素 . 蔗糖浓度为 4 肠 , 琼 脂 0 . “ 肠 , pH S . 6一 5 . 8 . 材
料置 25 一 28 ℃下培养 , 每天 日光灯照射 8 一 1 0小时 .
培养 15 一 20 天时 , 在第 3 种培养基上长出淡黄 色、 质 地 松软的愈伤 组 织 . 在第 4
种培养基上的组织块 变 褐 , 以后枯死 . 在第 5 种培养基上未 形 成愈伤组织 . 而在第一
和第二种培养基上则形成两种愈伤组织 : 一种是白色 、 结构致密 , 表面有很多颗粒状夹
起物 , 另一种是黄 白 色 , 略微发绿 , 质 地 松散 易碎 . 将前一种愈伤组织放在实体显微
镜下观察 , 发现有球形胚的形成仁图版 , 1 〕 . 其 后 将这种愈伤组织切成小块转接在同样
组分的培养基上进行扩大培养 , 每隔两天用纳瓦兴 1 液固定一次材料 , 直至第 30 天 . 月J
铁钒苏木精整体染色 , 石蜡切片 ,厚度 1 0林m , O l y m p a s显微镜下观察照相 . 结果表明 ,
转移培养 4 天后 , 在愈伤组织薄壁细 胞 中 出现细胞体积小 、 细胞核大且染色深 , 细胞
质较浓的一些单个细胞 〔图版 , 2 〕, 从以后 的发育看出 , 这就是原始胚性细胞 . 随着它
的分裂 , 还陆续观察到二细胞 、 四细胞及五细胞 团〔图版 , 3一 5 〕. 从第 18 天以后 , 观察
到了体细胞胚发育的各个阶段 , 即球形胚 、 心形胚 、 子叶型胚 以及具胚芽和胚根的极性
, 王星 同志参加 了实验工作 .
本文 19 8 7年 4 月 2 1 日 习允生,】.
DOI : 10. 13885 /j . i ssn. 0455 -2059. 1988. 01. 018
1 1 0兰 州 大 学 学 报 1 98 5年 乌月
1
、 胚性愈伤组 织中产生的球形胚 · X 2 02、 单 个胚 性细胞 ` x1 8 0 3、 二 细胞 住性橱施 团。 x 36。
4
、 四细胞膝性细 胞 团 . X 3 605、 五细胞 胚性细胞 团 , X 380 6 、 球 形胚 , x 1 20 7 、 心 形
胚 . x 1 2 o s 、 子叶形胚 . x 6 o g 、 有胚 芽 ( p l ) 、 胚根 ( R a ) 的完整体加晦仁 、 x 。
体 , 胞 、 长成的 小植林 . x Z (下转 第10 8页〕
1 08 . l大 学 学 报 1 98 8年 3月
表一 样品分析结果 表二 回收率试验结果
沮 J定
结 果( 肠 )
平 均
含 全 ( 肠 )
标 准
偏 差
变化系数 ( 肠 )
样品
名 称
加入把量 ( 微克〕
回 习文
率 ( 肠 )
平 均
回 收率 ( 肠 )
3
.
1 0 3
.
0 3 3
.
8 0 0
.
04
7 3 0 3
.
1 4
3
.
1 2 3
.
02
3
.
0 6 3
.
8 0
I 1 4 0 0
.
01 1 0
.
4
1 0 3
.
1 1 04
.
0
1 0 3
.
31 4 0
.
0
参 考 资 料
〔1 〕 魏复盛等 , 化学试剂 一, ( 29 5 0 ) , 5 2 .
【幻 D . A . J o h n s o n e t a l , T a l a n t a , 2 2 , ( 2 9 7 5) 2 5 3 .
郎 〕 巩玉珍等 , 兰州大学学报 , 化学辑刊 , ( 19 8 3 ) , 1 18 .
〔4 〕 罗宗铭 , 三元络合物及其在分析中的应用 (二 ) (三 ) ,广东韶关市科技交流站
19 7 8年版 2 0一3 2 .
( 上接第 1 1 0 页 )
明显的体细胞 〔图版 , 6 一 9 〕 . 这种在组织培养中体细胞胚发育过程的细胞学观察 , 有的
作者在不同植物中也曾得到类似 结 果 ’ “ 一 弓 ’ . 由此可见 , 在组织培养中体细胞胚和合子
胚经历的发育阶段基本上是相似的 .
伊贝母的正常生长发育需要一个低温过程 . 将处于子叶期的培养物置 8 ℃左右的冰
箱 中 3 一 4 周 , 再转接到 N A A I 毫克 /升 + 1 A A o . 5毫克 /升 十 K t0 . 5毫克 / 升的培养基
上 , 20 天 以后 , 即可分化为具根和叶的小苗 〔图版 , 1 0 1
参 考 资 料
〔 1 〕
〔 2 ]
〔 3 〕 2 1 9 8 3
〔 4 习
郝玉蓉等 , 1 9 8 2, 西北植物研究 , 1 ( 2 ) : 38 一 43 .
张世喻等 , 1 9 5 6 , 植物学报 , 2 5 ( 3 ) : 2 4 1一 2 4 4 .
M a r i o t t i
,
D
.
e t a l
. ,
P l a
n t C e l l T i
s s u e O r g a n C u l t
u r e
1 0 3一 1 1 0 .
N o d
a r , H
,
M
, e t a l
, ,
C r o P S
e i 1 3 1 9 7 5
, 2 1 0一 2 r 6 ,