全 文 ：第 3 2卷
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3 2
第 3 期
No
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3
西 南 师 范 大 学 学 报 ( 自然科学版 )
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l of 黝 u t h、 v es tC川a n No ra nl U i nves r i ty ( Na tur a l 黝 e c ne )
20 0 7 年 6 月
Ju n
.
20 0 7
文宋幼号 : 10 0 0 一 54 7 1《 20 0 7 )0 3 一 0 0 4 8一 0 4
HPL C
一
CL 测定吊石芭苔中石吊兰素的含 t
吴永平 ` , 高智席 ` , 周光明2
遵义师范学院 化学系 , 贵州 遵义 5 630 0 2 ; 2 . 西南大学 化学化工学院 , 重庆 400 7 15
摘共 : 在孩性介质中 , 钥氛络离子的催化作用下 , 石吊兰素对乙睛一 H 2 0 : 化学发光体系有强烈的增敏作用 . 在
H y ep sr il O sD 色谱柱上 , 以乙睛一N , N 一二甲基甲酞胺一。 . 01 mo l/ L 草酸 (体积比 27 , 6 , 67) 为流动相的条件下 ,
实现了对石吊兰素的分离侧定 , 建立了侧定石吊兰素的方法 . 发光强度与石吊兰索的浓度在 。 . 02 ~ 50 m g / m L 范
围内呈线性关系 . 检出限 ( 3a) 为 。 . 01 昭 / m L . 5 次平行侧定的相对标准偏差分别为 1 . 24 %一 1 . 56 % . 应用于吊石
芭苔中石吊兰素的侧定 , 结果满惫 .
关 抽 询 : 商效液相色谱 , 化学发光 , 吊石首苔 , 石吊兰索
中口分类号 : O` 5 2 . ` 3 文橄标识码 : A
吊石首苔 (别名有石虹豆 、 岩泽兰 、 石 吊兰 、 岩虹豆 , 条枝草等 )为苦芭苔科植物吊石芭苔 L sy ion ot su
P au ic fl or o M ax im
. 的干燥全草 , 常绿小灌木 .l[ 2〕 , 附生在岩石壁或树干上 . 本品在贵州系苗族习用药
材 .3[ 们 , 具有祛风除湿 , 化痰止咳 , 祛疲通经的功能 . 主要用于治疗结核病 、 支气管炎 , 疗效显著 , 且无毒无
副作用 . 石吊兰素 ( N ve ad en is n , 别名为岩豆素 )为吊石首苔的主要成分之一比 5· `〕 , 现代药理研究认为 , 石
吊兰素具有良好的止咳 、 抗炎等功效川 , 石吊兰素对多种动物产生降压作用 81[ . 近年来 , 国内外对野生药
用植物吊石芭苔的化学成分的研究的报道很少 z[, s , 6] , 还没有石吊兰素的化学发光的报道 . 本实验用 H P L C -
C L 测定野生药用植物吊石首苔中石吊兰素的含量 , 对用于分析的样品制备方法进行了探讨 . 结果表明 : 该
方法简单 、 快速 、 灵敏 , 并成功应用于贵州野生药用植物吊石芭苔中石吊兰素的含 t 测定 , 为贵州野生药
用植物吊石昔苔的开发利用提供科学依据 .
1 实验部分
L l 仪器与试剂
H P L C
一
C L 化学发光分析系统流路如图 1 所示 ; L -C 6A 液相色谱仪 ( S hi m ad uz , 日本 ) , k B P C L 超徽弱
发光测 t 仪 (中国科学院生物物理研究所 ) . K -Q 50 型超声波清洗器 ( 昆山市超声仪器有限公司 ) , T G -L 1 6G
型离心机 (上海安亭科学仪器厂 ) .
石吊兰素 ( N ve ad e sn in , 别名为岩豆素 )标准溶液 : 准确称取一定量的石吊兰素标准品 ( ” % , D E L T A
天然有机化合物信息中心 )溶于水并用流动相定容到 50 m L 棕色容量瓶中 , 摇匀 , 作为标准溶液 , 在 4 ℃冰
箱中保存 , 使用时用流动相稀释至所需浓度 . 铜氨络离子溶液 : 0 . 1 m ol / L c u s o ; 一 0 . 1 m ol / L c T M A B 一
0
.
5 m o l / L ( N H
.
) Z e o
, , 体积比为 4 : s : 2 0 ; H Z O Z 溶液 ( 0 . 0 3 m o l / L ) ; 其它试剂均为分析纯 , 水为二次燕
馏水 .
收摘日期 : 2 0 0 6 一 0 9 一 1 9
作者简介 : 吴永平 ( 19 47 一 ) , 男 , 贵州遵义人 , 副教授 , 主要从事天然产物药用成分分析的研究 .
通讯作者 : 周光 明 , 教授 .
DOI : 10. 13718 /j . cnki . xsxb. 2007. 03. 030
第 3期 吴永平 , 等 : H P L C一 C L 测定吊石 首苔 中石 吊兰素的含贵
1
.
2 色谱条件
色谱柱 : 填料 H y pe r s il O DS 2 5 拌m , 尺寸
4
.
6
~
X 30 0 m m (大连依利特科学器有限公
司 ) . 流动相为乙睛 一N , N一二 甲墓 甲酞胺 一 0 . 01
mo l/ L 草酸 (体积 比 27 , 6 , 67) , 流速为 1 m L /
而 n . 柱温为室温 , 进样量为 20 拌L 在此色谱条
件下 , 石吊兰素的保留时间为 4 n . 5 5 ; 石吊兰
素的标样色谱图和样品色谱图如图 2 所示 .
1
.
3 实验方法
用高效液相色谱高压泵代替蠕动泵或恒流
进样器
A
. 流动相 ; 且 H Z O : 溶液 ; C . 润氛络离子溶液
图 1 H P L C 一 C L 流路 图
泵 , 按图 1 所示流路用高压泵 A 输送流动相 ,
分别用 B 泵和 C 泵输送 H Z O : 溶液和铜氨络离子溶液 , 将石 吊兰素标准溶液或样品溶液由进样阀 V 注人到
流路中去 , 经色谱柱分离后与发光试剂混合产生强烈的化学发光 , 记录发光信号以峰面积定 t .
2 0 0 4 0 0 6 0 0 8 0 0 0 2 0 0 4 0 0 6 0 0 8 0 0
A
. 标样 . 压 样品
图 2 石 吊兰素色讲分离图
L 4 样品的制备方法
1
.
4
.
1 提取方法
以 5 0 %的乙醇为提取溶剂 , 分别采用超声提取 、 常温浸泡提取 、 索氏提取 3 种方法对 吊石曹苔的叶 、
茎进行分别提取 , 对石 吊兰素提取率进行比较 , 结果表明 : 三种方法提取率无显著性差异 , 但经优化 , 先浸
泡再超声辅助提取 , 石 吊兰素提取率大大提高 , 操作简单 , 提取 时间短 , 因而采用先浸泡再超声辅助提取
法作为样品的制备方法阁 .
1
.
4
.
2 分析样品的制备
取药材干燥粉碎 , 称取 1 . 0 0 9 磨碎的吊石芭苔叶 (或茎 )里于具塞三角烧瓶中 , 加入 15 m L 50 %乙醉 ,
室温放置 10 h , 超声提取 20 m in , 过滤 . 再分两次加人 2 m L 50 纬的乙醉超声提取 5 m in 并过滤 . 合并滤
液 , 定容至 20 m L , 离心 (2 0 0 0 r/ m in) , 取上清液 , 用于 H P L -c C L 分析 .
2 结果与讨论
2
.
1 流路参数的选择
在各流路试液浓度不变 的情况下 , 实验了流路参数对发 光强度 的影 响 , 结果 表明 当流 动相流 速为
写 : ` 1 m L/ im n , H 2 0 2 溶液和铜氨络离子溶液流速为 2 m L / m i n , 管道 内径为 0 . 8 m m , 混合管长度为 20 。 m 时
其有最大的信噪比 .
西南师范大学学报 ( 自然科学版 ) 第 3 2卷
2
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2实脸条件的选择
在其它实验条件固定不变时 , 流动相及其流速进行了优化选择 . 乙睛是一种较好的分离石吊兰素的流
动相组分 , 石吊兰素对乙腑一 H 2 0 : 化学发光体系有增敏作用 , 但反应很慢 . 铜氨络离子可催化过氧化氢与
石吊兰素的化学发光反应 l[ 卜川 , 于是 , 我们试验了以乙脑一 N , N 一二甲基 甲酞胺一 。 . 01 m ol / L 草酸作流动
相 、 铜氮络离子催化 、 过氧化氢氧化的石吊兰素的化学发光测定方法 , 试验表明 , 当乙睛一 N , N 一二甲基 甲
酞胺一 0 . 0 1 m o l/ L 草酸的体积比为 2 7 , 6 , 6 7 , 铜氨络离子溶液组成为 0 . 1 m o l / L C u OS ; 一 0 . 1 m o l / L
C T M A B一 0 . 5 m o l / L ( N H . ) 2 C0 : , 体积比为 4 , 5 , 2 0 , H ZO : 溶液浓度为 0 . 0 3 m o l/ L 时 , 具有最大的信
噪比 .
2
.
3 标准工作曲钱和检出限
在所选的实验条件下 , 得到线性回归方程为 : Y ~ 5 1 3 9X 一 84 . 19 9 , : = 0 . 9” 4 (n = 6 ) , 说明石吊兰素
浓度在 .0 02 ~ 50 拌g /m L 范围内与化学发光强度呈 良好的线性关系 . 当信噪比为 3 时 , 石吊兰素最低检侧
限为 o · 0 1 拌g / m L .
2
.
4 样品分析
取同一供试样品吊石首苔叶 、 茎粉末各 3 份 , 按所确定的样品制备方法和色谱条件进行石吊兰素的含
t 分析 , 石 吊兰素提取率为 。 . 9 15 6% (叶 ) 、 0 . 3 21 4% (茎 ) , 相对标准偏差为 1 . 25 % (叶 ) 、 1 . 58 % (茎 ) , 方
法重现性好 , 所得实验结果可靠 .
2
.
5 回收率侧定
精密称取已侧含 t 的吊石首苔叶 、 茎粉末 1 . 0 0 9 , 各 3 份 , 加人一定量的对照品 , 按 1 . 4 方法处理后
测定 , 结果见表 1 .
衰 1 吊石首苔提取液中石吊兰素的侧定结果 《n = 3)
实际含t 标准加人 t 侧得 t 回收率 平均回收率 相对标准伯差
由表 1 可见 , 石吊兰素回收率在 ” . 43 % ~ 10 0 . 26 %之间 , R SD 值为 0 . 7 02 % ~ 0 . 847 % , 表明实验所
确定的 R P一 H P L C 方法进行石吊兰素的含 t 分析 , 准确度较高.
3 结 论
研究结果表明 , 以乙睛一 N , N 一二 甲基甲酞胺一 0 . 01 m ol / L 草酸 (体积比为 ?2 , 6 , 67 )为流动相 , 在
H y p er is l O D S 色谱柱上 , 实现了对石 吊兰素的 H P L C 一 C L 分离测定 , 该法检出限低 、 ! 现性好 、 精密度高 ,
并且操作简便 、 快速 . 可用于植物中石吊兰素的测定 .
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P he n o l i n W a s t e w a t e r b y H ig h- P e r fo mr
a n e e L iq u i d C h r o m a t o g r a p h y w i t h Ch e m il u m in e s e e n e e eD
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D e t e r m in a t i o n o f N e v a d e n s i n in
L y s io n o t u s P a u c i fl o r u s M a x im b y H P L C
一
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1
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2
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A加 t ar e t : A n H P L C 一C L l i n k a g e m e t h o d w a s b a s e d o n t h e s t r o n g s e n s i t i v e e h e m i l u m i n e s e e n e e o f t h e
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0 2 ~ 5 0 拌g /m L w i t h a d e t e e t i o n l im i t ( 3口 ) o f 0 . 0 1
拌g / m L · T h e r e l a t i v e s t a n d a r d d e v i a t i o n f o r t e t r a e y e l i n e w e r e f r o m 1 . 2 4 % t o 1
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e u s e f u l f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f N e v a d e n s i n i n L y s i o n o t u s P a u e i f l o
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K ey w o川 s : H P L C ; e h e m i l u m i n e s e e n e e , L y s i o n o t u s P a u e i f lo r u s M a x im ; N e v a d e n s i n
资任摘辑 海春燕