全 文 ：第３３卷第２期
２０１５年４月
泉州师范学院学报
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｑｕａｎｚｈｏｕ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｖｏｌ．３３Ｎｏ．２
Ａｐｒ．２０１５
龙须菜抗氧化肽的制备及其体外抗氧化活性
陈洪彬１，２，鄂昱瑾１，温美钦１，董乐１，２，江裕富１，吴丽霞１
（１．泉州师范学院 化学与生命科学学院，福建 泉州　３６２０００；
２．近海资源生物技术福建省高校重点实验室，福建 泉州　３６２０００）
摘　要：为优化碱性蛋白酶酶解龙须菜蛋白制备抗氧化肽的工艺条件，以二苯基苦基苯肼（ＤＰＰＨ）自由
基的清除率为指标，单因素试验考察了酶解温度、酶解时间、酶底比（［Ｅ］／［Ｓ］）和ｐＨ值对制备抗氧化肽工
艺的影响，并在此基础上应用正交实验进行优化．结果表明，碱性蛋白酶酶解龙须菜蛋白制备抗氧化肽的最
佳工艺条件为：酶解温度６５℃、酶解时间１５０ｍｉｎ、［Ｅ］／［Ｓ］９　０００Ｕ／ｇ、ｐＨ　８．０，在此条件下制备的龙须菜
抗氧化肽对ＤＰＰＨ自由基的清除率为７７．４４％±０．１２％．体外抗氧化活性研究表明，抗氧化肽具有一定清除
ＤＰＰＨ自由基、羟自由基、超氧自由基的能力，也有一定的还原力，但均弱于同浓度下的抗坏血酸．
关键词：龙须菜蛋白；酶解；碱性蛋白酶；抗氧化肽
收稿日期：２０１５－０１－２１
作者简介：陈洪彬（１９８９－），男，福建安溪人，助教，硕士，从事食品加工及贮藏研究．
基金项目：福建省海洋经济发展专项（２０１５Ｎ００１４）；泉州师范学院大学生创新创业训练计划项目（２０１４１０３９９０７９）
中图分类号：Ｏ１７５．２６　　　　文献标识码：Ａ　　 文章编号：１００９－８２２４（２０１５）０２－００４３－０５
龙须菜（Ｇｒａｃｉｌａｒｉａ　ｌｅｍａｎｅｉｆｏｒｍｉｓ）又名江蓠、海发菜等，属红藻门江蓠属，是一种重要的大型经
济海藻，广泛分布或养殖于中国福建、广东、山东等沿海地区．其中，福建省约１０万吨，占全国５０％左
右［１］．龙须菜营养价值丰富，除多糖和粗纤维外，其蛋白质含量约占藻体１９％，仅次于紫菜［２－３］．长期以
来，龙须菜主要用作琼胶、琼脂糖的提取和鲍鱼养殖的饲料，开发利用单一，综合利用率不高．目前，有
关龙须菜活性物质的研究主要集中在藻胆蛋白、多糖，对于其他如多酚、多肽等的研究甚少［４－５］．抗氧化
肽（Ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）是一类具有抑制、延缓脂质氧化，减少生物体内因氧化损伤而引起的细胞
结构和功能改变的生物活性肽．食源性蛋白质通过水解得到的抗氧化肽具有高安全性、高活性和易被
机体吸收等特点，在食品、化妆品、保健品等具有巨大的潜在利用价值［６］．学者采用酶法从大豆［７］、玉
米［８］、鸡蛋［９］等蛋白中制备了抗氧化肽，而酶解制备龙须菜蛋白中抗氧化肽未见相关报道．本文以福建
莆田沿海所产龙须菜为原料，采用碱性蛋白酶酶解龙须菜蛋白制备龙须菜抗氧化肽，并对其进行体外
抗氧化活性研究，为龙须菜抗氧化肽的开发和利用提供理论支持和科学依据．
１　材料与方法
１．１　主要材料与仪器
龙须菜：国家海洋局第三海洋研究所提供，采自莆田沿海（湄洲湾海域），将龙须菜洗净，除去杂
质，自然晾干后于６０℃下烘干，粉碎机粉碎并过８０目筛，得龙须菜粉末，置于阴凉干燥处，备用；碱性
蛋白酶：诺维信公司提供（含水率为５．２％，酶活性１４万 Ｕ／ｇ）；１，１－二苯基苦基苯肼（ＤＰＰＨ）、抗坏血
酸、牛血清蛋白、氢氧化钠、盐酸、乙醇、ＥＤＴＡ－２Ｎａ、三氯乙酸、三氯化铁、铁氰化钾、硫酸铜、硫酸钾、硼
酸、田氏指示剂、ＮａＨ２ＰＯ４·２Ｈ２Ｏ、Ｎａ２ＨＰＯ４·１２Ｈ２Ｏ等均为分析纯．
ＤＧＧ－９２４６Ａ电热恒温鼓风干燥箱（上海齐欣科学仪器有限公司）；高速万能粉碎机（天津市泰斯
特仪器有限公司）；ＦＡ２１０４电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；ＵＢ－７酸度计（丹佛仪器（北
京）有限公司）；ＴＤＬ－５０００Ｂ离心机（飞鸽牌）；ＨＨ－４数据恒温水浴锅（国华电器有限公司）；ＤＫ－８０三
孔电热恒温水槽（上海齐欣科学仪器有限公司）；ＪＹ９２－ＩＩ超声波细胞粉碎机（宁波新艺超声设备有限公
DOI:10.16125/j.cnki.1009-8224.2015.02.009
司）；ＴＵ－１９５０紫外－可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）．
１．２　方法
１．２．１　龙须菜蛋白制备　称取一定量的龙须菜粉末，加入适量的蒸馏水（液料ｖ∶ｍ＝３０∶１），搅拌
均匀，调ｐＨ至１３，６５０Ｗ下超声辅助提取３０ｍｉｎ，提取液于４　０００ｒ／ｍｉｎ下离心２０ｍｉｎ，取其上清液，
调节ｐＨ为４．５，静置３０ｍｉｎ，再于４　０００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ，沉淀即为龙须菜蛋白，将沉淀取出置于４
℃保存备用．
１．２．２　龙须菜蛋白酶解单因素试验　取龙须菜蛋白１．００ｇ，加入一定质量的碱性蛋白酶，加水
５．０ｍＬ，调节ｐＨ到指定值，在一定温度下酶解，１００℃灭酶１０ｍｉｎ，４　０００ｒ／ｍｉｎ离心，取上清液测定
ＤＰＰＨ自由基的清除率．以酶解上清液ＤＰＰＨ自由基的清除率为指标，分别考察酶解温度（５０，５５，６０，
６５，７０℃）、酶解时间（６０，９０，１２０，１５０，１８０ｍｉｎ）、酶底比（［Ｅ］／［Ｓ］）（４　０００，６　０００，８　０００，１０　０００，１２　０００
Ｕ／ｇ）和ｐＨ值（７，８，９，１０，１１）对制备抗氧化肽工艺的影响．
表１　正交实验因素水平表
Ｔａｂ．１　Ｆａｃｔｏｒｓ　ａｎｄ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
水平
因素
酶解温度
Ａ／℃
酶解时间
Ｂ／ｍｉｎ
酶底比
Ｃ／（Ｕ·ｇ－１）
１　 ５５　 ９０　 ７　０００
２　 ６０　 １２０　 ８　０００
３　 ６５　 １５０　 ９　０００
１．２．３　酶解工艺条件优化　在单因素试验的基
础上，采用 Ｌ９（３４）正交试验设计，选取酶解温
度、酶解时间、酶底比３个因素，分析其对ＤＰＰＨ
自由基清除效果的影响，并优化龙须菜抗氧化肽
酶解制备工艺．试验因素与水平设计见表１．
１．２．４　抗氧化肽的体外抗氧化活性　在最优的
酶解条件下制备一定量的龙须菜抗氧化肽溶液，
将其浓缩，测定多肽含量，４℃保存备用．取一定
质量的抗氧化肽浓缩液，稀释至相应倍数，测定该稀释液的ＤＰＰＨ自由基清除率、羟自由基清除率、超
氧自由基清除率和还原力等体外抗氧化活性评价指标．
１．２．５　测定项目与方法　（１）多肽含量测定：参考鲁伟等［１０］的方法，略有修改．
（２）ＤＰＰＨ自由基清除率［１１］：取２．０ｍＬ样品液，加入０．２ｍｍｏｌ／Ｌ　ＤＰＰＨ乙醇溶液２．０ｍＬ，室温
放置３０ｍｉｎ，以７０％乙醇调零，测定５１７ｎｍ处吸光值（Ａ样品）；测定样品溶液２．０ｍＬ与７０％乙醇２．０
ｍＬ混合液在５１７ｎｍ处的吸光度（Ａ对照）；测定２．０ｍＬ　ＤＰＰＨ与２．０ｍＬ　７０％乙醇混合液在５１７ｎｍ
处的吸光值（Ａ空白）．ＤＰＰＨ清除率＝｛１－（Ａ样品－Ａ对照）／Ａ空白｝×１００％．
（３）羟自由基清除率：采用邻二氮菲法［１１］．取０．００５ｍｏｌ／Ｌ邻二氮菲溶液０．６ｍＬ，加０．４ｍＬ　ｐＨ
７．４的磷酸盐，０．０１ｍｏｌ／Ｌ硫酸亚铁溶液０．３ｍＬ，０．０２ｍｏｌ／Ｌ　ＥＤＴＡ溶液０．３ｍＬ，蒸馏水０．６ｍＬ，样
品液１．０ｍＬ，体积分数为０．１％双氧水０．８ｍＬ，３７℃下保温１ｈ，测定５３６ｎｍ处的吸光值（Ａ样品）；以
１．０ｍＬ　７０％乙醇和０．８ｍＬ蒸馏水替代提取液和双氧水测定空白吸光值（Ａ空白）；以１．０ｍＬ体积分数
为７０％乙醇溶液替代样品测定损伤吸光值（Ａ损伤）．羟自由基清除率＝（Ａ样品－Ａ损伤）／（Ａ空白－Ａ损伤）×
１００％．
（４）超氧阴离子清除率：采用核黄素－氮蓝四唑光照法［１１］．取１．５ｍＬ　ｐＨ　７．８缓冲液，加入０．３ｍＬ
１３０ｍｍｏｌ／Ｌ甲硫氨酸和０．３ｍＬ　７５０μｍｏｌ／Ｌ氮蓝四唑 ，再加入０．３ｍＬ　２０μｍｏｌ／Ｌ核黄素，０．６ｍＬ
蒸馏水，１．０ｍＬ样品溶液，４０Ｗ日光灯照射１０ｍｉｎ，测定５６０ｎｍ处的吸光值（Ａ样品）；以１．０ｍＬ样品
溶剂代替样品液为空白（Ａ空白）．超氧阴离子清除率＝（Ａ空白－Ａ样品）／Ａ空白×１００％．
（５）还原力：采用铁氰化钾法［１１］．取１．０ｍＬ样品液，加ｐＨ　６．６的磷酸缓冲液２．５ｍＬ和质量分数
为１％铁氰化钾溶液２．５ｍＬ，混合后在５０℃放置２０ｍｉｎ，加入质量分数为１０％三氯乙酸溶液２．５ｍＬ
（若有沉淀，则在４　０００ｒ／ｍｉｎ下离心１０ｍｉｎ），取上清液２．５ｍＬ，加入２．５ｍＬ蒸馏水和质量分数为０．
１％氯化铁２．５ｍＬ，混匀，静置１０ｍｉｎ，测定７００ｎｍ处的吸光值．
（６）ＩＣ５０：ＩＣ５０指ＤＰＰＨ自由基清除率、羟自由基清除率和超氧阴离子清除率为５０％或还原力的吸
光值为０．５时所需抗氧化肽溶液的浓度．以抗氧化肽溶液浓度（ｍｇ／ｍＬ）为自变量，抗氧化活性指标
（％）为因变量进行一次或二次曲线拟合，根据拟合方程计算ＩＣ５０．
１．３　统计分析
采用ＳＰＳＳ　１８数据分析软件进行统计分析，用Ｄｕｃａｎ多重比较法进行差异显著性检验．
４４ 　 泉州师范学院学报 ２０１５年４月　
２　结果与分析
２．１　单因素试验结果与分析
２．１．１　酶解温度对产物ＤＰＰＨ自由基清除率的影响　由图１（Ａ）可知，在酶解时间１２０ｍｉｎ、酶底比
５　０００Ｕ／ｇ、ｐＨ　８的条件下，龙须菜蛋白酶解产物的ＤＰＰＨ自由基清除率随着酶解温度的升高而逐渐
增加；在酶解温度为６０℃时，产物的ＤＰＰＨ自由基清除率达到最大；酶解温度超过６０℃之后，产物的
ＤＰＰＨ自由基清除率逐渐下降，这可能是由于酶解温度过高使得碱性蛋白酶活性下降引起的．故确定
６０℃为后续龙须菜蛋白的最适酶解温度．
２．１．２　酶解时间对产物ＤＰＰＨ自由基清除率的影响　由图１（Ｂ）可知，在酶解温度为５５℃、酶底比
５　０００Ｕ／ｇ、ｐＨ　８的条件下，龙须菜蛋白酶解产物的ＤＰＰＨ自由基清除率随着酶解时间的延长而逐渐
增加；在酶解时间为１２０ｍｉｎ时，产物的ＤＰＰＨ自由基清除率达到最大；酶解时间超过１２０ｍｉｎ后，产
物的ＤＰＰＨ自由基清除率缓慢下降，这可能是由于碱性蛋白酶将龙须菜蛋白进一步水解成单个氨基
酸造成的．故确定１２０ｍｉｎ为后续龙须菜蛋白的最适酶解时间．
２．１．３　酶底比对产物ＤＰＰＨ自由基清除率的影响　由图１（Ｃ）可知，在酶解温度５５℃、酶解时间１２０
ｍｉｎ、ｐＨ　８的条件下，龙须菜蛋白酶解产物的ＤＰＰＨ自由基清除率随着酶底比（［Ｅ］／［Ｓ］）的增加而逐
渐升高；在酶底比为８　０００Ｕ／ｇ时，产物的ＤＰＰＨ自由基清除率达到最大，酶底比超过８　０００Ｕ／ｇ后，
产物的ＤＰＰＨ自由基清除率基本保持不变．在底物浓度一定时，酶浓度提高后，蛋白水解效率提高，但
超过一定比例后，底物浓度和酶浓度已经达到相对平衡，再提高酶浓度已经无法再使酶解效率提高．
故确定［Ｅ］／［Ｓ］＝８　０００Ｕ／ｇ为后续龙须菜蛋白的最适酶底比．
２．１．４　ｐＨ值对产物ＤＰＰＨ自由基清除率的影响　由图１（Ｄ）可知，在酶解温度５５℃、酶解时间１２０
ｍｉｎ、酶底比５　０００Ｕ／ｇ的条件下，龙须菜蛋白酶解产物的ＤＰＰＨ自由基清除率在ｐＨ值为８时最高，
随着ｐＨ值升高，产物的ＤＰＰＨ自由基清除率快速下降．这是由于ｐＨ值升高使碱性蛋白酶变性，活性
下降而引起的．故确定ｐＨ＝８为后续龙须菜蛋白的最适ｐＨ．
图１　酶解温度（Ａ）、酶解时间（Ｂ）、酶底比（Ｃ）和ｐＨ值（Ｄ）对产物ＤＰＰＨ自由基清除率的影响
Ｆｉｇ．１　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｅｎｚｙｍｏｌｙｓｉｓ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（Ａ），ｅｎｚｙｍｏｌｙｓｉｓ　ｔｉｍｅ（Ｂ），ｅｎｚｙｍｅ－ｓｕｂｓｔｒａｔｅ　ｒａｔｉｏ（Ｃ）ａｎｄ　ｐＨ　ｖａｌｕｅ
ｏ　 ｎ　ｔｈｅ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ＤＰＰＨ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｆｒｏｍ　ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅ　ｐｒｅｐａｒｉｎｇ　ｂｙ　Ｇｒａｃｉｌａｒｉａ　ｌｅｍａｎｅｉｆｏｒｍｉｓ
２．２　正交实验结果与分析
在上述单因素试验的基础上，设计碱性蛋白酶酶解龙须菜蛋白制备抗氧化肽的Ｌ９（３４）正交实验，
Ｄ为空列，试验结果及方差分析见表２、表３．
由正交试验方差分析可知，在α＝０．０５水平上，Ａ（酶解温度）、Ｂ（酶解时间）和Ｃ（酶底比）３个因素
的不同处理水平对产物ＤＰＰＨ自由基清除率的影响显著．确定各因素的主次关系为Ｂ＞ Ｃ＞ Ａ＞ Ｄ，
与极差分析结果一致．因此，确定最优组合为Ａ３Ｂ３Ｃ３Ｄ２，即：酶解温度６５℃、酶解时间１５０ｍｉｎ、酶底
比９　０００Ｕ／ｇ．经验证试验（ｎ＝３），得到龙须菜蛋白酶解的最佳工艺条件为：酶解温度６５℃、酶解时间
１５０ｍｉｎ、酶底比９　０００Ｕ／ｇ和ｐＨ　８，该条件下的酶解产物的ＤＰＰＨ自由基清除率为７７．４４％±０．１２％．
５４　第２期 陈洪彬，等：龙须菜抗氧化肽的制备及其体外抗氧化活性 　
表２　正交试验结果与分析
Ｔａｂ．２　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
试验号 １　 ２　 ３　 ４　 ５　 ６　 ７　 ８　 ９　 Ｋ１ Ｋ２ Ｋ３ Ｒ
Ａ　 １　 １　 １　 ２　 ２　 ２　 ３　 ３　 ３　 ７５．０４　７４．９６　７５．７６　０．８０
Ｂ　 １　 ２　 ３　 １　 ２　 ３　 １　 ２　 ３　 ７４．３７　７５．３５　７６．０５　１．６８
Ｃ　 １　 ２　 ３　 ２　 ３　 １　 ３　 １　 ２　 ７４．６６　７５．３６　７５．７４　１．０８
Ｄ　 １　 ２　 ３　 ３　 １　 ２　 ２　 ３　 １　 ７５．３０　７５．３２　７５．１４　０．１８
实验
结果
７３．６　 ７５．３１　７６．２１　７４．０７　７５．５９　７５．２３　７５．４３　７５．１５　７６．７０
表３　方差分析
Ｔａｂ．３　ＡＮＯＶＡ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
方差来源 离差平方和 自由度 Ｆ值 Ｐ值
Ａ　 １．１６　 ２　 ２０．４７　 ０．０４７＊
Ｂ　 ４．２７　 ２　 ７５．４９　 ０．０１３＊
Ｃ　 １．８１　 ２　 ３１．９８　 ０．０３０＊
Ｄ　 ０．０６　 ２　 １．００　 ０．５００
误差 ０．０６　 ２
注：Ｆ０．０５（２，２）＝１９．００，Ｆ０．０１（２，２）＝９９．００，＊表示
差异显著，Ｐ＜０．０５．
２．３　龙须菜抗氧化肽的体外活性评价
在最优的酶解条件下制备一定量的龙须菜
抗氧化肽，浓度为５．００±０．０８ｍｇ／ｍＬ（ｎ＝３）．
由图２可知，用碱性蛋白酶水解龙须菜蛋白所制
备的抗氧化肽具有一定的抗氧化活性．随着抗氧
化肽浓度的增加，其ＤＰＰＨ自由基清除率、羟自
由基清除率、超氧自由基清除率和还原力均增
大，且呈现明显的剂量效应关系．对其效应关系
进行二次曲线拟合，根据拟合方程计算ＩＣ５０值，
结果见表４．由表４可知，该抗氧化肽ＤＰＰＨ 自
由基清除率、羟自由基清除率、超氧自由基清除率和还原力的ＩＣ５０值分别为０．７１８　６，１．１９２，０．３５６　６，
０．６５３　２ｍｇ／ｍＬ，分别相当于７１　０１０，０．５３６　４，０．１８１　３，１５　８９５ｍｇ／ｍＬ的抗坏血酸溶液．
图２　抗氧化肽浓度对ＤＰＰＨ自由基（Ａ）、羟自由基（Ｂ）、超氧自由基清除率（Ｃ）和还原力（Ｄ）的影响
Ｆｉｇ．２　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ＤＰＰＨ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ（Ａ），ｈｙｄｒｏｘｙ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ（Ｂ），ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ（Ｃ）
ａｎｄ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｐｏｗｅｒ（Ｄ）ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｐｒｅｐａｒｉｎｇ　ｂｙ　Ｇｒａｃｉｌａｒｉａ　ｌｅｍａｎｅｉｆｏｒｍｉｓ
表４　抗氧化肽对ＤＰＰＨ自由基、羟自由基、超氧自由基清除和还原力的ＩＣ５０值
Ｔａｂ．４　ＩＣ５０ｖａｌｕｅｓ　ｏｆ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｆｏｒ　ＤＰＰＨ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ，ｈｙｄｒｏｘｙ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ，ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ａｎｄ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｐｏｗｅｒ
回归方程 Ｒ２　 ＩＣ５０／（ｍｇ獉ｍＬ－１）
ＤＰＰＨ自由基 ｙ＝－５．０５３　６ｘ２＋５７．４２９ｘ＋１１．３４６　 ０．９９９　１　 ０．７１８　６
羟自由基 ｙ＝－４．０８ｘ２＋４２．２７９ｘ＋５．４０３　３　 ０．９９７　８　 １．１９２
超氧自由基 ｙ＝－１５２．３８ｘ２＋１８８．７２ｘ＋２．０８４　６　 ０．９９７　６　 ０．３５６　６
还原力 ｙ＝－０．０５１　１ｘ２＋０．６５１　３ｘ＋０．０９６　４　 ０．９９９　７　 ０．６５３　２
６４ 　 泉州师范学院学报 ２０１５年４月　
３　结论
本研究通过单因素和正交优化设计试验，对碱性蛋白酶制备龙须菜抗氧肽的工艺进行优化、验
证，得到制备龙须菜抗氧化肽的最佳酶解条件为：酶解温度６５℃、酶解时间１５０ｍｉｎ、酶底比９　０００Ｕ／
ｇ、ｐＨ值８．０，在此条件下制备的龙须菜抗氧化肽对ＤＰＰＨ自由基的清除率为７７．４４％±０．１２％．体外
抗氧化活性研究表明，抗氧化肽具有一定清除ＤＰＰＨ自由基、羟自由基、超氧自由基的能力，也有一定
的还原力，但均弱于同浓度下的抗坏血酸．因此，采用该碱性蛋白酶制备龙须菜抗氧化肽是可行的，为
进一步综合开发和利用龙须菜提供了新途径．龙须菜抗氧化肽的酶法制备工艺可能与酶的种类、粗蛋
白的制备等有关，对龙须菜蛋白酶解液中抗氧化肽的组成还需进一步分离、纯化和鉴定，对其构效关
系还有待深入研究．
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（责任编辑　杨珠）
Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ
ｏｆ　Ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｆｒｏｍＧｒａｃｉｌａｒｉａ　ｌｅｍａｎｅｉｆｏｒｍｉｓ
ＣＨＥＮ　Ｈｏｎｇ－ｂｉｎ１，２，Ｅ　Ｙｕ－ｊｉｎ１，ＷＥＮ　Ｍｅｉ－ｑｉｎ１，ＤＯＮＧ　Ｌｅ１，２，ＪＩＡＮＧ　Ｙｕ－ｆｕ１，ＷＵ　Ｌｉ－ｘｉａ１
（１．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｑｕａｎｚｈｏｕ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｊｉａｎ　３６２０００，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｏｆｆｓｈｏｒｅ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｆｕｊｉａｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｊｉａｎ　３６２０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｏｐｔｉｍｉｚｅ　ｅｎｚｙｍｏｌｙｓｉｓ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｆｏｒ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｆｒｏｍ
Ｇｒａｃｉｌａｒｉａ　ｌｅｍａｎｅｉｆｏｒｍｉｓ　ｐｒｏｔｅｉｎ，ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｅｎｚｙｍｏｌｙｓｉｓ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｅｎｚｙｍｏｌｙｓｉｓ　ｔｉｍｅ，ｅｎｚｙｍｅ　ｓｕｂ－
ｓｔｒａｔｅ　ｒａｔｉｏ（［Ｅ］／［Ｓ］）ａｎｄ　ｐＨ　ｖａｌｕｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｉｎ　ｗｈｉｃｈ　ＤＰＰＨ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｒａｔｅ
ｗｅｒｅ　ｔａｋｅｎ　ａｓ　ｉｎｄｅｘｅｓ　ｗａｓ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｗｉｔｈ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｅｎｚｙ－
ｍｏｌｙｓｉｓ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｇｒａｃｉｌａｒｉａ　ｌｅｍａｎｅｉｆｏｒｍｉｓ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ
ａｓ：ｅｎｚｙｍｏｌｙｓｉｓ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　６５℃，ｅｎｚｙｍｏｌｙｓｉｓ　ｔｉｍｅ　１５０ｍｉｎ，［Ｅ］／［Ｓ］９　０００Ｕ／ｇ　ａｎｄ　ｐＨ　ｖａｌｕｅ　８．
Ｕｎｄｅｒ　ｓｕｃｈ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ＤＰＰＨ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｉｓ　７７．４４％±
０．１２％．Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　ｉｔｓ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｈａｄ　ａｎｔｉｏｘ－
ｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ，ｓｕｃｈ　ａｓ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ＤＰＰＨ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ，ｈｙｄｒｏｘｙｌ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ，ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｆｒｅｅ
ｒａｄｉｃａｌ　ａｎｄ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｐｏｗｅｒ．Ｂｕｔ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｗｅｒｅ　ｌｅｓｓ　ｔｈａｎ　ａｓｃｏｒｂｉｃ　ａｃｉｄ　ｗｉｔｈ　ｓａｍｅ　ｃｏｎ－
ｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｇｒａｃｉｌａｒｉａ　ｌｅｍａｎｅｉｆｏｒｍｉｓ　ｐｒｏｔｅｉｎ；ｅｎｚｙｍｏｌｙｓｉｓ；ａｌｋａｌｉｎｅ　ｐｒｏｔｅａｓｅ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ
７４　第２期 陈洪彬，等：龙须菜抗氧化肽的制备及其体外抗氧化活性