全 文 ：［收稿日期］ 20100819(003)
［基金项目］ 广西中医学院校级课题资助(项目 2009021)
［通讯作者］ * 李培源，硕士，讲师，从事中药化学成分及质量
标准研究，Tel:13657881740，E-mail:lipearpear@
yahoo. cn
总抗氧化能力检测试剂盒(ABTS)法测定
江南星蕨的抗氧化活性
李培源1* ，霍丽妮1，苏炜2，卢汝梅1，邓超澄1，吕友国1
(1. 广西中医学院药学院，南宁 530001;2. 广西师范学院化学与生命科学学院，南宁 530001)
［摘要］ 目的:研究江南星蕨不同溶剂提取物的抗氧化活性。方法:用冷浸法得到江南星蕨乙醇、丙酮和乙酸乙酯提取
物，测定了 3 种提取物的总黄酮含量，并用总抗氧化能力检测试剂盒(ABTS)体系吸光值的变化研究它们的抗氧化能力。结
果:3 种提取物对 ABTS· +自由基清除率均超过了 80%，清除率最高可达 96. 11%。结论:江南星蕨不同溶剂提取物均表现出
很强的抗氧化能力，有望作为天然抗氧化剂和功能性食品得到开发。
［关键词］ 江南星蕨;自由基;抗氧化
［中图分类号］ R285. 5 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2011)01-0162-03
Detection of Antioxidative Capacity of Microsorum fortunei
Extract by ABTS Assay
LI Pei-yuan1* ，HUO Li-ni1，SU Wei2，LU Ru-mei1，DENG Chao-cheng1，LV You-guo1
(1 . College of Pharmacy，Guangxi Traditional Chinese Medical University，Nanning 530001，China;
2 . College of Chemistry and Life Science，Guangxi Teachers Education University，Nanning 530001，China)
［Abstract］ Objective:To study the antioxidant activity of several extracts of Microsorum fortunei. Method:
The ethanol，acetone and ethyl acetate extacts were obtained by cold-extraction，then the total flavone content was
determined and the antioxidant activities of them were studied employing［2，2′-azino-bis(3-ethglbenzothiazoline-6-
sultouic)acid ammonium salt］(ABTS)assay. Result:The scavenging activities of all the three extracts on ABTS
· + radical were more than 80%，and the highest scavenging capacity reached 96. 11% . Conclusion:All the
extracts of M. fortunei had prominent antioxidant activity，which could be employed as natural antioxidants and
health care products
［Key words］ Microsorum fortunei;free radical;antioxidant
现代医学研究表明，人体内自由基过量会导致
动脉硬化、关节炎、糖尿病、肺气肿、癌症、老年痴呆
等多种疾病。而合理补充抗氧化剂可有效减少自由
基，从而预防和治疗某些疾病，延缓衰老［1］。目前工
业上使用的合成抗氧化剂有一定副作用，可能会导
致癌症或损伤肝脏，因此在植物中寻找天然有效的
抗氧化剂成为科研工作者关注的重点［2］。
江南星蕨 Microsorum fortunei 别名大叶骨牌草、
七星剑、旋鸡尾，是水龙骨科星蕨属植物。以全草入
药，能清热解毒，利尿，祛风除湿，凉血止血，消肿止
痛［3］。江南星蕨在民间使用非常广泛，但其抗氧化
方面的研究未见报道。本实验通过 ABTS 方法，首
次对江南星蕨 3 种提取物(乙醇提取物、丙酮提取物
和乙酸乙酯提取物)的抗氧化活性进行研究，为江南
星蕨作为一种天然高效抗氧化物推广利用提供理论
依据。
·261·
第 17 卷第 1 期
2011 年 1 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17，No. 1
Jan.，2011
1 材料
UV1901 型紫外-可见分光光度计(北京普析电
子科技有限公司)。江南星蕨购于广西玉林药材市
场，经作者鉴定为正品。芦丁对照品购于北京百灵
威试剂公司。
2 方法
2. 1 不同溶剂提取物制备 称取 20 g 江南星蕨粉
末，加入 200 mL 乙醇(95%)，冷浸 72 h。重复上述
操作 3 次，合并提取液。旋转蒸发回收溶剂，得到江
南星蕨乙醇提取物(EE)0. 9 g，得率为 4. 5%。同
法，用丙酮及乙酸乙酯提取，得到丙酮提取物(AE)
0. 7 g 和乙酸乙酯提取物(EAE)0. 8 g，得率分别为
3. 5%和 4%。
2. 2 ABTS· +自由基清除能力测定［4］ 将 2，2′-联
氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺盐(ABTS)用
蒸馏水配制成 2 mmol·L-1溶液，取 50 mL 上述溶液
与 200 mL K2 S2O8 水溶液(70 mmol·L
-1)混合均匀，
避光放置 12 ～ 16 h，得到 ABTS· +溶液。用磷酸盐
缓冲液将 ABTS· + 溶液稀释至吸光度为 0. 70 ±
0. 02(A734 nm)。将江南星蕨提取物用 95%乙醇稀释
为 7 个不同浓度药液，取 0. 1 mL 提取物药液，加入
1. 9 mL ABTS· +溶液，混匀，在 1，3，5，10 min 时测
其吸光度。ABTS· +自由基清除率(S%)计算公式
如下:
S% =(A0 － A)/A0，其中 A0 为 ABTS·
+ 溶液的吸光度，
A 为加药液后的吸光度。
2. 3 总黄酮含量测定
2. 3. 1 标准曲线绘制 精密吸取 0. 0，0. 5，1. 0，
2. 0，3. 0，4. 0，5. 0 mL 芦丁对照品溶液(1 g·L － 1)于
10 mL 量瓶中，分别加 5%亚硝酸钠 0. 4 mL，静置 6
min，加入 5%硝酸铝 0. 4 mL，静置 6 min。加 5%氢
氧化钠试液 4. 0 mL，用 95%乙醇稀释至刻度，摇匀。
静置 15 min，在 510 nm 处测定吸收度。以吸收度对
溶液浓度进行回归，绘制标准曲线，得回归方程。
2. 3. 2 江南星蕨提取物总黄酮含量测定 将各提
取物溶液分别同 2. 3. 1 项下操作测定吸光度，多次
测量求平均值。根据回归方程计算总黄酮的芦丁当
量，总黄酮含量以每克干物质的芦丁当量(mg)表
示，并计算提取得率。
3 结果
3. 1 不同浓度提取物对 ABTS· +自由基清除能力
不同浓度的乙醇提取物(EE)对 ABTS· + 自由基
清除率如图 1 所示，可见，随着浓度增大，EE 对
ABTS· +自由基清除能力迅速增大。在 1 min 时浓
度为 0. 2，1. 2 g·L － 1的 EE，ABTS· + 清除率分别为
37. 0%和 59. 3%，而 2. 0 g·L － 1的 EE 对 ABTS· +清
除率增大到 84. 0%。同时，随着反应时间的增加，
EE 对 ABTS· +清除率也有所增加。浓度为 1. 5 g·
L － 1的 EE，在 1，3 min 时清除率分别为 64. 3% 和
73. 5%，而在 10 min 时清除率达到了 95. 4%;浓度
为 2. 0 g·L － 1的 EE，1 min 时清除率为 84. 0%，10
min 时则增大到 96. 1%。
图 1 不同质量浓度江南星蕨乙醇提取物对
ABTS· + 自由基的清除能力
图 2 表示的是不同浓度的丙酮提取物(AE)对
ABTS· +自由基清除率。随着浓度和时间增大，AE
对 ABTS· + 自由基清除能力迅速增大，与 EE 的变
化规律一致。0. 5 g·L － 1的 AE 对 ABTS 的清除率随
时间的增大，则由 1 min 时的 42. 8% 增加为 10 min
时的 60. 3%，清除能力随时间的变化非常显著。而
对于不同质量浓度的 AE，由 0. 2 g·L － 1增大到 2. 0 g
·L － 1 时，ABTS 清除率也相应地由 48. 7% 增大到
88. 7%，表现出很强的 ABTS 自由基清除能力。
图 2 不同浓度江南星蕨丙酮提取物对
ABTS· + 自由基的清除能力
·361·
李培源，等:总抗氧化能力检测试剂盒(ABTS)法测定江南星蕨的抗氧化活性
3. 2 不同溶剂提取物对 ABTS· +自由基清除率的
比较 图 3 表示的是江南星蕨质量浓度为 0. 2，1. 2，
2 g·L － 1的 3 种溶剂提取物在 10 min 时对 ABTS· +
自由基的清除能力。如图所示，较低浓度时，AE 的
清除能力最强，0. 2 g·L － 1的 AE 对 ABTS· +清除能
力达到 48. 7%，而相应的 EAE 的清除率为 39. 5%，
清除能力顺序为:AE > EE > EAE。而在较高浓度
时，EE 表现出最为优异的 ABTS· +清除能力。在 2
g·L － 1浓度时，EE 对 ABTS· + 清除率高达 96. 1%，
而 AE 和 EAE 清除率也高达 88. 8%和 82. 7%。3 种
提取物对 ABTS· +清除率均超过了 80%，表现出极
强的 ABTS· +自由基清除能力。
图 3 江南星蕨不同溶剂提取物对 ABTS· + 自由基的清除能力
3. 3 不同溶剂提取物半数致死浓度(EC50)值 江
南星蕨提取物 EE，AE，EAE 在 10 min 对 ABTS· +
自由基的 EC50分别为 0. 24，0. 12，0. 44 g·L
－ 1。EC50
顺序为 AE < EE < EAE，即提取物清除自由基的能力
为 AE > EE > EAE。
3. 4 不同溶剂提取物总黄酮含量测定结果 江南
星蕨提取物中，AE 和 EAE 的总黄酮含量最高，分别
为 96. 65，97. 66 mg·g － 1，EE 的总黄酮含量也达到
72. 08 mg·g － 1。3 种提取物均具有优异的 ABTS· +
自由基的清除能力，但总黄酮含量与抗氧化效果并
不成正比，这与可能与其所含酚类等其他成分的差
异有关，有待进一步研究。
4 结论
本实验采用 ABTS 方法，来研究江南星蕨不同
溶剂提取物对自由基的清除能力，并对其黄酮含量
进行测定。结果表明，不同溶剂的提取物自由基清
除能力有所差异，EC50计算结果表明，提取物清除自
由基能力顺序为 AE > EE > EAE。在 2. 0 g·L － 1时，3
种提取物对 ABTS· +自由基的清除率均超过 80%，
其中 EE 的清除率高达 96. 11%，表明它们都有较强
自由基清除作用。提取物均有较高的黄酮含量，这
可能是其极强 ABTS· + 自由基清除能力的原因之
一。江南星蕨不同溶剂提取物绿色、安全、副作用
小，且提取工艺非常简单，可作为合成抗氧化剂的替
代品在食品、化妆品和制药工业上使用。
［参考文献］
［1］ Kumar K S， Ganesan K， Rao P V S. Antioxidant
potential of solvent extracts of Kappaphycus alvarezii
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2008，107(1):289.
［2］ Marina Contini，Simone Baccelloni，Riccardo Massantini，
et al. Extraction of natural antioxidants from hazelnut
(Corylus avellana L.) shell and skin wastes by long
maceration at room temperature［J］. Food Chem，2008，
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［3］ 中国科学院《中国植物志》编辑委员会 . 中国植物志
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［4］ C Delgado-Andrade，J A Rufian-Henares，F J Morales.
Assessing the antioxidant activity of melanoidins from
coffee brews by different antioxidant methods［J］. J Agric
Food Chem，2005，53:7832.
［责任编辑 邹晓翠］
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第 17 卷第 1 期
2011 年 1 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17，No. 1
Jan.，2011