全 文 ：理主要是通过抑制胆碱酯酶的活性引起中毒反
应［10，11］。一般马铃薯块茎中的总糖苷生物碱含量
少，芽体和皮层的含量较多。为了防止大小鼠过量摄
入总糖苷生物碱导致死亡，本研究在实验前期还通过
急性毒性实验测出其半数致死量，再进行了有效剂量
的摸索。另一方面。由于总糖苷生物碱在新鲜马铃
薯块茎里含量较低，其是否为治疗静脉输液外渗引起
的炎症的主要有效成分，仍然有待进一步研究。
参 考 文 献
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(2016-01-12 收稿 2016-05-09 修回)
通讯作者:徐惠芳 Tel:(027)82851897 E-mail:xhuifang027@ qq． com
不同产地短叶决明 HPLC指纹图谱的研究
刘建东 徐惠芳 黄中强 (武汉市中医医院 武汉 430014)
摘 要 目的:HPLC法建立短叶决明指纹图谱的分析方法。方法:采用 SinoChrom ODS-BP(250 mm × 4． 6 mm，5 μm)色谱
柱，乙腈-0． 1%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱，流速为1． 0 ml·min －1，检测波长为 285 nm，柱温为 25 ℃，进样量为 10 μl。结
果:确定了 13 个共有峰，10 批短叶决明的色谱指纹图谱整体相似度在0． 839 ～ 0． 998，并得出对照指纹图谱。结论:该指纹图
谱分析方法操作简便、重复性好，可为科学地控制短叶决明的质量，合理地开发其药用资源提供依据。
关键词 短叶决明;高效液相色谱;指纹图谱;共有模式
中图分类号:TQ460． 7 + 2 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2016)10-1869-03
Study on HPLC Fingerprint of Cassia Leschenaultiana from Different Ｒegions
Liu Jiandong，Xu Huifang，Huang Zhongqiang(Wuhan Hospital of Traditional Chinese Medicine，Wuhan 430014，China)
ABSTＲACT Objective:To establish the HPLC fingerprint of Cassia leschenaultiana from different regions． Methods:The column
was SinoChrom ODS-BP (250 mm ×4． 6 mm，5 μm)． The mobile phase consisted of acetonitrile-0． 1% phosphoric acid with gradient
elution． The flow rate was 1． 0 ml·min －1，the detection wavelength was 285 nm，the column temperature was 25 ℃，and the injection
volume was 10 μl． Ｒesults:The fingerprint consisted of 13 common peaks． The range of similarity for ten batches of Cassia le-
schenaultiana was 0． 839-0． 998． And the reference fingerprint of Cassia leschenaultiana was established by HPLC． Conclusion:The
fingerprint method is simple and reproducible，which can provide basis for the quality control and the medicinal resources exploration．
KEY WOＲDS Cassia leschenaultiana;HPLC;Fingerprint;Mutual mode
短叶决明 Cassia leschenaultiana DC．为豆科决明
属植物，其药用部位为根，具有清热解毒、平肝安神、
消肿排脓之功效，常用于治疗咽喉肿痛、失眠、湿疹、
疔疮等症［1］。短叶决明在我国分布广泛，主要分布于
湖北、安徽、四川、云南、贵州、广西等省，具有丰富的
药材资源。目前，国内外学者针对短叶决明的研究逐
渐深入，主要集中在化学成分方面，并已证实含有蒽
醌、甾醇、各种烷烃及其衍生物等［2 ～ 5］，但尚未见关于
短叶决明指纹图谱研究的相关报道。因此希望通过
对短叶决明进行 HPLC指纹图谱的分析，建立共有模
式，以期为今后更加科学地评价短叶决明的质量，合
理地开发短叶决明药用资源提供依据。
1 仪器与材料
LC-20A 高效液相色谱仪(日本岛津) ;SPD-
M20A型二级管阵列检测器(日本岛津) ;PL202-s型
电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。
橙黄决明素对照品(批号:111900-201303)购于
中国食品药品检定研究院;甲醇、乙腈为色谱纯(国
药集团化学试剂有限公司) ，无水乙醇、乙酸乙酯、
三氯甲烷、盐酸、磷酸均为分析纯(国药集团化学试
剂有限公司) ，水为双蒸水。
9681
中国药师 2016 年第 19 卷第 10 期 China Pharmacist 2016，Vol． 19 No． 10
不同批次的短叶决明样品分别采集自湖北、安
徽、四川、云南、贵州等地，经我院张义生主任药师鉴
定为豆科决明属植物短叶决明 Cassia leschenaultiana
DC． 的干燥根。
表 1 短叶决明药材产地批次表
编号 批号 采集地 编号 批号 采集地
1 hb001 湖北恩施 6 sc002 四川通江
2 hb002 湖北宜昌 7 yn001 云南丽江
3 ah001 安徽亳州 8 yn002 云南大理
4 ah002 安徽芜湖 9 gz001 贵州毕节
5 sc001 四川都江堰 10 gz002 贵州铜仁
2 方法与结果
2． 1 色谱条件
WondaSil C18 色谱柱(250 mm × 4． 6 mm，5
μm) ;流速:1． 0 ml · min －1;检测波长:285 nm;柱
温:25 ℃;流动相:乙腈(A)-0． 1%磷酸(B) ;梯度洗
脱程序:0 ～ 15 min，55% A;15 ～ 20 min，55% ～
60% A;20 ～ 40 min，60% ～ 75% A;40 ～ 55 min，
75% ～80%A;55 ～ 80 min，80% ～ 90% A;80 ～ 100
min，90% ～100%A。进样量:10 μl。
2． 2 对照品溶液的制备
取已干燥橙黄决明素适量，精密称定，置 50 ml
量瓶中，加无水乙醇-乙酸乙酯(2 ∶ 1)的混合溶液溶
解，稀释至刻度，摇匀，0． 45 μm滤膜滤过，备用。
2． 3 供试品溶液的制备
取短叶决明药材 100 g，粉碎，精密称取样品粉
末(过三号筛)1． 0 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲
醇 100 ml，称定重量，加热回流 2 h，放冷，再称定重
量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续
滤液 25 ml，蒸干，加稀盐酸 30 ml 置水浴中加热水
解 1 h，立即冷却，用三氯甲烷振摇提取 4 次，每次
30 ml，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣用无水
乙醇-乙酸乙酯(2 ∶ 1)混合溶液使溶解，置 10 ml 量
瓶中，稀释至刻度，摇匀，0． 45 μm滤膜滤过，备用。
2． 4 测定方法
将供试品溶液注入液相色谱仪，按“2． 1”项下
色谱条件测定，记录色谱图。在供试品色谱中，以橙
黄决明素为主要指标成分，将其作为内参比峰，计算
各指纹峰的相对保留时间和相对共有峰面积值。
2． 5 方法学考察
2． 5． 1 精密度试验 取同一批供试品溶液，连续进
样 6 次，记录色谱峰面积，采用《中药色谱指纹图谱
相似度评价系统(2004A 版)》计算相似度，分别为
0． 998，0． 998，0． 998，0． 998，0． 999，0． 998，相似度≥
0． 950，结果表明仪器精密度良好，符合指纹图谱检
测要求。
2． 5． 2 稳定性试验 取同一批供试品溶液，在 0，
3，6，9，12，24 h 分别进样分析，记录主要色谱峰面
积，计算相似度，分别为0． 999，0． 998，0． 998，0． 997，
0． 997，0． 996，相似度≥0． 950，结果表明供试品溶液
在 24 h内稳定，符合指纹图谱检测要求。
2． 5． 3 重复性试验 取 6 份同一批短叶决明药材
样品，照“2． 3”项下方法制备供试品溶液，照“2． 1”
项下色谱条件进样分析，记录主要色谱峰面积，计算
相似度，分别为0． 995，0． 993，0． 995，0． 994，0． 995，
0． 994，相似度≥0． 950，结果表明该法重复性较好，
符合指纹图谱检测要求。
2． 6 试验结果
2． 6． 1 不同产地短叶决明指纹图谱的建立及共有
峰的确定 取 10 批不同产地的短叶决明，照“2． 3”
项下方法制备供试品溶液，照“2． 1”项下色谱条件
进样分析，记录色谱图。10 批短叶决明的指纹图谱
见图 1，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统
(2004A版)》对数据进行分析，生成对照指纹图谱，
确定 13 个共有峰(见图 2) ;以橙黄决明素(S 峰)的
保留时间和色谱峰面积为 1，计算各指纹峰的相对
保留时间和相对共有峰面积，结果见表 2、表 3。
图 1 短叶决明 HPLC指纹图谱
图 2 短叶决明 HPLC对照指纹图谱
2． 6． 2 不同产地短叶决明指纹图谱的相似度评价
采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A
版)》对数据进行处理，以生成的对照谱图(中位数
法)作为对照模板进行评价，计算各色谱图的相似
0781
www． zgys． org 研究论文
表 2 短叶决明指纹图谱共有峰相对保留时间
样品号
峰号
1 2 3 4 5 6 7 8 9(S) 10 11 12 13
1 0． 293 0． 454 0． 597 0． 669 0． 694 0． 811 0． 868 0． 898 1． 000 1． 159 1． 234 1． 331 1． 675
2 0． 291 0． 455 0． 596 0． 667 0． 695 0． 812 0． 867 0． 897 1． 000 1． 160 1． 235 1． 330 1． 674
3 0． 292 0． 456 0． 595 0． 666 0． 691 0． 810 0． 867 0． 897 1． 000 1． 158 1． 233 1． 332 1． 677
4 0． 292 0． 452 0． 596 0． 665 0． 690 0． 809 0． 866 0． 896 1． 000 1． 157 1． 232 1． 332 1． 676
5 0． 292 0． 452 0． 594 0． 666 0． 692 0． 810 0． 866 0． 895 1． 000 1． 156 1． 232 1． 329 1． 673
6 0． 292 0． 451 0． 598 0． 666 0． 691 0． 809 0． 864 0． 894 1． 000 1． 161 1． 231 1． 328 1． 672
7 0． 291 0． 453 0． 593 0． 667 0． 695 0． 808 0． 865 0． 895 1． 000 1． 158 1． 235 1． 331 1． 672
8 0． 290 0． 456 0． 593 0． 670 0． 691 0． 809 0． 864 0． 895 1． 000 1． 156 1． 235 1． 327 1． 673
9 0． 292 0． 452 0． 593 0． 667 0． 690 0． 807 0． 865 0． 899 1． 000 1． 158 1． 231 1． 332 1． 676
10 0． 291 0． 451 0． 594 0． 668 0． 691 0． 808 0． 864 0． 896 1． 000 1． 160 1． 232 1． 330 1． 677
表 3 短叶决明指纹图谱共有峰相对峰面积
样品号
峰号
1 2 3 4 5 6 7 8 9(S) 10 11 12 13
1 3． 923 0． 317 1． 305 1． 201 1． 102 3． 804 2． 184 1． 202 1． 000 0． 991 0． 402 0． 313 1． 355
2 2． 159 0． 203 1． 274 1． 193 1． 114 3． 624 2． 024 1． 157 1． 000 0． 995 0． 399 0． 510 1． 324
3 2． 917 0． 257 1． 245 1． 186 1． 120 3． 638 1． 987 1． 114 1． 000 0． 994 0． 394 0． 408 1． 201
4 3． 945 0． 241 1． 197 1． 164 1． 115 3． 705 1． 812 1． 096 1． 000 0． 990 0． 393 0． 415 1． 105
5 3． 715 0． 263 1． 112 1． 104 1． 123 2． 914 1． 582 0． 986 1． 000 0． 981 0． 401 0． 391 0． 914
6 3． 746 0． 225 1． 121 0． 421 1． 117 2． 458 1． 401 0． 903 1． 000 0． 979 0． 396 0． 493 0． 627
7 4． 996 0． 082 1． 225 0． 320 1． 129 4． 125 1． 383 0． 825 1． 000 0． 984 0． 390 0． 366 0． 312
8 4． 976 0． 075 1． 313 0． 318 1． 131 4． 231 1． 162 0． 733 1． 000 0． 963 0． 390 0． 440 0． 203
9 4． 257 0． 062 1． 309 0． 224 1． 125 4． 322 1． 098 0． 715 1． 000 0． 974 0． 400 0． 397 0． 212
10 5． 421 0． 066 1． 305 0． 101 1． 132 4． 840 1． 012 0． 702 1． 000 0． 989 0． 393 0． 413 0． 197
度。1 ～ 10 号样品的指纹图的相似度依次为0． 967、
0． 985、0． 929、0． 998、0． 992、0． 998、0． 839、0． 995、
0． 940、0． 935，除第 7 号样品外，其余 9 批样品的相似
度均 ＞0． 900，相似度较高，表明化学成分基本一致。
3 讨论
3． 1 流动相的选择
本文比较了甲醇-磷酸、乙腈-磷酸系统，发现乙
腈-磷酸为流动相进行梯度洗脱，其分离效果较好，
出峰数多且分布均匀，故选择乙腈-磷酸系统作为流
动相。此外，以乙腈-磷酸系统作为流动相，还比较
了不同的梯度洗脱条件，最终确定了上述梯度洗脱
条件。
3． 2 检测波长的选择
在优化色谱条件时，采用二极管阵列检测器对
供试品溶液在波长 200 ～ 400 nm 内进行扫描，并比
较不同波长下的色谱图。结果表明，在 285 nm处检
测到的指纹图谱信息量多、峰形好、基线较平稳，故
选择 285 nm作为指纹图谱的检测波长。
3． 3 内参物的选择
前期对短叶决明及其干燥成熟种子进行了化学
成分的研究，从短叶决明子中分离鉴定得到七个化合
物［6］，针对上述成分进行了含量测定，其中橙黄决明
素的含量最高，且在指纹图谱中峰形最好，故在指纹
图谱分析时选用橙黄决明素作为内参物进行分析。
3． 4 供试品溶液制备方法的选择
在优选供试品溶液制备方法时，分别采用水、甲
醇、乙醇及不同比例的混合溶液进行超声、回流提
取，提取液用相应的溶液补足重量后进样分析，结果
色谱图峰形差、基线不平稳;考虑到短叶决明与小决
明同属豆科决明属植物，故采用中国药典 2015 年版
项下决明子的供试品溶液制备方法进行制备，结果
色谱图峰形、基线有很大的改善。因此选择该方法
作为供试品溶液的制备方法。
3． 5 不同产地短叶决明差异性
本研究通过分析 10 批不同产地的短叶决明，建
立了指纹图谱及共有模式。由指纹图谱可知，虽然
产地各不相同，但 10 批短叶决明样品的 HPLC 色谱
图的整体相似度较高，在0． 839 ～ 0． 998之间，表明化
学成分基本一致;不同产地的短叶决明的差异主要
表现在某些化学成分含量的不同，上述差异可能与
短叶决明的产地、生长气候有关。因此，归属并鉴定
其具体成分，解释不同产地的短叶决明指纹图谱中
化学成分的差异还有待进一步研究。
参 考 文 献
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(2016-05-19 收稿 2016-06-21 修回)
1781
中国药师 2016 年第 19 卷第 10 期 China Pharmacist 2016，Vol． 19 No． 10