全 文 ：第 20 卷 第 4 期
2011 年 7 月
云南民族大学学报(自然科学版)
Journal of Yunnan University of Nationalities(Natural Sciences Edition)
Vol． 20 No． 4
Jul． 2011
收稿日期:2010 － 10 － 26．
基金项目:云南民族大学化学与生物技术学院大学生创新实验计划项目(2009HSCX02)．
作者简介:钟佳(1987 －) ，女，硕士研究生．主要研究方向:分离分析科学．
通讯作者:叶艳青(1967 －) ，女，硕士，教授．主要研究方向:分离分析科学．
doi:10． 3969 / j． issn． 1672 － 8513． 2011． 04． 009
大叶羊蹄甲中黄酮类化合物提取方法的初步研究
钟 佳，马金晶，罗 雯，宋 爽，叶艳青
(云南民族大学 民族药资源化学国家民委 －教育部重点实验室，云南 昆明 650521)
摘要:采用正交试验，分别用醇提法和超声波提取大叶羊蹄甲中的黄酮类化合物，比较 2 种方法
的提取效果及黄酮类化合物的含量，从而得到最佳的工艺方案．实验结果表明:超声提取法效果
较好，其最佳条件是:固液比 1∶15，乙醇体积分数为 90%，超声时间 15 min，超声频率为 500 W，提
取率为 14． 56% ．
关键词:大叶羊蹄甲;黄酮类化合物;提取方法
中图分类号:R 931;O 657. 3 文献标志码:A 文章编号:1672 － 8513(2011)04 － 0275 － 03
Study on the Extraction Process of Flavonoids from Bauhinia
ZHONG Jia，MA Jin-jing，LUO Wen，SONG Shuang，YE Yan-qing
(Key Laboratory of Ethnic Medicine Resource Chemistry，State Ethnic Affairs Commission ＆ Ministry of Education，
Yunnan University of Nationalities，Kunming 650031，China)
Abstract:The extracting conditions of flavonoid compounds from Bauhinia by the alcohol extracting and ultrasonic
extracting methods were studied． The results showed that the ultrasonic extracting was a better way． The ratio of
solid to liquid is 1∶15，ethanol concentration 90%，ultrasonic time 15 min and ultrasonic frequency of 500 W． Un-
der such conditions，the extraction of flavonids has been 14. 56% ．
Key words:Bauhinia variegata L;flavonoids ;extraction method
大叶羊蹄甲为豆科(Leguminosae)褐毛羊蹄甲
属(Bauhinia)植物的干燥藤茎，秋、冬季采收，除去
侧枝，切成厚片，干燥．具有清热凉血、祛风解毒、活
血通经、消肿止痛等功效［1］． 关于羊蹄甲属植物的
研究文献报道不多［2 － 4］，对于其中的黄酮类化合物
的超声提取研究未见报道．本文采用正交试验，分别
用醇提法和超声波提取大叶羊蹄甲中的黄酮类化合
物，比较 2 种方法的提取效果及黄酮类化合物的含
量，从而得到最佳条件［5 － 7］．
1 实验部分
1． 1 仪器和试剂
WFJ7200 型分光光度计(尤尼柯 UNICO) ;
AR224CN 型电子天平(上海奥豪斯仪器有限公
司) ;SP － 752 型紫外可见分光光度计(上海光谱仪
器有限公司) ;电热恒温干燥箱(天津市津北真空仪
器厂) ;SG3200HE 型超声波清洗器(上海冠特超声
仪器有限公司)．
大叶羊蹄甲原药(购于西双版纳傣族自治州民
族医药研究所原药材) ;芦丁标准品(中国药品生物
制品检定所) ;乙醇(分析纯)、亚硝酸钠、硝酸铝、氢
氧化钠;实验用水为去离子水．
1． 2 实验方法
1． 2． 1 大叶羊蹄甲中黄酮类物质的测定
1)标准曲线的绘制．称取 120 ℃干燥恒重芦丁
100. 8 mg，用 60%微热乙醇溶解，定容至 100. 00 mL，
得质量浓度为 1. 008 mg /mL 的标准储备液．分别准
确吸取标准使用液 0. 0，0. 2，0. 4，0. 6，0. 8，1. 0，1. 2，
1. 4，1. 6 mL于 9 只 25 mL 容量瓶中，加 10 mL 30%
乙醇，加 5% NaNO2 溶液 1. 0 mL，摇匀，放置 6 min，
加 10% Al(NO3)3溶液 1. 0 mL，摇匀，放置 6 min ，加
1 mol /L NaOH溶液 10 mL，加水稀释至刻度，摇匀，
放置10 ～ 15 min，于 500 nm 波长处测定吸光度，绘
制标准曲线． 标准曲线的回归方程:Y = 12. 512X +
0. 015 3，R2 = 0. 999 9．
2)样品中总黄酮的测定方法．准确吸取样品液
1． 0 mL ，置于 10 mL容量瓶中，用 60 %乙醇稀释至
刻度，取 2 mL于 25 mL 容量瓶中，按标准曲线制备
方法测定吸光度．所测样品吸光度值经标准曲线回
归方程换算后，得出提取液总黄酮浓度，然后按下式
计算提取率:
提取率(%)=(C ×稀释倍数 × V)/W × 100%．
C :根据所测定的溶液的吸光度值，代入回归方
程计算出相应的总黄酮含量;
W :实验称取大叶羊蹄甲的质量;
V :测定时大叶羊蹄甲的定容体积．
1． 2． 2 大叶羊蹄甲预处理
将大叶羊蹄甲用自来水快速冲洗干净后，再用
去离子水洗 2 ～ 3 次，置于烘箱中，于 60 ～ 65 ℃烘
5 h，取出冷却后粉碎，过孔径为 0. 301 mm 的筛，将
筛好的粉末置于干燥器中备用．
1． 2． 3 提取方法
1)醇提法． 准确称取 2． 000 g 大叶羊蹄甲粉
末，加入一定体积的乙醇，进行醇提回流，抽滤，定
容，用分光光度法对其黄酮类物质含量进行测定．
取提取温度，提取时间，乙醇体积分数，固液比进
行正交试验，醇提法因素及水平设计见表 1．
表 1 醇提法因素水平设计
因素水平
回流温度 /
℃
提取时间 /
h
乙醇体积
分数 /%
固液比
1 60 3 70 1∶20
2 70 2 80 1∶15
3 80 1 90 1∶10
2)超声提取法． 准确称取 2． 000 g 大叶羊蹄
甲粉末，用乙醇浸泡 24 h，在室温下进行超声提
取，抽滤，定容，用分光光度法对其黄酮类物质含
量进行测定．取超声频率，超声时间，乙醇浓度，固
液比进行正交试验，超声波提取法因素及水平表
设计见表 2．
表 2 超声波因素水平设计
因素
水平
超声功率 /
W
超声时间 /
min
乙醇体积
分数 /%
固液比
1 300 15 70 1∶20
2 400 30 80 1∶15
3 500 45 90 1∶10
2 结果与分析
2． 1 醇提法提取效果
由表 3 可知，回流温度的极差最大(1 ． 31) ，
提取时间的极差最小(0 ． 15) ，根据极差分析表
明，醇提法的因素影响大小依次为:回流温度 ＞
乙醇体积分数 ＞固液比 ＞ 提取时间 ． 最后确定出
最佳提取条件为:回流温度为 80 ℃，乙醇体积分
数为 80%，固液比 1 ∶ 20，提取时间为 1 h． 该条件
下黄酮提取率为 11 ． 81% ．
表 3 正交实验结果与分析
次数
回流
温度 /℃
提取
时间 /h
乙醇体积
分数 /%
固液比
黄酮提
取率 /%
Ⅰ 1 1 1 1 10. 03
Ⅱ 1 2 2 2 10. 26
Ⅲ 1 3 3 3 10. 21
Ⅳ 2 1 2 3 10. 96
Ⅴ 2 2 3 1 10. 09
Ⅵ 2 3 1 2 10. 16
Ⅶ 3 1 3 2 11. 24
Ⅷ 3 2 1 3 11. 39
Ⅸ 3 3 2 1 11. 81
10. 17 10. 74 10. 53 10. 64
10. 40 10. 58 11. 01 10. 55
11. 48 10. 73 10. 51 10. 85
极差 1. 31 0. 15 0. 50 0. 30
2． 2 超声提取法提取效果
由表 4 可知，固液比的极差最大(0 ． 6) ，超声
频率的极差最小(0 ． 11) ，根据极差分析表明，超
声波因素影响大小依次为:固液比 ＞ 乙醇体积分
数 ＞超声时间 ＞超声频率 ． 最后确定出最佳提取
条件为:超声频率为 500 W，超声时间为 15 min，
乙醇体积分数为 90%，料液比为 1 ∶ 15 ． 该条件下
黄酮提取率为 14. 56% ．
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表 4 正交实验结果与分析
次数
超声
功率 /W
超声
时间 /min
乙醇体积
分数 /%
固液比
黄酮提
取率 /%
Ⅰ 1 1 1 1 13. 52
Ⅱ 1 2 2 2 13. 68
Ⅲ 1 3 3 3 14. 13
Ⅳ 2 1 2 3 14. 26
Ⅴ 2 2 3 1 13. 74
Ⅵ 2 3 1 2 13. 36
Ⅶ 3 1 3 2 14. 56
Ⅷ 3 2 1 3 13. 89
Ⅸ 3 3 2 1 13. 22
13. 78 14. 11 13. 59 13. 49
13. 79 13. 77 13. 72 13. 87
13. 89 13. 57 14. 14 14. 09
极差 0. 11 0. 54 0. 55 0. 60
3 结论
1)经过比较可知，在各种不同条件下，超声提
取法对大叶羊蹄甲中黄酮类物质的提取率都比醇提
法的高，且时间短，主要由于超声的空化作用引起的
机械力和热作用．所谓超声空化，就是一种超声在液
体内形成空化泡的现象．空化泡在液体中迅速产生、
长大、压缩、闭合、崩溃，这个运动过程不断地快速重
复，会产生瞬时高温、高压，并有强烈的冲击波和高
速射流伴随产生，致使大叶羊蹄甲中的细胞壁破裂，
从而加快了溶剂进入细胞内的速度，促进细胞中的
总黄酮类物质直接、快速地向溶剂中溶解、转移，并
加快了转化速度［8 － 10］． 与醇提法的浸润、渗透、解
吸、溶解、扩散、置换等过程相比，超声法的超声空化
作用大大加速了总黄酮类物质的提取速度，缩短了
提取时间，增加了大叶羊蹄甲中总黄酮类物质提
取率．
2)正交试验结果显示:超声时间、超声频率、溶
剂的不同浓度等都对超声提取大叶羊蹄甲中总黄酮
类物质提取率有一定的影响． 其超声波因素影响大
小依次为:固液比 ＞乙醇体积分数 ＞超声时间 ＞超
声功率．用超声提取法提取大叶羊蹄甲的黄酮类物
质，最佳的提取工艺是固液比为 1 ∶ 15，乙醇浓度为
90%，超声时间 15 min，超声功率为 500 W，在此条
件下，得到黄酮的提取率为 14． 56 % ．
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(责任编辑 王 琳)
772第 4 期 钟 佳，马金晶，罗 雯，等:大叶羊蹄甲中黄酮类化合物提取方法的初步研究