全 文 ：〔收稿日期〕2007-03-05
〔基金项目〕湖南省科技厅重点课题(04SK1007-10)。
〔作者简介〕蔡 莹(1982-),女,硕士研究生,主要从事消化系统疾病研究。
〔通讯作者〕- 蔡光先,男,博士生导师,Tel:0731-8458001。
生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜
形态学的影响
蔡 莹 1,蔡光先 2-,刘柏炎 2,杨 辉 3,谢 勇 3
(1.湖南中医药大学 2004级研究生班,湖南 长沙 410007;2.湖南中医药大学,湖南 长沙 410007;
3.湖南中医药大学研究生,湖南 长沙 410007)
〔摘要〕目的 观察生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜形态学的影响。方法 选用雄性昆明种小鼠,随机分
为正常组、空白对照组、生晒参汤剂组、生晒参超微饮片全剂量组(含生药 2.5g/kg)及生晒参超微饮片 1/2剂量
组(含生药 1.25g/kg),采用利血平法制备脾虚动物模型,分别给予生理盐水、生晒参超微滤液及生晒参传统汤
剂,造模及给药后处死小鼠,取小肠空肠段作光镜 HE染色观察小鼠小肠黏膜形态改变,电镜观察小肠超微结构
变化。结果 用药后生晒参超微饮片全剂量组能明显改善脾虚小鼠小肠上皮微绒毛,改善细胞质和细胞器结构,有
显著的修复作用。结论 生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜的修复作用优于生晒参传统汤剂。
〔关键词〕生晒参;超微饮片;脾虚模型;小肠黏膜;形态学;小鼠
〔中图分类号〕R285.5 〔文献标识码〕A 〔文章编号〕1000-5633(2007)03-0020-03
EfectofUltrafineGinsengPiecesonMucosalMorphology
ofSmalIntestineinSpleenDeficiencySyndromeinMice
CAIYing,CAIGuang-xian,LIUBo-yan,YANGHui,XIEYong
(TCMUniversityofHuan,Changsha,Hunan410007,Chian)
〔Abstract〕ObjectiveToinvestigatetheefectofultramicro-piecesofdryRadixginseng
onmucosalmorphologyofsmalintestineinthespleendeficiencyinmice.MethodsThemale
miceweredividedinto5groupsasnormalgroup, blankgroup, dryginsengdecoctiongroup,
normaldosagegroupwithultramicropiecesginsengand1/2dosagegroupwiththepiecesS The
modelsofspleendeficiencywerepreparedwithreserpinum methodandfedwithsaline, the
liquidoftheultramicro-piecesanddecoctionofdryginsengS Andthen, althemicewere
kiledandthemorphologicalandultramicro-structurechangesoftheirjejunum wereobserved
withelectro-scope.ResultTheepitheliochorialcelandthestructureofbothcytoplasmandor-
ganelewereimprovedobviouslyinspleendeficiencyingroupwithultramicro-piecesginseng.
Conclusiontheultramicro-piecesofdryginsengismoreefectivethanthetraditionaldrygin-
sengpiecesinrepairingactionsonmucousmembraneofsmalintestineinmice.
〔Keywords〕dryradixginsengS ultramicropieceS modelofspleendeficiencyS mucousmem-
braneofsmalintestineS morphologyS morphology;mice
2007年6月第 27卷第 3期
Jun.2007Vol.27No.3
湖 南 中 医 药 大 学 学 报
JournalofTCM Univ.ofHunan20
①正常组(×200);②模型组(×200);③生晒参超微饮片全剂量组(×200);④生晒参超微饮片全剂量组(×
400);⑤生晒参超微饮片 1/2剂量组(×200);⑥生晒参超微饮片 1/2剂量组(×400);⑦生晒参汤剂组(×
200);⑧空白对照组(×200)
图1生晒参超微饮片 1/2对脾虚小鼠小肠黏膜形态学的影响
脾虚证是中医常见证型,可见于消化系统多种疾病,现
代研究表明,中医的脾本质是以消化系统为主的多系统功能
综合单位,脾虚主要表现在小肠功能的改变[1]。小肠既是药物
吸收的主要场所,又是脾虚证主要病变部位,且人参具有益
气健脾之功效。基于此,本研究旨在观察生晒参超微饮片对
脾虚小鼠小肠黏膜形态学的影响。
1材料与方法
1.1 材料
1.1.1 动物 健康雄性昆明种小鼠,清洁级,体质量(20±2)
g,由湖南中医药大学实验动物中心提供,合格证号:医动字
号 20-002。
1.1.2 药物 购置生晒参药材,由湖南省中药超微工程技术
中心检测合格后,按有关工艺分别加工为超微和传统饮片。传
统饮片第1次煎加水500mL,煎汁 150mL,第 2次煎加水
300mL,煎汁 150mL,将两次煎液混匀;超微饮片先 60℃开
水 1000mL搅拌,静止 10min,纱布过滤取上清液,再加水
1000mL,如前取上清液,两次煎液混匀。将传统饮片及超微
滤液分别浓缩成每毫升含生药 1g,冷藏备用。
1.1.3 试剂与仪器 利血平注射液,广东邦民有限公司产
(批号:040620,规格:1mL/mg);BX-51光学显微镜 (日本
Olympus公司),8800型超薄切片机 (LKB公司),H-600透
射电镜(日立公司)。
1.2 方法
1.2.1 动物分组与造模 将小鼠随机分为 5组,分别为正常
组、空白对照组、生晒参汤剂组、生晒参超微饮片全剂量组
(含生药 2.5g/kg)及生晒参超微饮片 1/2剂量组 (含生药
1.25g/kg)。除正常组外,余 4组采用利血平法制备脾虚动物
模型[2],即按皮下注射利血平 0.25mg/mL每天 1次,连续注
射 14d。
1.2.2 给药方法 模型制备成功后,空白对照组灌胃生理盐
水 20mL/(kg·d),生晒参汤剂组、生晒参超微饮片全剂量组
均灌胃含生药 2.5g/kg(按成人 70kg体质量每次服用 10g
折算 2倍量给药),生晒参超微饮片 1/2剂量组灌胃含生药
1.25g/kg,连续给药 12d。
1.2.3 观察方法 造模及给药后分别脱颈处死小鼠,取小肠
空肠段,经 0.01mol/LPBS冲洗后,作光镜、电镜观察。
1.2.4 光镜标本制备 处死动物后,取空肠 1cm组织,4%
多聚甲醛固定 24h,常规脱水,沿纵轴方向石蜡包埋,切片
HE染色,光镜观察。
1.2.5 透射电镜标本制备 样品经 2.5%戊二醛固定后,0.1
mol/LPBS漂洗,1%锇酸后固定,0.1mol/LPBS漂洗,丙酮
逐级脱水(浓度为 50%、70%、90%、100%)后,Epon812环氧树
脂与 100%丙酮 1∶1比例浸泡,Epon812环氧树脂浸泡、包埋,
LKB公司 8800型超薄切片机切片,醋酸铀、硝酸铝双重染色
后,日立 H-600透射电镜观察。
2结果
2.1 生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜形态学的影响
正常组未见任何病理性变化,小肠绒毛结构正常,黏膜上
皮无变化,固有膜正常,肠腺无改变(见图 1①)。模型制备成
功后,脾虚小鼠小肠绒毛变细变短,肠上皮变矮,柱状上皮立
方形改变,固有膜空泡样改变(见图1②)。生晒参超微饮片全
剂量组与正常对照组的组织学观察基本一致 (见图 1③④),
生晒参超微饮片1/2剂量组小肠黏膜改变趋于正常(见图 1⑤
⑥)。生晒参汤剂组:小肠绒毛基本正常,上皮部分稀散不完
整,肠腺变小,可发现弥散淋巴组织,游离面上皮立方形改变,
固有膜空泡样改变(见图 1⑦)。空白对照组小肠绒毛及肠腺
基本正常,游离面绒毛上皮松散。柱状上皮立方形改变,固有
膜松散,空泡样改变(见图1⑧)。
① ② ③ ④
⑤ ⑥ ⑦ ⑧
蔡 莹,等 生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜形态学的影响第 3期 21
①②正常组;③模型组;④⑤生晒参超微饮片全剂量组;⑥生晒参超微饮片 1/2剂量组;⑦生晒参汤剂组;⑧空白对照组
图 2 生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜超微结构的影响(×7000)
2.2生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜超微结构的影响
正常组表面微绒毛丰富,排列规则整齐,胞浆内线粒体
丰富(见图 2①),固有结构正常(见图 2②)。脾虚模型组上皮
细胞轻度肿胀,微绒毛略显稀疏,胞浆线粒体肿胀,嵴丢失呈
空泡变,固有膜局灶水肿,细胞水肿空泡样变(见图 2③)。由
此可见,正常组与脾虚模型组有显著差异,证明脾虚模型制
备成功。生晒参超微饮片全剂量组,细胞结构趋于正常,上皮
细胞内可见散在颗粒(见图 2④⑤)。生晒参超微饮片 1/2剂
量组,病变基本同生晒参超微饮片全剂量组,绒毛略比正常
稀疏,胞浆内部分线粒体有轻度肿胀,嵴较松散,上皮细胞内
见散在圆形颗粒,固有膜改变不明显(见图2⑥)。生晒参汤剂
组,上皮细胞变矮,细胞间隙不清晰,微绒毛变短,胞浆内线
粒体丰富,部分结构不清晰,固有膜改变不明显(见图 2⑦)。
空白对照组,上皮细胞柱状,微绒毛基本整齐,固有膜仅见局
灶细胞间隙有增宽,腺细胞内见丰富的溶酶体,亦可见少数
腺细胞有固缩,呈凋亡改变(见图 2⑧)。
3讨论
脾虚小鼠出现的腹泻症状及光镜下小肠组织损伤等表
现,说明脾虚与小肠黏膜有相关联系。《素问·经脉别论》曰:
“人以水谷为本,故人绝水谷则死,脉无胃气亦死”,小肠黏膜
上皮在机体消化过程中主要发挥消化和吸收功能,其微绒毛
及细胞质内线粒体内质网与消化吸收密切相关[3]。小肠上皮
黏膜形态学改变及小肠上皮细胞超微结构的改变,亦是反映
模型是否制备成功的指标之一。由此可见,小肠尤其是其超
微结构是机体对物质的吸收、消化与转运的重要场所之一。
中药超微饮片是一种新型的中药饮片,它采用超微粉体
等先进技术将中药材超微细粉化,其微粉粒径在 1～75)m,
能保持传统中药固有药效学物质基础的粒度。细胞破壁率达
90%以上的中药超微饮片[4],能大大提高中药成分的利用率,
减少中药资源的浪费。中医认为,人参味甘、微苦,入脾、肺、
心经,有大补元气,补益脾肺,生津安神之功,为健脾益气之
要品。前期研究发现人参大、中、小粒径超微粉 Rg1含量均高
于人参饮片,说明人参类药材经超微粉碎后人参皂苷类成分
的浸出明显优于其传统饮片[5]。
本试验用利血平法造模后,光镜下显示,脾虚小鼠小肠绒毛
变细变短,柱状上皮立方形改变,固有膜空泡样改变。透射电镜下
显示,脾虚模型小鼠小肠上皮细胞微绒毛稀疏,细胞轻度肿胀,胞
浆内部分线粒体肿胀,嵴丢失呈空泡样,固有膜局灶水肿,细胞水
肿空泡变等病理改变。这说明脾虚可导致小肠超微结构发生病理
改变。运用生晒参后,在透射电镜及光镜下观察,不同剂型的生晒
参均能改善脾虚小鼠小肠上皮微绒毛,改善细胞质和细胞器结
构,对小肠黏膜有不同程度的修复作用。尤其是生晒参超微饮片
全剂量组的小肠上皮组织结构趋于正常,据实验结果,生晒参超
微饮片全剂量组的小肠黏膜结构的复健效果明显优于生晒参汤
剂组。同时在电镜下观察发现生晒参超微饮片全剂量组的小肠黏
膜表面附着的微束颗粒比生晒参汤剂组的多,这可能是微米中药
制剂所含的药物粉末直接通过胞饮进入细胞比传统汤剂多,说明
超微中药制剂比传统中药制剂可以增加吸收速率和吸收量。研究
表明,生晒参超微饮片1/2剂量组对小肠黏膜的修复作用略逊于
生晒参超微饮片全剂量组,但与生晒参汤剂组作用相近。
参考文献:
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① ② ③ ④
⑤ ⑥ ⑦ ⑧
湖南中医药大学学报 2007年第 27卷
(本文编辑 彭芝配)
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