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薄层扫描法比较红参及葛根人参中人参皂苷Re的含量



全 文 :人参研究 GINSENG RESEARCH 2012 年第 3 期
薄层扫描法比较红参及葛根人参中人参皂苷 Re的含量
刘芳芳 何晶晶 郑毅男*
(吉林农业大学发展学院·吉林 长春·130600)
摘 要:目的 探讨新型辅料人参——葛根人参的加工工艺,并建立葛根人参及红参中人参皂苷 Re的含量
比较方法。方法 采用 70%乙醇超声提取葛根中的有效成分,旋转蒸发仪适当浓缩,浸入人参煎煮,
待葛根提取液完全浸入参体后烘箱 35℃低温干燥得葛根人参;以甲醇超声提取红参及葛根人参,
点板(硅胶 G板),进行薄层扫描(λS= 550 nm , λR=650nm)。 结果 人参皂苷 Re 点样量在 2~18ul
范围内,点样量与峰面积呈良好的线性关系,得标准曲线 Y=161.2X-166.84,r=0.9994; 红参及葛根
人参中人参皂苷 Re的含量分别为 0.19%和 0.21%。 结论 薄层扫描法操作简便,结果准确,可以用
作比较红参及葛根人参中人参皂苷 Re的含量。
关键词:薄层扫描法;红参;葛根人参;人参皂苷 Re;含量
Compare the Content of Ginsenoside Re in Red Ginseng and Puerarin Ginseng
LIU Fang-fang1,2,HE Jing-jing1,ZHENG Yi-nan1
(1. Development College of Jilin Agricultural University, Changchun 130600 ,China
2.College of Chinese Medicinal Materials,Jilin Agricultural University,Changchun 130118,China)
Abstract:Objective To explore processing technology of the new auxiliary material ginseng products -puerarin ginseng and establish a
content determination method of ginsenoside Re in red ginseng and puerarin ginseng.Methods Using ultrasonic with 70%
ethanol to extract effective components in puerarin and appropriate enrichment using rotary evaporation apparatus,then put
ginseng in this liquid,drying;extract the effective components using methanol ultrasonic and scanning (λS= 550 nm , λR=
650nm).Results Sample quantity and peak area is a good linear relationship .The standard curve is Y=161.2X-166.84,r=0.9994
and the contents of ginsenoside Re are respective 0.19%和 0.21% in red ginseng and puerarin ginseng.Conclusions Thin layer
scanning method operation is simple, accurate, and can be used as a comparison red ginseng and puerarin ginseng in the
content of ginsenoside Re.
Key words:Thin layer scanning;Red ginseng; Prarin ginseng;Ginsenoside Re;Content
葛根为豆科植物野葛 Pueraria lobata (Willd.)
Ohwi的干燥根。 习称野葛。 秋、冬二季采挖,趁鲜切成
厚片或小块;干燥。本品甘、辛,凉,具有解肌退热,头发
麻疹,生津止渴,升阳止泻的功效。 人参为五加科多年
生草本人参 Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根。 经蒸制
后的干燥品,称“红参”,红参常用为中药,具有大补元
气,复脉故脱的功效,用于心力衰竭,心源性休克等症,
收载于《中国药典》2010年版一部[1]。 本文首次探讨了
辅料人参的加工工艺及其中人参皂苷 Re的含量分析
方法, 通过利用薄层扫描法对红参及葛根人参中人参
皂苷 Re含量进行研究,并进行比较,方法简便、稳定、
快速、准确率高,为辅料人参的研究提供科学参考。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
人参为 4 年生购自吉林抚松,由郑毅男教授鉴定
为人参(Panax ginseng C.A. Meyer.);葛根、红参为市
售; 无水乙醇, 天津市河东区红岩试剂厂 (批号:
20110218);石油醚(60~90℃),天津市光复科技发展
有限公司(批号:20110218);冰乙酸,天津市光复科技
发展有限公司(批号:20111201);甲醇,天津市光复科
技发展有限公司(批号:2008101);正丁醇,北京化工
厂(批号:20100226);乙酸乙酯,天津市光复科技发展
有限公司(批号:20080823);硅胶板,青岛海洋化工厂
分厂(批号:20110305);人参皂苷 Re由中国药品生物
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人参研究 GINSENG RESEARCH 2012 年第 3 期
制品检定所提供。
1.2 仪器与设备
KH-3000 型薄层色谱扫描仪 (上海科哲生化科
技有限公司);数显恒温水浴锅(上海梅香仪器有限公
司);旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器);SHZ-D(Ⅲ)循
环水式真空泵 (河南省干华仪器有限公司);SB25-
12DT超声波清洗机 (宁波新芝生物科技股份有限公
司);多功能电热锅(周村辰星电器厂);电热板 DB-2
(国华);烘干箱(上海福玛实验设备有限公司);倾斜式
高速石能粉碎机 (北京中兴伟业仪器有限公司制造);
BS224S电子天秤(赛多利斯科学仪器有限公司)。
1.3 方法
1.3.1 葛根人参的加工方法
选取 4 年生鲜人参若干,要求:大小适中,体长
8cm 以上,无病斑,去侧枝及须留参棒,清洗除杂后自
然通风晾干。取适量,扎孔备用。称量人参 1/3重的葛
根,切碎,加 70%乙醇超声提取,常压过滤,浓缩至无
醇味加少量蒸馏水,浸入人参煮 30min,待葛根溶液
完全浸入参体后取出,置烘箱内 40℃烘干即得。
1.3.2 薄层色谱条件
展开剂 正丁醇-乙酸乙酯-水(4:1:5) 上层溶液;
显色剂 10%硫酸乙醇溶液,于 105℃烘 5min显色。
1.3.3 薄层扫描条件
双波长反射法锯齿扫描 ,λS=550nm,λR=580nm,
Sx=3。
1.3.4 样品含量测定
1.3.4.1 对照品溶液的制备
精密称取人参皂苷 Re对照品 5mg, 加甲醇定容至
10ml容量瓶中,使成为浓度为 0.5mg/ml的对照品溶液。
1.3.4.2 供试品溶液的制备
分别取红参和葛根人参加甲醇浸没,超声提取提
取 3 次,每次 30min,旋转蒸发仪浓缩至干,水溶解,
等体积正丁醇萃取,取正丁醇层溶液旋转蒸发仪浓缩
至干,加少量蒸馏水溶解,过大孔树脂柱,100ml70%
乙醇溶液洗脱,收集洗脱液,所得洗脱液用旋转蒸发
仪浓缩至干,少量甲醇溶解,以甲醇定容于 5ml 容量
瓶中即得。
1.3.4.3 标准曲线的绘制
精密吸取人参皂苷 Re对照溶液2,6,10,14,18ul,
分别点于同一硅胶 G 板上按 “1.3.2” 项条件展开显
色,按“1.3.3”项条件进行扫描,测定并计算其吸收度积
分值。 点样量 X为横坐标,吸收度积分值为 Y为纵坐
标, 绘制标准曲线, 得回归方程 Y=161.2X-166.84,r=
0.9994,人参皂苷 Re在 0.001-0.009mg范围内,点样量
与吸收度积分值呈良好的线性关系,标准曲线见图 1。
图 1 人参皂苷 Re的标准曲线图
Fig.1 Calibration curve of ginsenoside Re
1.3.4.4 样品含量测定
分别精密吸取红参及葛根人参样品溶液各 2μl;
人参皂苷 Re 对照品溶液 2μl,6μl,10μl,14μl,18μl,
同板点样,在“1.3.2”项条件下展开,并于“1.3.3”项条
件下进行薄层扫描。
1.3.5 精密度实验
精密吸取同一对照品溶液,按照“1.3.2”和“1.3.3”
条件,测得日内精密度 RSD为 0.399%(n=6)。
2 结果与讨论
2.1 结果
经薄层扫描法定量分析得红参中人参皂苷 Re 的
含量为 0.19%; 葛根人参中人参皂苷 Re 的含量为
0.21%。
2.2 讨论
有实验研究认为, 人参皂苷 Re能改善化学药物
如东莨菪碱等所致的记忆障碍,有促智的作用,同时
能改善自然衰老以及增强基础突触传递,促进突触传
递的长时程增强[2]。
薄层色谱,操作﹑显色比较方便,斑点集中,薄层
板耐腐蚀。由于分离后的薄层色谱体系包括过量吸附
剂﹑粘合剂﹑荧光指示剂,残余溶剂和盐等,每个斑点
都很难达到完全纯净,因而可以进行多次实验确定准
确性或者用更好的方法来进行含量测定。
另外本实验研究的葛根人参为国内外首创的一
种辅料人参,制备方法也为首次尝试,经加工的葛根
人参不但外观及口感好,而且其作用同时体现有葛根
及人参的原有药效。关于葛根人参的化学有待进一步
研究,尤其是药理活性,葛根人参是否有更强的药效
活性,有待后续实验研究发现。
*本文通讯作者
参 考 文 献
[1]《中国药典》2010版
[2] 赵莹,刘金平,卢丹,赵岩,李平亚.人参皂苷
Re促进自然衰老大鼠学习记忆作用及其机理的研究
[J].中国新药与临床药理,2007,18(1):20~22
刘芳芳等:薄层扫描法比较红参及葛根人参中人参皂苷 Re 的含量 17