全 文 ：·中药化学·
高效液相色谱法测定
荆芥穗有效部位中木犀草素和橙皮苷的含量＊
胡　峻　石任兵　张援虎
(北京中医药大学中药学院　北京 100102)
摘要:目的　采用 RP-HPLC 对荆芥穗有效部位中木犀草素和橙皮苷的含量进行测定 。方法　选用
TECHSPHERE ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm ,5 μm),乙腈-0.2%磷酸为流动相 ,梯度洗脱 ,洗脱流
速为 1.0 mL/min ,紫外检测波长为283 nm ,室温下对木犀草素和橙皮苷进行含量测定 。结果　木犀
草素和橙皮苷的线性范围分别为:0.036 ～ 0.12μg 和 0.27 ～ 0.9 μg ,平均回收率分别为:100.93 %,
RSD=1.59 %和 98.15%, RSD=0.43%。结论　本法操作简便 、准确 、可行 ,可作为荆芥穗有效部位
质量控制方法。
关键词:木犀草素;橙皮苷;反相高效液相色谱法
中图分类号:R284.2
　　荆芥穗为唇形科植物荆芥 Schizonepeta tenuifolia
Briq.的干燥花穗。荆芥穗芳香气烈 ,性微温 ,味辛 ,
入肝肺经 ,为中医临床极其常用的一种疏风解表药 ,
为众多医家所推崇 ,用于感冒 、头痛 、麻疹疮疡初起
等症的治疗。同时 ,荆芥穗也是各中药复方(如银翘
散)的重要组成药物。从银翘散的方源及其制方原
则 ,结合药物的效用与抗病毒活性的考察 ,荆芥穗为
银翘散抗流感病毒的主要药物之一 ,且黄酮类成分
为其主要的抗流感病毒活性有效部位[ 1 ,2] 。为此 ,
我们采用 RP-HPLC 测定了荆芥穗有效部位中木犀
草素和橙皮苷的含量 ,获得了满意的分析结果 ,可为
其质量控制提供参考 。
1　仪器与试药
1.1　仪器
Waters 600高效液相色谱泵 , Waters 2487 Dualλ
Absorbance 检测器 ,Millennium32 Chromatography Man-
ager 化学工作站。
1.2　试药
木犀草素(Luteolin)对照品(中国药品生物制品
检定所 ,批号 111520-200201 ,供含量测定用);橙皮
苷(Hesperidin)对照品(中国药品生物制品检定所 ,
批号0721-200010 ,供含量测定用);荆芥穗有效部
位由作者筛选得到;乙腈(色谱纯),甲醇(分析纯重
蒸),纯净水。
2　方法与结果
2.1　对照品溶液的制备
精密称取木犀草素对照品 6 mg ,置 100 mL 容量
瓶中 ,加甲醇超声溶解 ,定容至刻度 ,摇匀 ,即得浓度
为 0.06 g/L 的木犀草素对照品储备液 。再精密称取
橙皮苷对照品11.25 mg ,置25mL容量瓶中 ,加甲醇超
声溶解 ,定容至刻度 ,摇匀 ,即得浓度为 0.45 g/L的橙
皮苷对照品储备液 。分别精密吸取木犀草素对照品
储备液和橙皮苷对照品储备液各 1 mL ,置同一10 mL
容量瓶中 ,加甲醇稀释 ,定容至刻度 ,摇匀 ,即得含木
犀草素 0.006 g/L和橙皮苷0.045 g/L 的对照品溶液。
2.2　供试品溶液的制备
精密称取荆芥穗有效部位干膏约 100 mg ,置 25
mL容量瓶中 , 加 50%乙醇超声使溶解 , 定容至刻
度 ,摇匀 。经 0.45μm 微孔滤膜过滤 ,即得。
2.3　色谱条件
色谱柱 TECHSPHERE ODS 色谱柱(250 mm ×
4.6mm ,5 μm),流动相:A(乙腈), B(0.2%磷酸溶
液),二元梯度洗脱 ,梯度洗脱条件为:0 ～ 20 min VA
∶VB=20∶80;20 ～ 30 minVA∶VB=25∶75 ;30 ～ 50min
VA∶VB=30∶70;洗脱流速为 1.0 mL/min ,紫外检测
波长为 283 nm ,室温下对木犀草素和橙皮苷进行含
量测定。在上述条件下 ,样品中木犀草素和橙皮苷
的色谱峰与其他组分分离良好 ,结果见图 1。
·52·
北京中医药大学学报
Journal of Beijing University of Traditional Chinese Medicine
　 　第 28 卷第 4 期 2005年 7 月
Vol.28 No.4 July.2005

教育部科学技术研究重点项目
胡　峻 ,女, 30岁 ,在读医学硕士生
A对照品(tR=13.844 min为橙皮苷;tR=39.537 min为木犀草素)　 B样品
图 1　HPLC色谱图
2.4　线性考察
精密吸取上述标准溶液 6.0 , 10.0 , 14.0 , 18.0 ,
20.0μL注入高效液相色谱仪中 。按照上述色谱条
件测定峰面积 ,以峰面积为纵坐标 ,对照品的进样量
为横坐标 ,绘制标准曲线 ,得木犀草素和橙皮苷的标
准曲线分别为:C=4461759.654A +65845.012(r =
0.9999);C = 1631973.848A +105272.805(r =
0.9999)。表明木犀草素在 0.036 ～ 0.12 μg 范围内 、
橙皮苷在 0.27 ～ 0.9μg 范围内与其峰面积呈良好的
线性关系 。
2.5　精密度试验
精密吸取对照品溶液 20 μL ,重复进样 5次 ,按
上述色谱条件测定峰面积 ,计算相对标准偏差 ,结果
木犀草素 RSD=0.80%,橙皮苷 RSD=0.20%。
2.6　稳定性试验
精密吸取同一批供试品溶液 5 μL ,每间隔一定
时间进样 ,共测定 5次 ,计算相对标准偏差 ,结果木
犀草素 RSD=0.99%,橙皮苷 RSD=0.22%。表明
供试品溶液在 24 h内相当稳定。
2.7　重现性试验
按“供试品溶液的制备”项下方法处理同一批样
品5份 ,依法测定 , 计算相对标准偏差 ,样品中木犀
草素 RSD=2.70%,橙皮苷 RSD=0.71%。
2.8　加样回收率试验
精密称取已测知含量的荆芥穗有效部位干膏约
75 mg ,置 25 mL 容量瓶中 ,定量加入木犀草素和橙
皮苷对照品适量 ,依法测定 ,结果见表 1 、表 2。平均
回收率为木犀草素 RSD=1.59%(n =6), 橙皮苷
RSD=0.43%(n=6)。
2.9　样品测定
分别精密称取 3批荆芥穗有效部位干膏 ,按供试
品溶液制备方法进行制备样品溶液。取样品溶液 10
μL ,注入液相色谱仪 ,依法测定 3次 ,计算荆芥穗有效
部位中木犀草素和橙皮苷的含量。结果见表3。
表 1　木犀草素加样回收率试验(n =6)
样品中
木犀草素
的量/ mg
加入的
木犀草素
的量/ mg
木犀草素
的测得
量/mg
回收率
/ %
平均回
收率/ %
RSD
/ %
0.01113 0.00808 0.01918 99.63
0.01110 0.00808 0.01923 100.62
0.01111 0.00808 0.01910 98.8 100.93 1.59
0.01114 0.00808 0.01929 100.87
0.01117 0.00808 0.01947 102.72
0.01113 0.00808 0.01944 102.85
表 2　橙皮苷加样回收率试验(n=6)
样品中
橙皮苷的
量/mg
加入的
橙皮苷
的量/ mg
橙皮苷的
测得量
/mg
回收率
/ %
平均回
收率
/ %
RSD
/ %
0.1023 0.0900 0.1908 98.33
0.1023 0.0900 0.1904 97.89
0.1024 0.0900 0.1902 97.56 98.20 0.43
0.1027 0.0900 0.1914 98.56
0.1030 0.0900 0.1918 98.67
0.1026 0.0900 0.1910 98.22
表 3　样品测定(n=3)
编号 木犀草素的含量/ % RSD/ %
橙皮苷
的含量/ % RSD/ %
1 0.38 1.51 3.41 0.61
2 0.39 1.83 3.44 0.83
3 0.38 2.01 3.40 1.22
3　讨论
据文献报道[ 3] ,黄酮类物质是抗流感病毒的活
性成分之一 ,可抑制流感病毒唾液酸酶的活性和抑
制膜融合作用。实验中发现荆芥穗有效部位中木犀
草素和橙皮苷的得率较高 ,且大量的文献表明二者
均具有良好的抗流感病毒生物活性。因此木犀草素
和橙皮苷的定量测定对于荆芥穗有效部位的质量控
·53·第 4期 胡　峻等　高效液相色谱法测定荆芥穗有效部位中木犀草素和橙皮苷的含量
制应具有重要的意义 。
参　考　文　献
1　石　钺 ,石任兵 , 刘　斌 ,等.银翘散抗流感病毒有效部位
群中黄酮类成分研究.中国中药杂志 , 2001 , 26(5):320～
323
2　石　钺 , 石任兵 , 刘　斌 , 等.银翘散抗流感病毒有效部
位群中总黄酮的含量测定.北京中医药大学学报 , 2001 ,
34(2):44～ 45
3　彭　勇 , 梁少伟 ,李文魁 , 等.国外抗流感病毒研究近况.
国外医学·植物药分册 , 1999 , 14(1):7 ～ 9
(收稿日期:2005-03-12)
Content determination of luteolin and hesperidin in the effective
fractions of Spica Schizonepeta by HPLC
Hu Jun(胡　峻),Shi Renbing(石任兵),Zhang Yuanhu(张援虎)
(Beijing University of Traditional Chinese Medicine , Beijing 100102)
Abstract:Objective 　To determine the contents of luteolin and hesperidin in the effective fractions of Spica
Schizonepeta by using HPLC.Methods　The contents of luteolin and hesperidin was determined at indoor temperature.
The chromatographic conditions included TECHSPHERE ODS column (250mm×4.6mm , 5μm)and the mobile phase
consisted of acetonitrile-0.2%phosphoric acid running in a gradient mode with a flow rate of 1.0ml/min.The detection
wavelength was at 283nm.Results　The linear rangers for luteolin and hesperidin were 0.036 ～ 0.12ug (r=0.9999)
and 0.27 ～ 0.9μg(r=0.9999)respectively.The average recovery of the procedure was 100.93%, RSD=1.59%(n
=6)for luteolin , and 98.15%, RSD=0.43%(n=6)for hesperidin.Conclution　This procedure , which is simple ,
accurate and feasible , can be used as a qualitative control of the effective fractions of Spica Schizonepeta.
Key Words:luteolin;hesperidin;RP-HPLC
·征订启事·
《北京中医药大学学报》2006年征订启事
《北京中医药大学学报》系中央级的高级中医药学术刊物 , 1959年创刊 ,由北京中医药大学主办 。现分
别属于中国自然科学核心期刊 、中国中文核心期刊 、全国中医药优秀期刊 、全国优秀科技期刊 、中国科学引文
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等。1998年我刊被俄罗斯《文摘杂志》(PЖ)正式做为文摘刊源 , 1999年我刊又被美国《化学文摘》(CA)正式
做为文摘刊源。进入国际著名检索系统 ,标志我刊已在国际期刊界享有一定的声誉 。2001年我刊以“双效
期刊”进入了中国期刊方阵。
本刊宗旨是为中医药教学 、科研 、医疗服务 ,主要反映中医药研究的新成果 、新成就 、新动态 ,贯彻“双百
方针” ,活跃学术空气 ,促进中医药学术发展。本刊最适合高级中医药工作者阅读参考。本刊以提高为主 ,兼
顾普及 。辟有“学科展望” 、“专家述评” 、“21世纪中医发展战略研讨” 、“博士之光” 、“名师与高徒” 、“科研思
路与方法” 、“科技之窗” 、“理论研究” 、“临床研究” 、“经典著作” 、“中医药实验研究” 、“中药化学” 、“制剂与炮
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·54· 北京中医药大学学报　 　 　 　　　　　　　　　　　　　　第 28卷