全 文 ：工作简报
高效液相色谱法同时测定槐枝中芦丁和槲皮素
陈华国1 , 2 , 靳凤云3 , 周　欣1 , 2＊ , 赵　超1 , 2 , 龚小见1 , 2
(1.贵州师范大学 天然药物质量控制研究中心 , 贵阳 550001;
2.贵州省山地环境信息系统与生态环境保护重点实验室 , 贵阳 550001;　3.贵阳中医学院 , 贵阳 550002)
摘　要:提出了用高效液相色谱法同时测定槐枝中芦丁和槲皮素含量的方法。采用 ZO RBAX
Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm ,5μm)为固定相 ,以甲醇-0.01 mol ·L-1乙酸铵(47+
53)混合溶液为流动相 ,在 360 nm 波长处用二极管阵列检测器检测 。芦丁和槲皮素的质量分别在
0.015 4 ～ 0.154 0 ,0.010 8 ～ 0.108 0 mg ·L-1之间与其相应的峰面积呈线性关系 ,检出限分别为
(3S/N)分别为 0.06 ,0.008 μg · g-1 。应用此法测定槐枝样品中芦丁和槲皮素的含量 ,加标回收
率分别为 97.4%～ 98.8%, 97.4%～ 98.2%;相对标准偏差(n=6)分别为 1.6%,1.8%。
关键词:高效液相色谱法;芦丁;槲皮素;槐枝
中图分类号:O652.63　　　文献标志码:A　　　文章编号:1001-4020(2010)07-0754-02
Simultaneous HPLCDetermination of Rutin and Quercetin in
Branches of Sophora Aponica L.
CHEN Hua-guo1 , 2 , JIN Fen-yun3 , ZHOU-Xin1 , 2＊ , ZHAO-Chao1 , 2 , GONG Xiao-jian1 , 2
(1.Research Center f or Quality Control of Natural Medicines , Guiz hou Normal University , Guiyang 550001 China;
2.Guiz hou P rovincial Key Lab.f or In formation S y stem of Mountainous Areas and Protection o f
Ecological Env ironments , Guiyang 550001 China;
3.Guiyang College o f TCM , Guiyang 550002 , China)
Abstract:H PLC w as applied to the simultaneous de te rmination of rutin and quercetin in branches of Sop hora
aponica L.ZORBAX Eclipse XDB-C18 column (4.6 mm ×250 mm , 5 μm)w as used as stationa ry pha se , and a
mix ture of methano l and 0.01 mo l· L -1 ammonium acetate so lution (47+53)w as used as mobile phase in the
HPLC analy sis with DAD detection at the w aveleng th o f 360 nm.Linea r relationships be tw een values of peak ar ea
and mass o f rutin and quercetin were kept in ranges of 0.015 4-0.154 0 mg· L-1 and 0.010 8-0.108 0 mg · L-1
with detection limits(3S/ N)of 0.06 , 0.008 μg · g -1 respectively.Nine samples were analy zed for contents o f rutin
and quercetin by the propo sed method , values of recove ry found by standard addition method were in ranges o f
97.4%-98.8% and 97.4%-98.2%, and value s o f RSD′s(n=6)found we re 1.6% and 1.8%, r espectively.
Keywords:HPLC;Rutin;Que rce tin;Branches of Sophora aponica L.
　　槐为豆科植物 ,槐枝为槐的嫩枝 ,其作为药用历
史悠久 ,用于治崩漏带下 ,心痛 ,目赤 ,痔疮 ,疥疮等
收稿日期:2009-06-16
基金项目:贵州省中小企业局平台建设项目黔中小发[ 2008] 76
　号;贵州省发展和改革委员会黔科合带帽字[ 2008] 5005号
作者简介:陈华国(1981-), 男 ,贵州遵义人 ,硕士 ,讲师 , 研究
　方向为中药 、民族药质量控制以及中药新药研发。
＊联系人
具有较好的疗效。槐枝中的主要化学成分为黄酮类
化合物 ,黄酮类化合物具有多种生物活性 ,有抗溃
疡 、抗过敏 、抗菌 、抗炎 、抗氧化 、抗衰老 、降血脂 、治
疗心脑血管疾病等功能 。随着研究方法的不断更新
和提高 ,新的黄酮类化合物不断被发现 ,出现了许多
新的应用 ,尤其在抗自由基和抗癌 、防癌上的应用意
义重大[ 1] 。芦丁和槲皮素是具代表性的黄酮类化合
物 ,现代药理试验证明芦丁 、槲皮素均具有扩张周围
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陈华国等:高效液相色谱法同时测定槐枝中芦丁和槲皮素
血管与冠状血管使血流量增加 ,起到降低血压的作
用[ 2-3] ,因此 ,测定药材中两者的含量具有重要作用
和意义。目前 ,单独测定芦丁或槲皮素的方法有分
光光度法和高效液相色谱法[ 4-5] ,同时测定这两种化
合物的方法大多采用梯度洗脱的方法 ,但梯度洗脱
对色谱柱和设备要求极高 ,重复性较差。本工作采
用高效液相色谱法无需梯度洗脱即能同时测定槐枝
中芦丁和槲皮素含量 ,方法简单 ,重复性好。
1　试验部分
1.1　仪器与试剂
Aglient 1100高效液相色谱仪 ,配四元泵 、二极
管阵列(DAD)检测器 、自动进样器。
甲醇为色谱纯 ,试验用水为重蒸水 ,其他试剂为
分析纯。
1.2　色谱条件
ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm ×
250 mm , 5μm),柱温 35 ℃,流量 1 mL·min-1 ,进
样体积 10 μL ,检测波长 360 nm , 流动相为甲醇-
0.01 mo l·L-1乙酸铵(47+53)混合溶液。
1.3　试验方法
称取槐枝粗粉 2.00 g 于锥形瓶中 , 加甲醇
40 mL ,超声提取 30 min ,过滤 ,滤渣用甲醇40 mL
进行超声提取 30 min , 过滤。合并两次滤液于
100 mL容量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,用0.45 μm
微孔滤膜滤过 ,在色谱条件下进行分离测定。
2　结果与讨论
2.1　测定波长的选择
选择扫描波长范围为 190 ～ 400 nm ,对芦丁和
槲皮素进行检测 ,吸收光谱图见图 1。
　　(a)　芦丁 (b)　槲皮素
图 1　吸收光谱
Fig.1　Ab sorption spect ra of rut in(a)and
quercetin(b)
由图 1可知:芦丁的最大吸收波长在 359 nm
处(a),槲皮素的最大吸收波长在 356 nm 处(b)。
试验选择 360 nm 为检测波长 。
2.2　干扰试验
按试验方法处理槐枝样品溶液 、空白样品溶液 、
芦丁对照品溶液及槲皮素对照品溶液 ,分别注入高
效液相色谱仪测定 ,测定结果显示:槐枝中不存在其
他成分干扰芦丁和槲皮素的分离与测定。
2.3　标准工作曲线
按试验方法分别对 0.015 4 , 0.030 8 , 0.061 6 ,
0.092 4 ,0.123 2 , 0.154 0 mg ·L-1芦丁标准溶液
和 0.010 8 , 0.021 6 , 0.043 2 , 0.064 8 , 0.086 4 ,
0.108 0 mg ·L -1槲皮素标准溶液进行测定 。以峰
面积对质量浓度绘制标准工作曲线 , 结果表明:
芦丁和槲皮素的质量浓度分别在 0.015 4 ～
0.154 0 mg ·L-1 ,0.010 8 ～ 0.108 0 mg ·L-1范围
内呈线性关系 ,芦丁 、槲皮素的线性回归方程分别为
y芦丁=2 691.63 x -109.12 , y槲皮素 =3 266.12 x -
158.51;相关系数分别为 0.999 8 ,0.999 7。
2.4　方法的检出限
按试验方法对空白样品进行测定 ,测得芦丁的
检出限(3S/ N)为 0.06 μg · g -1 ,槲皮素的检出限
(3S/ N)为 0.008 μg · g-1 。
2.5　方法的回收率
在已知含 量的槐 枝样 品中加 入适 量的
1.54 mg ·L-1芦丁和1.08 mg · L-1槲皮素标准溶
液 ,按试验方法进行处理与测定 ,回收试验结果见表
1和表 2 。
表 1　芦丁回收试验结果(n=3)
Tab.1　Results of recovery test for rutin
样号 样品本底值
m/m g
加标量
m/mg
测定总量
m/mg
回收率
/ %
1 20.95 16.80 37.32 97.4
2 20.97 21.00 41.72 98.8
3 20.93 25.20 45.63 98.0
表 2　槲皮素回收试验结果(n=3)
Tab.2　Results of recovery test for quercetin
样号 样品本底值
m/m g
加标量
m/mg
测定总量
m/mg
回收率
/ %
1 12.98 10.40 23.16 97.8
2 13.05 13.00 25.81 98.2
3 12.96 15.60 28.15 97.4
2.6　方法的精密度 、稳定性
按色谱分析条件对0.0 61 6mg · L-1芦丁和
(下转第 759页)
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崔 莹等:聚 N-异丙基丙烯酰胺硅胶键合固定相的应用
2.3.2　用于碱性物质的分离
以对苯二胺 、苯胺 、对硝基苯胺 3种碱性物质为
分析对象 ,在甲醇-水(30+70)混合溶液为流动相中
其保留因子随温度的变化见图 5。对苯二胺与苯胺
的保留因子随柱温的升高逐渐降低 ,而对硝基苯胺
的保留因子降低幅度较大 。3种碱性物质的保留因
子在 25 ～ 40 ℃之间均无转折变化 ,说明在升温过程
中它们并没有发生出峰顺序的改变。由于聚 N-异
丙基丙烯酰胺微凝胶的相转变行为随温度变化的响
应性较慢[ 9] ,所以试验中只有具有较大极性并有显
著极性差异的一类物质 ,其相转变行为才较为明显 。
因此碱性物质中极性相对较强的对硝基苯胺变化幅
度较大;而图 4中 ,甲苯由于是近中性物质 ,故在两
种不同比例流动相中均未呈现明显的变化。
图 5　温度对碱性化合物保留因子 k的影响
Fig.5　Ef fect of temperatu re on the retention factor(k)
of alkaline compounds
2.3.3　用于同分异构体的分离
试验采用聚 N-异丙基丙烯酰胺色谱柱 ,以甲
醇-水(30+70)混合溶液为流动相 ,对邻 、间 、对二甲
苯同分异构体进行分离。以溶剂峰为死时间计算得
到邻二甲苯与间二甲苯的相对保留值在柱温 25 ℃,
32 ℃,40 ℃时分别为 1.019 , 1.039 ,1.046 。相对保
留值的略微增大说明了聚N-异丙基丙烯酰胺随着
温度的升高疏水性有所增强 ,这也是由于聚 N-异丙
基丙烯酰胺发生了相转变 ,由亲水性构象转变为疏
水性构象 。
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(上接第 755页)
0.043 2 mg ·L-1槲皮素溶液连续测定 6 次 ,计算
相对标准偏差分别为 1.6%和 1.8%。
取同一批号样品 ,按试验方法处理样品 ,分别于
0 ,2 ,4 ,8 ,20 , 36 h后进样 ,测得芦丁和槲皮素峰面
积的相对标准偏差分别为 1.2%和 1.7%。表明样
品至少在 36 h内稳定 。
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