全 文 ：收稿日期:2010-03-29
作者简介:郭　英(1979-), 女 ,讲师 , 硕士研究生, 主要从事天然
有机化学及仪器分析研究。
HPLC法测定大叶水芹菜中芹菜素含量
郭　英
(湖北郧阳师范高等专科学校化学系 , 丹江口　442700)
摘要:目的:建立了测定大叶水芹菜中芹菜素含量的高效液相色谱方法。方法:用 NaOH 溶液加热回流提取
样品 , 采用 Shim-pack C LC-ODS 色谱柱(150×6 mm , 5μm),甲醇—水(60∶40)等度洗脱 ,柱温 25℃, 检测波
长 335 nm。结果:芹菜素在 0.002875～ 0.230 mg/ml范围内线性关系良好 , 平均回收率为 99.02%, 相对标
准偏差(RSD)为 1.03%。结论:该方法快速 、简便 、准确 ,可用于芹菜叶中芹菜素的含量测定。
关键词:大叶水芹菜;芹菜素;高效液相色谱法
中图分类号:O657.7+2　文献标识码:A　文章编号:1005-5320(2010)03-0037-02
Determination of Apigenin in Leaves of large leaf water dropwort by HPLC
GUO Ying
(Department of Chemistry , Y unYang Teachers College , Danjiangkou 442700 , China)
Abstract:Objective:To develop a HPLC method for the determination of Apigenin in leaves of large leaf water dropwort .Method:The
sample w as ex tracted w ith sodium hydroxide solution using regurgitation.HPLC separation was carried out in a Shim-pack CLC—ODS
columm (150×6 mm , 5μm)with methanol :water (60∶40)as mobile phase.The detection wavelength was 335 nm.Result:The lin-
ear rangew as 0.002875 ～ 0.230mg/ml for Apigenin.The average recovery was 99.02% , and RSD was 1.03%(n=5).Conclusion:
This method was rapid , accurate and reproducible for determining the Apigenin in leaves of large leaf water dropw ort..
Key Words:large leaf w ater dropwor t;Apigenin;HPLC
　　芹菜属伞形花科蔬菜 ,芹黄(菜)素(Apigenin ,
AP)属于黄酮类化合物 , 广泛存在与水果 、蔬菜
中[ 1] ,芹菜素的化学结构为 4′, 5 , 7—三羟黄酮 ,其
4′, 5 ,7位置的 3个羟基和 C2C3双键决定了其独特
的药理学效应和生物学特性。研究发现 , 芹菜素具
有抗肿瘤 、抗炎 、降压安神 、降血脂 、保护心血管 、抗
焦虑和增强免疫力等功效[ 2～ 4] 。它还具有抗氧化
作用 、雌激素样作用 、抗菌 、抗病毒及抗突变作用等 。
因此 ,芹菜素对健康的影响已引起广泛关注 ,成为营
养学及药理学研究的热点 。本实验就大叶水芹菜中
芹菜素的提取及分析方法进行了初步研究 ,筛选并
建立了快速 、准确测定芹菜素含量的反相高效液相
色谱方法 。
1　仪器与试剂
日本岛津 SPD-10AT 高效液相色谱仪;SPD
-10Avp检测器;SIL -10AP 自动进样器;超纯水器
(arium 611UF , Sartorius);超 声 波 清 洗 器
(AS3120A ,天津瑞森特);电子天平(AdventurerTM ,
AR2140 ,上海奥豪斯公司);旋转蒸发仪(R-200 ,
瑞士 Buchi)。岛津 UV2100型紫外—可见光谱仪。
乙腈 、甲醇为色谱纯;实验用水为超纯水 ,蒸馏
水自制 ,其它试剂均为国产分析纯试剂。
芹菜素对照品购自成都普瑞法科技开发有限公
司(纯度≥98%)。大叶水芹菜叶由昆明卡麦生物科
技有限公司提供。
2　方法和结果
2.1　色谱条件　色谱柱:岛津 Shim-pack CLC-
ODS 柱(150×6 mm , 5μm), 流动相:甲醇-水(60∶
40)等度洗脱 ,流速:1 ml/min ,检测波长:335 nm ,柱
温:25℃,进样量:20 μl。
2.2　对照品溶液的制备　　称取芹菜素适量 ,精密
称定 ,用流动相溶解 ,制成每 1 ml含芹菜素 0.230
mg 的对照品储备液 , 置于 4℃的冰箱中避光保存。
取对照品溶液适量 ,加流动相制成 0.1725 , 0.0115 ,
0.008625 ,0.00575 ,0.002875 mg/ml-1 系列标准。
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　第 27 卷Vo l.27 　　第 3期No.3 　 　　　　　　　 微 量 元 素 与 健 康 研 究Studies of T race Elements and Health　 　　　　　　　　　2010 年　5 月May　2010
2.3　供试品溶液的制备　取大叶水芹菜叶样品粉
末(芹菜叶阴干 ,粉碎过 50目筛)2.5 g , 精密称定 ,
置具塞锥形瓶中 ,加入 0.5 mol/L NaOH 溶液 25 ml
,加热回流提取 30 min(加热温度:85℃), 放冷滤
过 ,药渣加 25 ml NaOH溶液 ,按上述方法回流再提
取 1次 ,滤液过滤后合并 ,浓缩蒸干 ,残渣加流动相
溶解 ,转移至 100 ml棕色容量瓶中 ,加流动相稀释
至刻度 ,摇匀 ,溶液经 0.45 μm 滤膜过滤 ,作为供试
品溶液。
2.4　线性关系和检测限　将“2.2”项下制好的系列
浓度的对照品溶液分别进样 20 μl ,以其组分峰面积
y 对其质量浓度 x(mg/ml)进行线性回归 ,得到回归
方程:y =33913x +57670 , r =0.9997 ,线性范围:
0.002875 ～ 0.230 mg/ml。将标准品溶液无限稀
释 ,测出检出限为 0.05μg/ml(S/N=3)。
2.5　精密度试验 　将“2.2”项下制好的标准溶液
(0.230 mg/ml)按色谱条件平行测定 5 次 ,计算出
芹菜素峰面积的相对标准偏差为 0.92%,表明仪器
精密度良好。
2.6　稳定性试验 　取样品试液(2.3方法配制)放
置0 、1 、2 、6 、16 、24 h ,分别按 2.1色谱条件测定 ,测
得芹菜素的峰面积 RSD为 1.18%。表明样品放置
24 h稳定 。
2.7　回收率试验　精密称取已知含量的大叶水芹
菜叶样品粉末 1.2 g ,加入一定量的芹菜素对照品
液 , 按供试品制备测定方法操作 ,计算回收率 ,结果
芹菜素平均回收率为 99.02%, RSD为 1.03%(n =
5)。
2.8　样品的测定　按 “2.3”项下方法制备的样品
溶液 ,采用上述色谱条件进行分离 ,经测定 ,大叶水
芹菜叶样品中芹菜素的含量(质量分数)为 0.683%
(n=3)。
3　讨论与结论
3.1　流动相的选择　由于芹菜素为黄酮 ,因此采用
中性流动相 ,实验中对甲醇 —水溶液(90∶10)、甲醇
—水溶液(80∶20)、甲醇 —水溶液(70∶30)、甲醇 —水
溶液(60∶40)、甲醇—水溶液(50∶50)流动相体系进
行了筛选 ,发现甲醇—水溶液(60∶40)的分离效果较
好 ,样品中芹菜素峰形对称并达到基线分离 。最终
选择甲醇—水溶液(60∶40)为流动相 。
3.2　检测波长的选择　对芹菜素对照品溶液在
200 ～ 450 nm的范围内进行扫描 ,得到芹菜素的紫
外吸收光谱图(图略)。从图中可看出芹菜素在
220 、295 、320 nm处出现 3个吸收峰 ,考虑到在短波
长处样品中其他组分的干扰较大 ,最后选取 320 nm
作为测定芹菜素的检测波长 。
3.3　提取溶剂的选择 　实验中比较了水 、95%乙
醇 、0.05 mol/ L NaOH溶液作为提取溶剂对提取效
果的影响 。结果显示采用水 、95%乙醇作为提取溶
剂时 ,提取率不及 0.05 mol/ L NaOH 提取方法 ,且
醇提取物杂质多 ,测定时干扰较大 ,不利于色谱分
离 。因此选用 0.05 mol/L NaOH 作为提取溶剂。
3.4　大叶水芹菜叶提取物具有良好的药用价值 ,对
多个系统疾病具有良好的治疗作用 ,具有较好的开
发前景。本研究采用 HPLC 法测定大叶水芹菜叶
中芹菜素含量 ,方法快速 、简便 、准确 ,测定结果可
靠 ,为芹菜素在食品开发及医药应用上提供科学依
据 。
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