全 文 ：收稿日期:2010-11-05; 修订日期:2011-02-18
基金项目:贵州省优秀科技教育人才省长专项资金［No．(2006)82］
作者简介:汲广全(1982-) ，男(汉族) ，山东荷泽人，现为华南理工大学在
读博士研究生，硕士学位，主要从事药食资源利用研究工作．
* 通讯作者简介:杨 娟(1971-) ，女(汉族) ，重庆合川人，现任贵州省中
国科学院天然产物化学重点实验室研究员，博士学位，主要从事天然活性
成分研究工作．
夜交藤改善睡眠成分
大黄素葡萄糖苷的提取纯化工艺研究
汲广全，杨 娟* ，吴兰芳
(贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室，贵州 贵阳 550002)
摘要:目的 研究夜交藤中改善睡眠成分大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷的提取、纯化工艺条件。方法 以大黄素-8-O-β-D-葡
萄糖苷得率为指标，采用正交实验设计，优化大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷的提取工艺参数;以大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷的
洗脱率为指标，考察大孔树脂纯化工艺条件。结果 提取工艺条件为:75 % 乙醇回流提取 1 h，液料比 1∶ 15，提取 2 次;
纯化工艺为:采用 S － 8 型大孔树脂，大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷的最大上样量为 10． 2 mg /g 树脂;树脂径高比为 1∶ 6，上
样吸附流速为 1 ml /min，用 3BV 的 35 % 乙醇进行除杂质，再用 6 BV 的 75% 乙醇洗脱，收集 75% 乙醇洗脱液即为纯化
的大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷，纯化后其质量分数可达 21． 6%。结论 优选工艺可以较好的提取纯化夜交藤中的大黄素-
8-O-β-D-葡萄糖苷。
关键词:夜交藤; 大黄素葡萄糖苷; 提取; 纯化; 大孔树脂
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2011． 09． 062
中图分类号:R284． 2 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2011)09-2188-02
夜交藤为蓼科植物何首乌 Polygonum multiflorum Thunb． 的
藤茎或带叶藤茎，又名首乌藤 Caulis polygoni multiflori［1］。夜交
藤性平无毒、味甘微苦，具有养心安神、祛风通络之功效［2］，在民
间被广泛用于改善睡眠的治疗。目前只见夜交藤粗提物［3，4］或
蒽醌、黄酮、皂苷等总成分的镇静催眠作用的报道［5］，关于其改
善睡眠的药效物质并不清楚。作者前期研究发现，从夜交藤中分
离得到的蒽醌类化合物大黄素 － 8 － O － β － D －葡萄糖苷具有明
显的改善实验小鼠睡眠作用［6］。本实验以大黄素 － 8 － O － β － D
－葡萄糖苷得率为指标，探讨了从夜交藤中提取该活性成分的最
佳提取、纯化工艺参数，为今后深度开发和利用夜交藤资源奠定
理论基础。
1 仪器与试剂
Agilent 1100 Series 高效液相色谱仪，美国 Agilent公司;BU-
CHI － R114 旋转蒸发器，瑞士 Buchi 公司;AG285 电子天平，Met-
tle Toledo公司。
夜交藤采自贵州省施秉县何首乌种植示范基地，为何首乌
Polygonum multiflorum Thunb．的藤茎;大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷
对照品(实验室自制，经 HPLC面积归一化法测定纯度在 98%以
上) ;D101，X －5，S － 8 和 NKA －Ⅱ大孔树脂均为天津南开和成
科技有限公司生产;色谱纯甲醇(Merck 公司) ，其他试剂均为分
析纯。
2 方法与结果
2． 1 大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷含量测定
2． 1． 1 色谱条件 SunFire C18色谱柱(4． 6 mm × 150 mm，5 μm) ;
流动相为甲醇 － 0． 2 %甲酸(60∶ 40) ;流速 1 ml /min，柱温 30
℃;进样量 5 μl;检测波长 254 nm。
2． 1． 2 供试品溶液的制备 取 1 g 夜交藤药材粉末，精密称定，
置于 100 ml 容量瓶中，加入 75 % 乙醇约 90 ml，超声处理(功率
300 W)30 min，取出、放冷，加 75 % 乙醇至刻度，摇匀，滤过，取
过滤液，即得供试品溶液。
2． 1． 3 对照品溶液的制备 精密称取大黄素 － 8 － O － β － D －葡
萄糖苷 11． 40 mg，加入甲醇和二甲基亚砜(1 ∶ 1)溶解，置于 50
ml容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀即得 228 μg /ml。经稀释得
1． 14，3． 56，7． 13，14． 25，28． 50，57． 00，114． 00 μg /ml 的系列对照
品溶液。
2． 1． 4 标准曲线的制作 分别精密吸取各对照品溶液 5 μl，按上
述色谱条件测定。以峰面积(Y)与对照品浓度(X)进行线性回
归，得到回归方程 Y = 7． 526X ﹢ 11． 928(r = 0． 999 4)。结果表
明，大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷在 1 ～ 57 μg /ml 之间线性关系良
好。
2． 1． 5 精密度实验 精密吸取同一对照品溶液，重复测定 5 次，
实验结果 RSD为 0． 15 %。
2． 1． 6 重复性实验 平行取 1 g 夜交藤药材粉末 6 份，精密称
定，按“2． 1． 2”项供试品溶液制备方法，测定，结果 RSD 为 3． 2
%。
2． 1． 7 稳定性实验 精密吸取同一供试品溶液，分别在 0，2，4，
6，8，10，12 h测定，结果 RSD为 1． 1% 。
2． 1． 8 回收率实验 精密称取同批药材夜交藤 0． 5 g，共 6 份，精
密加入对照品 0． 25 mg，按“2． 1． 2”项制备供试液，测定，平均回
收率为 98%，RSD为 1． 3% 。
在上述色谱条件下，大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷对照品、供试
品溶液的高效液相色谱图见图 1。
a －对照品;b －药材;1．大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷
图 1 大黄素 － 8 － O － β － D －葡萄糖苷对照品及夜交藤药材 HPLC图
2． 2 提取工艺研究
2． 2． 1 醇提取工艺的正交试验考察 选择 L9(3
4)正交表，以提
取物中大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷的得率为指标，固定提取次数
为 2 次，考察提取溶剂(A)、料液比(B)和提取时间(C)对加热回
流提取效果的影响。经极差分析，3 因素的主次关系为 B = A ＞
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时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 9 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL． 22 NO． 9
C。综合考虑实际生产成本及生产效率，最优工艺应为 A2B2C1，
即 75 % 乙醇回流 1 h，液料比 1∶ 15，此时提取效果最佳。正交
实验因素水平表见表 1，结果见表 2。
表 1 正交因素水平表
序号
A
乙醇浓度(%)
B
料液比
C
回流时间 t /h
1 65 10 1
2 75 15 1． 5
3 85 20 2
提取次数均为 2 次
表 2 正交实验结果
列号
A
乙醇浓度
B
料液比
C
提取时间
D
空列
大黄素苷得率
C /mg·(g生药)－ 1
1 1 1 1 1 0． 29
2 1 2 2 2 0． 47
3 1 3 3 3 0． 59
4 2 1 2 3 0． 44
5 2 2 3 1 0． 69
6 2 3 1 2 0． 64
7 3 1 3 2 0． 59
8 3 2 1 3 0． 67
9 3 3 2 1 0． 77
K1 0． 450 0． 440 0． 533
K2 0． 590 0． 610 0． 560
K3 0． 677 0． 667 0． 623
R 0． 227 0． 227 0． 090
2． 2． 2 优化工艺的验证 根据最佳提取工艺，进行了验证实验。
大黄素 － 8 － O － β － D －葡萄糖苷得率为 0． 75 mg /g 生药 (n =
3) ，表明工艺较为稳定。
2． 3 纯化工艺研究
2． 3． 1 样品溶液的制备 取夜交藤粗粉 150 g，加 75 %乙醇 15
倍量，提取 2 次，滤过，合并提取液，浓缩至 900 ml，4 000 r /min离
心 10 min。取上清液作为纯化工艺的样品溶液。
2． 3． 2 大孔树脂的预处理［7，8］ 树脂经乙醇浸泡充分溶胀后，用
95%乙醇淋洗树脂柱，至流出液加入少量蒸馏水后不出现白色混
浊为止。用蒸馏水冲洗树脂柱，洗至无醇味后，再用 5 % HCl 溶
液和 2% NaOH溶液交替洗涤，最后用蒸馏水洗至出水 pH 值呈
中性，树脂备用。
2． 3． 3 大孔树脂类型的优选 采用静态吸附法［9］，通过测定吸附
残液和解吸液的大黄素 － 8 － O － β － D －葡萄糖苷含量，以比吸
附量(mg /g)、吸附率(%)、解吸率(%)为评价指标［10］，筛选最佳
树脂型号。结果见表 3。
表 3 大孔树脂对大黄素 － 8 － O － β － D －葡萄糖苷的静态吸附行为
大孔树脂型号 吸附率(%) 比吸附量 C /mg·g － 1 解吸率(%)
D101 71． 6 8． 8 89． 4
X － 5 61． 0 7． 5 89． 0
S － 8 87． 0 10． 8 92． 0
NKA －Ⅱ 88． 0 11． 0 78． 0
从表 3 可以看出，S － 8 型大孔树脂具有较高的吸附率、比吸
附量和解析率，所以选用 S － 8 型大孔树脂比较合适。
2． 3． 4 泄露曲线的绘制［11］ 取 20 ml已处理好的 S － 8 大孔树脂
湿法装柱，取夜交藤提取液上样，吸附流速为 0． 5 ml /min，径高比
1∶ 6，每 20 ml收集一份，共 10 份，HPLC 法测每 1 份大黄素 － 8
－ O － β － D －葡萄糖苷的质量浓度，以大黄素 － 8 － O － β － D －
葡萄糖苷质量为纵坐标，上样体积为横坐标绘制泄露曲线。实验
结果见图 2 。
从图 2 中可以看出，当上样体积在 150 ml时开始泄露，所以
泄漏点为 150 ml。因此确定最大上样体积为 150 ml 及最大上样
量为 10． 2 mg /g树脂。
2． 3． 5 上样液浓度的考察 取上样液适量，分别稀释成含大黄素
苷质量浓度为 68，32，23 μg /ml，通过 20 ml S － 8 型大孔树脂，保
持上样量和流速相同，以解吸率为指标，比较大黄素苷不同浓度
对大孔吸附树脂吸附性能的影响。结果见表 4。
图 2 大黄素苷泄露曲线
表 4 上样液浓度对吸附效果的影响
大黄素苷质量浓度 C /μg·ml －1 峰面积 解吸率(%)
68 523． 7 92． 5
34 529． 4 91． 1
23 520． 8 89． 9
结果表明，上样质量浓度对 S － 8 型大孔树脂的吸附行为影
响较小，因此选用夜交藤醇提取液挥至无醇味，适量加水后直接
上样。
2． 3． 6 树脂径高比的选择 取 30 ml 提取液，分别上径高比为 1
∶ 4，1∶ 6，1∶ 8 的 S － 8 型大孔树脂(20 ml) ，按 1． 5 ml /min流速
上样，分别用 5 BV水洗脱后，再用 4 BV 95%乙醇洗脱。收集 95
% 乙醇洗脱液并定容至 250 ml，测定大黄素 － 8 － O － β － D －葡
萄糖苷的含量，计算大黄素 － 8 － O － β － D －葡萄糖苷的解吸率。
结果见表 5。
表 5 树脂径高比对吸附的影响
径高比 解吸率(%)
1∶ 4 66． 2
1∶ 6 92． 0
1∶ 8 90． 4
从表 5 可以看出，树脂径高比对大黄素 － 8 － O － β － D －葡
萄糖苷的洗脱有一定的影响。缩小直径，增加柱高有利于防止药
液泄露，提高解吸率。但是过长的柱高也会降低洗脱效率，从而
一定程度上降低解吸率，因此选择径高比 1∶ 6 比较合适。
2． 3． 7 洗脱流速对吸附的影响 取等体积的大孔树脂 20 ml 装
柱，精密移取 30 ml 提取液上样，流速分别为 0． 5，1． 0，1． 5，2． 0
ml /min。分别用 3 BV水洗脱后，再用 4 BV 95 % 乙醇洗脱，收集
95 % 乙醇洗脱液并定容至 200 ml。测定大黄素 － 8 － O － β － D
－葡萄糖苷的含量，计算大黄素 － 8 － O － β － D －葡萄糖苷的解
吸率。结果见表 6。
从表 6 中可以看出，上样液流速对吸附产生一定的影响。增
大上样流速会降低解吸率，造成活性成分的损失。综合考虑生产
效率因素，上样液流速保持在 1 ml /min比较合适。
表 6 吸附流速的选择
上样流速 V /ml·min －1 峰面积 解吸率(%)
0． 5 158． 8 91． 9
1 146． 2 87． 6
1． 5 109． 5 63． 4
2 87． 7 50． 7
2． 3． 8 洗脱溶剂的选择 准备 6 根树脂柱，取 20 ml S － 8 型大孔
树脂装柱，上样 30 ml 提取液，并依次按照以上各个已优选步骤
洗脱后，分别用 35 %，45 %，55 %，65 %，75 %，85 %乙醇 500
ml冲洗树脂柱，每 20 ml收集为 1 瓶，过滤后，进行检测。结果见
图 3。
从图 3 中可以看出，35% 乙醇洗脱过程中，前 3 个柱体积的
洗脱液中没有检测到大黄素 － 8 － O － β － D －葡萄糖苷，当乙醇
浓度为 75% 时，大黄素 － 8 － O － β － D －葡萄糖苷被迅速洗脱下
来，因此可以先用 3 BV 的 35% 乙醇进行除杂质，然后再用 6 BV
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL． 22 NO． 9 时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 9 期
的 75% 乙醇洗脱大黄素 － 8 － O － β － D －葡萄糖苷，从而达到纯
化目的。
图 3 不同浓度乙醇洗脱曲线图
2． 3． 9 优化工艺的验证 根据以上各单因素最佳条件，进行了验
证性试验。结果见表 7。
表 7 验证实验结果
序号
纯化前大黄素苷
含量(%)
纯化后大黄素苷
含量(%)
平均值
(%)
1 4． 7 20． 4
2 4． 5 22． 1 21． 6
3 4． 5 22． 3
n = 3
从表 7 中可以看出，在最佳工艺条件下，夜交藤提取液纯化
后，大黄素 － 8 － O － β － D －葡萄糖苷的平均含量为 21． 6 %。
3 结论
本实验对影响夜交藤中大黄素 － 8 － O － β － D －葡萄糖苷提
取纯化的各因素进行了系统的研究，最终确定了最佳提取工艺
为:75 % 乙醇回流 1 h，液料比 1∶ 15，提取 2 次。纯化工艺为选
用 S － 8 型大孔树脂，上样液为其醇提液挥至无醇味，加适量水后
直接上样;大黄素 － 8 － O － β － D －葡萄糖苷的最大上样量为
10． 2 mg /g 树脂;树脂径高比为 1∶ 6，上样吸附流速为 1 ml /min，
用 3 BV 的 35 % 乙醇进行除杂质，再用 6 BV 的 75 % 乙醇洗脱
大黄素 － 8 － O － β － D －葡萄糖苷，收集 75 % 的乙醇洗脱液。
纯化后大黄素 － 8 － O － β － D －葡萄糖苷的平均含量为 21． 6 %。
大孔吸附树脂吸附容量大，选择性较高，并且吸附速度快，解析条
件温和，有利于工业生产上有效成分的分离纯化。
参考文献:
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收稿日期:2010-10-09; 修订日期:2011-03-05
基金项目:新疆维吾尔自治区高校科研计划创新群体基金
(No． XJEDU2004G08)
作者简介:阿衣努尔·热合曼(1983-) ，女(维吾尔族) ，新疆阿克苏人，现
为新疆医科大学药学院硕士研究生，主要从事新疆特色中药资源的开发
与利用工作．
* 通讯作者简介:热娜·卡斯木(1963-) ，女(维吾尔族) ，新疆乌鲁木齐
人，现任新疆医科大学教授，博士学位，主要从事新疆优势药材资源的研
究工作．
新疆产香青兰化学成分研究
阿衣努尔·热合曼，热娜·卡斯木* ，热西旦木·托乎提
(新疆医科大学药学院，新疆 乌鲁木齐 830011)
摘要:目的 研究新疆产维吾尔药用植物香青兰 Dracocephalum moldavica L．地上部分化学成分。方法 采用硅胶柱色谱
法和薄层色谱法分离化合物，用1H － NMR、13C － NMR等波谱技术进行结构鉴定。结果 从香青兰乙醇提取物中分离得到
5个化合物，经波谱分析鉴定为，熊果酸(ursolie acid) (Ⅰ) ，齐墩果酸(Oleanolic acid) (Ⅱ)金合欢素(acacetin) (Ⅲ) ，日本
椴苷(tilianin) (Ⅳ) ，化合物Ⅴ正在鉴定中。结论 该工作分离纯化所得到的化合物初步探讨了香青兰的物质基础。
关键词:香青兰; 化学成分; 结构鉴定
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2011． 09． 063
中图分类号:R284． 2 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2011)09-2190-02
据《维吾尔药志(上)》［1］记载，唇形科植物香青兰 Dracoceph-
alum moldavica L．，一年生草本，分布于华北、东北、西北等省区，
新疆以南疆和东疆栽培较多。俄罗斯等独联体国家，印度，欧洲
其他国家等亦有分布。栽培植物生于山地林边或草坡上［1］。我
国资源十分丰富，其主要化学成分为挥发油、萜类、黄酮类、氨氢
酸、微量元素等［2］。
香青兰药用全草为干燥地上部分。夏季盛花期采割，除去杂
质，晒干。花多萎缩，蓝紫色，气清香，叶微辛［3，4］，是一味能有效
治疗心绞痛的药物，在新疆和田维吾尔医院，它以单方做为医院
制剂使用多年，但对化学成分研究报道较少。在新疆该药材药源
丰富，值得进一步开发利用，本文对香青兰化学成分进行了研究。
1 仪器与材料
X4 显微熔点测定仪(北京第三光学仪器厂) ，美国 Varian 公
司 Unity － Inova600 超导核磁共振谱仪，薄膜旋转蒸发仪，柱层析
硅胶(100 ～ 200 目，青岛海洋化工厂产品) ，薄层层析硅胶 G(青
岛海洋化工厂产品) ，环己烷、石油醚、氯仿、醋酸乙酯、丙酮、正
丁醇、甲醇以上试剂均为分析纯。药材采自新疆和田地区，品种
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时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 9 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL． 22 NO． 9