全 文 ：　
第３５卷 第４期
２０１４年８月 　
青 岛 科 技 大 学 学 报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｑｉｎｇｄａｏ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）
Ｖｏｌ．３５Ｎｏ．４
Ａｕｇ．２０１４ 　
　　文章编号：１６７２－６９８７（２０１４）０４－０３４６－０４
炮制温度对槐米中黄酮、鞣质含量及其
抗氧化活性的影响
王　玲１，２，赵俊宏３，梁会丽２，杨　冉２＊
（１．郑州师范学院 化学系，河南 郑州４５００４４；２．郑州大学 化学与分子工程学院，河南 郑州４５０００１；
３．河南省科学院化学研究所，河南 郑州４５０００２）
摘　要：利用微波辅助提取法及紫外－可见分光光度法研究了不同炮制温度对槐米中黄
酮和鞣质含量及其相应的抗氧化活性的影响。结果表明黄酮和鞣质成分的含量均随炮制
温度的不同而发生明显的变化；不同温度炮制品对ＤＰＰＨ自由基的清除能力与黄酮及鞣
质含量呈正比关系，但对ＡＢＴＳ自由基的清除能力与两者含量无明显相关性。
关键词：槐米；炮制温度；黄酮；鞣质；抗氧化活性
中图分类号：Ｏ　６２９．９　　　文献标志码：Ａ
Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　Ｔａｎｎｉｎｓ，
Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ａｎｄ　Ｔｈｅｉｒ　Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｉｎ　Ｓｏｐｈｏｒａ　Ｊａｐｏｎｉｃａ　Ｌ．
ＷＡＮＧ　Ｌｉｎｇ１，２，ＺＨＡＯ　Ｊｕｎ－ｈｏｎｇ３，ＬＩＡＮＧ　Ｈｕｉ－ｌｉ　２，ＹＡＮＧ　Ｒａｎ２
（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ　４５００４４，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ　４５０００１，Ｃｈｉｎａ；
３．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｈｅｎａｎ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ　４５０００２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ，ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔａｎｎｉｎｓ　ａｎｄ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ
ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｏｆ　Ｓｏｐｈｏｒａ　ｊａｐｏｎｉｃａ　Ｌ．ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｗｅｒｅ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ　ｂｙ
ＵＶ－Ｖｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｃｏｕｐｌｅｄ　ｗｉｔｈ　ｓｕｐｅｒｓｏｎｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｃｏｎ－
ｔｅｎｔ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ａｎｄ　ｔａｎｎｉｎｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ａｍｏｎｇ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ｔｅｍ－
ｐｅｒａｔｕｒｅ．Ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ＤＰＰＨ　ａｎｄ　ｔｈｅ
ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ａｎｄ　ｔａｎｎｉｎｓ　ｗａｓ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ
ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ＡＢＴＳ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅｍ　ｓｅｅｍｅｄ　ｕｎｃｏｎｓｐｉｃｕｏｕｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｓｏｐｈｏｒａ　ｊａｐｏｎｉｃａ　Ｌ．；ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ；ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｔａｎｎｉｎｓ；ａｎｔｉｏｘ－
ｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
收稿日期：２０１３－１１－２９
基金项目：河南省教育厅科学技术研究重点项目（１２Ａ１５００２５）．
作者简介：王　玲（１９７９―），女，讲师．　＊通信联系人．
　　槐米为豆科植物槐（Ｓｏｐｈｏｒａ　ｊａｐｏｎｉｃａ　Ｌ．）
的干燥花蕾，具有凉血止血、清肝泻火的功能［１］，
在《神农本草经》中，将槐米列为上品。而槐米不
同炮制品具有不同的药理活性和功效，临床上槐
米的常用炮制品主要有生品、炒槐米和槐米炭３
种［１］。为了研究不同炮制品功效间的差异，研究
者运用各种方法和手段，研究槐米炮制前后所发
生化学成分变化与功效间的关系［２－５］。结果表明，
引起槐米不同炮制品功效变化的化学成分主要有
两类，一类是黄酮类成分，另一类是鞣质类成分。
而在炮制过程中，随着温度的升高，黄酮类物质会
受热分解，产生鞣质类成分。由此看来，炮制温度
是影响产品成分及其活性的重要因素。因此，研
究不同炮制温度对黄酮类及鞣质类物质含量的影
DOI:10.16351/j.1672-6987.2014.04.018
　第４期 　　王　玲等：炮制温度对槐米中黄酮、鞣质含量及其抗氧化活性的影响
响对指导临床指导用药具有一定意义。
另外，随着食品工业发展，人们消费观念逐渐
趋向于具有合理营养和保健功能的营养保健食
品。目前，槐米除了作为临床用药，也被我国卫生
部列为药食兼用植物，属于保健食品基料［６］。槐
米中所含的黄酮和鞣质类成分均属于多元酚类化
合物，结构上具有较多的苯羟基，而具有这种结构
的化合物往往在抗氧化方面表现突出，因此槐米
提取物具有很明显的抗氧化活性，能清除机体内
氧自由基，从而达到保护机体的作用［７］。在人们
追求天然抗氧化剂的今天，槐米极有可能作为一
种具有保健功能的新型抗自由基食品添加剂使
用。但在制作各类食品时，所使用的烹饪方法和
温度是不同的，因而探讨不同炮制方法和温度对
槐米中成分的变化及其相应的抗氧化活性，对于
解决从原料到成品及货架期易氧化酸败等问题具
有重要的应用价值［８］。这会为我国中草药作为食
品添加剂的开发利用另辟一条新路，也为延缓高
脂食品的自动氧化酸败提供很好的解决思路，而
且对医药卫生、营养学均有重要的实际意义［９－１０］。
本研究采用微波辅助提取及紫外－可见分光
光度法研究不同炮制温度下槐米炮制品中鞣质和
黄酮成分含量的变化规律，探讨不同炮制方法对
槐米中黄酮和鞣质含量及其抗氧化活性的影响。
１　实验部分
１．１　仪器与试剂
紫外－可见分光光度仪，Ｓｈｉｍａｄｚｕ　ＵＶ－２５５０
型，日本岛津公司。
１，１－二苯基－２－三硝基苯肼（ＤＰＰＨ）、２，２’－氨
基－二（３－乙基－苯并噻唑啉磺酸－６）铵盐（ＡＢＴＳ），
美国Ｓｉｇｍａ公司；芦丁（ＲＴ）、维生素Ｃ（ＶＣ）、没
食子酸（ＧＡ）标准品，北京中国生物制品检定所；
其余试剂均为分析纯；所用水为二次重蒸水。
槐米（Ｓｏｐｈｏｒａ　ｊａｐｏｎｉｃａ　Ｌ．），郑州市张仲景
大药房。
１．２　实验方法
１．２．１　总黄酮及鞣质含量测定方法
１．２．１．１　总黄酮含量测定
于１０ｍＬ容量瓶中，加入不同炮制温度黄酮
提取液５０μＬ，然后依次加入４ｍＬ蒸馏水，０．３
ｍＬ质量分数５％ ＮａＮＯ２ 和０．３ｍＬ质量分数
１０％ ＡｌＣｌ３，于避光处反应６ｍｉｎ；然后加入２ｍＬ
１ｍｏｌ·Ｌ－１　ＮａＯＨ 溶液，用蒸馏水定容至１０
ｍＬ，以空白样做参比，测定样品在５１０ｎｍ处的吸
光度Ａ。
采用同样方法，于１０ｍＬ容量瓶中，加入不
同体积芦丁对照品溶液（５００ｍｇ·Ｌ－１），依次加
入４ｍＬ蒸馏水，０．３ｍＬ　５％ ＮａＮＯ２ 和０．３ｍＬ
１０％ ＡｌＣｌ３，于避光处反应６ｍｉｎ；然后加入２ｍＬ
１ｍｏｌ·Ｌ－１　ＮａＯＨ 溶液，用蒸馏水定容至１０
ｍＬ，以空白样做参比，测定５１０ｎｍ处吸光度Ａ，
并作标准曲线（回归方程为Ａ５１０ｎｍ＝０．０１１８　ｃＲＴ－
０．０１０９（ｒ ＝０．９９９　８），线性范围为５．０～７０．０
ｍｇ·Ｌ－１）。然后依据所得到的标准曲线，求出黄
酮的含量。
１．２．１．２　鞣质含量测定
于１０ｍＬ棕色容量瓶中，加入不同炮制温度
鞣质提取液５０μＬ，然后加入１ｍＬ磷钼钨酸溶
液，最后用质量分数２９％ Ｎａ２ＣＯ３ 溶液定量至刻
度，摇匀后避光放置３０ｍｉｎ，空白样做参比，测定
７６０ｎｍ处的吸光度Ａ。
采用同样方法，于１０ｍＬ棕色容量瓶中，加入
不同体积没食子酸对照品溶液（５００ｍｇ·Ｌ－１），再
加入１ｍＬ磷钼钨酸溶液，最后用２９％ Ｎａ２ＣＯ３ 溶
液定量至刻度，摇匀后避光放置３０ｍｉｎ，空白样做
参比，测定７６０ｎｍ处吸光度Ａ，并作标准曲线（回
归方程Ａ７６０ｎｍ＝０．１３３　６　ｃＧＡ－０．４０４　４（ｒ＝０．９９７
６），线性范围为４．０～１５．０ｍｇ·Ｌ－１）。然后依据
所得到的标准曲线，求出鞣质的含量。
１．２．２　槐米样品处理及黄酮与鞣质提取
将槐米样品置于恒温箱中，于２５，１００，１２０，
１４０，１６０，１８０，２００，２２０，２４０和２６０℃下加热３０
ｍｉｎ，取出样品，置于真空干燥器中，待冷却后用
粉碎机粉碎，过孔径１７８μｍ筛备用。
１．２．２．１　槐米中黄酮的提取
精确称取３ｇ槐米不同炮制温度的粉末，加
入６０ｍＬ　９５％乙醇，于超声波作用下提取６０
ｍｉｎ，抽滤后将滤液蒸干，残渣用甲醇溶解并定容
至１０ｍＬ，按“１．２．１．１”方法进行测定。
１．２．２．２　槐米中鞣质的提取
精确称取３ｇ槐米不同炮制温度的粉末，加
入蒸馏水６０ｍＬ，超声波提取６０ｍｉｎ，抽滤后将滤
液浓缩至９ｍＬ，然后加入无水乙醇４０ｍＬ混均，
４℃放置１２ｈ；将上述溶液于４　０００ｒ·ｍｉｎ－１离
心１０ｍｉｎ，取上清液，蒸干后残渣用蒸馏水溶解
并定容至１０ｍＬ，按“１．２．１．２”方法进行测定。
１．２．３　槐米抗氧化活性的测定
１．２．３．１　ＤＰＰＨ自由基的清除
参照文献［１１］的方法并略微进行改进，取不
７４３
青 岛 科 技 大 学 学 报（自然科学版） 第３５卷
同浓度的槐米提取液５０μＬ，加入０．１ｍｍｏｌ·
Ｌ－１　ＤＰＰＨ 溶液５ｍＬ，摇匀后避光处反应３０
ｍｉｎ，测定５１７ｎｍ处的吸光值度（Ａ）。ＤＰＰＨ 自
由基清除率＝ ［１－（Ａ－Ａ０）／Ａｅ］×１００％，其中
Ａ为ＤＰＰＨ溶液与５０μＬ槐米提取液混合后的
吸光度；Ａ０ 为槐米提取液本身的吸光度；Ａｅ 为
ＤＰＰＨ溶液与５０μＬ甲醇混合后的吸光度。
１．２．３．２　ＡＢＴＳ自由基的清除
参照文献［１２］的方法并略微进行改进，取不同
浓度槐米的样品提取液５０μＬ，加入７．０ｍｍｏｌ·
Ｌ－１　ＡＢＴＳ溶液５ｍＬ，混匀后避光反应６ｍｉｎ，测
定７３４ｎｍ处的吸光度（Ａ）。ＡＢＴＳ自由基清除
率＝ ［１－（Ａ－Ａ０）／Ａｅ］×１００％，其中 Ａ 为
ＡＢＴＳ溶液与５０μＬ槐米提取液混合后的吸光
度；Ａ０ 为槐米提取液本身的吸光度；Ａｅ 为ＡＢＴＳ
溶液与５０μＬ甲醇混合后的吸光度。
２　结果与讨论
２．１　炮制温度对槐米中黄酮含量及其抗氧化活
性的影响
　　槐米经不同温度处理３０ｍｉｎ后，以乙醇为溶
媒，采用微波辅助提取法提取不同炮制温度槐米
中黄酮类成分，见图１。
图１　炮制温度对黄酮含量的影响
Ｆｉｇ．１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｎ
ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
研究结果表明，在１６０℃以内，槐米中黄酮含
量随着处理温度的升高而升高；但当处理温度超
过１６０℃以后，黄酮含量却逐渐下降，推测产生这
种现象的原因是在高温条件下，黄酮类化合物发
生分解；当温度超过２４０℃时，槐米中黄酮类成分
开始被高温破坏，炭化，因而检测不到黄酮。故提
取黄酮的最佳温度约在１５０℃。
炮制温度对槐米醇提液抗氧化活性的影响见
图２。由图２可见，在炮制温度低于１８０℃时，随
着炮制温度升高，槐米醇提取液中黄酮含量升高，
对ＤＰＰＨ自由基的清除能力也增强；当温度达到
１８０℃时，清除能力达到峰值。这是由于槐米在
炮制过程中，黄酮类化合物槲皮素的含量会随温
度的升高和时间的延长而增加。相反，另一种黄
酮类化合物芦丁的含量却由于受高温的破坏而产
生苷键断裂生成槲皮素，因此槐米在１８０℃时槲
皮素的含量远远高于芦丁［１３］。
图２　炮制温度对槐米醇提液抗氧化活性的影响
Ｆｉｇ．２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
ｏｎ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
研究表明，含酚羟基化合物的抗氧化活性与
其结构密切相关，活性大小主要取决于酚羟基
的数目和位置［１４］。槲皮素的结构中存在５个酚
羟基，提供氢后形成的自由基具有共振半醌式
结构，这种共振半醌式结构除了能使电子自旋
密度分布比较均匀处，还可同时形成大的共轭π
键，进一步降低了自由基结构中的电子云密度，
稳定性强。而芦丁虽然结构中也存在４个酚羟
基，但由于空间位阻效应，使得芦丁所形成的自
由基结构没有槲皮素自由基结构稳定［１５］。因此
随着温度升高，芦丁转变为槲皮素，清除ＤＰＰＨ
自由基能力提高。然而，当处理温度超过１８０
℃时，槐米醇提取液对 ＤＰＰＨ 自由基的清除能
力却不断下降，这是由于受高温的影响，很多黄
酮类成分（包括槲皮素）结构上受到破坏，并产
生炭化作用，含量急剧下降，因而抗氧化能力也
相应下降。
与清除ＤＰＰＨ自由基不同，槐米醇提取液对
ＡＢＴＳ自由基的清除能力几乎不受炮制温度的影
响，推测其原因可能是芦丁和槲皮素对ＡＢＴＳ自
由基的清除能力受到了其它物质的干扰所致，需
设计实验进一步证明。
８４３
　第４期 　　王　玲等：炮制温度对槐米中黄酮、鞣质含量及其抗氧化活性的影响
２．２　炮制温度对槐米中鞣质含量及其抗氧化活
性的影响
　　炮制温度对水提取液中槐米鞣质的含量及其
对自由基ＤＰＰＨ和 ＡＢＴＳ的清除能力的影响见
图３和图４。图３结果表明，１２０℃以下，烘制温
度对槐米中鞣质的含量无明显影响；但当温度上
升至１２０～１８０℃时，槐米中鞣质的含量明显增
加，这是由于在此温度范围内，槐米中黄酮类成分
发生分解作用，产生大量的鞣质类成分，鞣质含量
上升；但当温度超过１８０℃，由于受高温的影响，
槐米中的鞣质也产生分解、炭化作用，因而鞣质含
量随之下降［１６］。这一结果也与中药传统理论“制
炭止血”和“炒炭存性”一致。
图３　炮制温度对鞣质含量的影响
Ｆｉｇ．３　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔａｎｎｉｎｓ
图４　炮制温度对槐米水提液抗氧化活性的影响
Ｆｉｇ．４　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
不同炮制温度对槐米水提液的抗氧化活性的
研究表明，在１４０℃以下，槐米水提液对 ＤＰＰＨ
自由基的清除能力没有明显的变化；而当温度上
升至１４０～１８０℃时，槐米水提液对ＤＰＰＨ 自由
基的清除能力迅速增加；但当温度超过１８０℃时，
对ＤＰＰＨ自由基的清除能力却随之下降，表明槐
米水提液的抗氧化活性与所含的鞣质具有正相关
性。与槐米醇提液对 ＡＢＴＳ自由基的清除能力
相同，槐米水提液对ＡＢＴＳ自由基的清除能力与
温度基本没有明显关系。
３　结　论
采用微波辅助提取法，考察炮制温度对槐米
中黄酮和鞣质含量及抗氧化活性的影响。结果表
明，槐米经不同温度处理后，黄酮和鞣质成分均产
生了明显的变化，并且两者的含量与清除ＤＰＰＨ
自由基的能力呈明显的正相关性，但对ＡＢＴＳ自
由基的清除能力可能由于受到某些成分的干扰而
表现不明显，需要进一步研究探讨。
参　考　文　献
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（责任编辑　林　琳）
９４３