全 文 ：夜交藤改善睡眠活性成分研究
汲广全， 杨 娟* ， 杨小生
(贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室，贵州 贵阳 550002)
收稿日期:2010-05-18
基金项目:贵州省优秀科技教育人才省长专项资金［黔省专合字(2006)82 号］
作者简介:汲广全(1982 －)，男，硕士，研究方向:药食资源利用。Tel:(0851)3804370 E-mail:jiwenqiang1213@ 163. com
* 通讯作者:杨 娟(1971 －)，女，研究员，博士，研究方向:天然活性成分。Tel:(0851)3804370 E-mail:yangxz2002@ 126. com
关键词:夜交藤;改善睡眠;活性成分
摘要:目的:分离纯化夜交藤中具有改善睡眠作用的活性成分。方法:运用改善小鼠睡眠试验确定夜交藤中的活性部位，
再采用反复硅胶柱层析和 Sephadex LH-20 凝胶柱层析从活性部位中分离化合物，波谱方法鉴定结构，并对化合物进行活
性筛选。结果:分离并鉴定了 4 个化合物，分别为大黄素甲醚(1)、大黄素(2)、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷(3)和大黄
素-8-O-β-D-葡萄糖苷(4)。大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷具有较好的改善睡眠活性。结论:大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷是夜
交藤中改善睡眠的活性成分之一。
中图分类号:R284. 1 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2011)03-0514-03
随着社会的发展、现代生活节奏的加快以及生活方式的
改变，各种睡眠障碍性疾病日益成为一个突出的问题，失眠
则被列为最常见的几种睡眠疾病之首［1］。对于失眠症的治
疗，与西药相比，中药以其药源广泛、副作用和依赖性小等优
势日益受到人们关注［2］。
夜交藤为蓼科植物何首乌 Polygonum multiflorum Thunb.
的藤茎或带叶藤茎，又名首乌藤［3］。夜交藤作为一种常用中
药，性平无毒、味甘微苦，具有养心安神，祛风通络之功效［4］。
目前对夜交藤改善睡眠的报道［5-7］，主要是对其水煎剂及不
同种类化学成分总提物的改善睡眠活性进行研究，而夜交藤
中改善睡眠的活性成分还不明确，本实验对夜交藤改善睡眠
活性部位的化学成分进行了分离纯化，并发现了其具有较好
改善睡眠效果的活性成分。
1 材料与方法
1. 1 材料与试剂
夜交藤(Caulis polygoni multiflori)采自贵州省施秉县何
首乌种植示范基地，为何首乌 Polygonum multiflorum Thunb
的藤茎;♂性昆明小鼠，18 ～ 22 g，由贵阳医学院实验动物中
心提供［生产许可证号:SCXK(黔)2002-0001］。D101 型大
孔树脂(沧州宝恩化工有限公司);戊巴比妥钠(国药集团化
学试剂有限公司，批号:WS20060401);枣仁安神制剂(贵州
同济堂制药公司，批号:20090702);褪黑素胶囊(惠普生，南
宁富莱欣生物科技发展有限公司，批号:HP00045)。
1. 2 方法
1. 2. 1 样品的制备 称取夜交藤干燥药材 1 kg，粉碎，用
75 %乙醇回流提取 3 次，每次 2 h，提取液减压浓缩至无醇
味，得到夜交藤醇提物。夜交藤醇提物加适量水混悬，用石
油醚进行萃取，得到石油醚萃取部分和水部分。
对石油醚萃取后的水层部分湿法上大孔树脂柱，用乙醇
梯度洗脱，分别得到大孔树脂蒸馏水洗脱部分，30 %，60 %
和 90 %乙醇洗脱部分。
1. 2. 2 实验分组 将 70 只小鼠随机分为 7 组，每组 10 只，
分别为石油醚萃取组、蒸馏水洗脱组、30 % 乙醇洗脱组、
60 %乙醇洗脱组、90 %乙醇洗脱组、空白对照组和枣仁安神
制剂阳性对照组。
1. 2. 3 供试品的配制
(1)石油醚浸膏灌胃液的制备:称取该浸膏溶于由花生
油、吐温和水(1:1:8)配制的溶液中;
(2)空白对照:为生理盐水;
(3)阳性对照:为市售药用枣仁安神制剂，水溶液配制;
(4)蒸馏水洗脱部分灌胃液:用蒸馏水配制;
(5)30 %，60 %和 90 %部分灌胃液:1%羧甲基纤维素
钠配制。
1. 2. 4 改善睡眠试验［8-9］ 对戊巴比妥钠阈下催眠剂量的
影响:小鼠连续灌胃 3 d，于末次灌胃 30 min 后，各组小鼠腹
腔注射 25 mg /kg 戊巴比妥钠阈下催眠剂量，观察在 30 min
内翻正反应消失的小鼠只数(翻正反射消失 1 min以上者)。
延长戊巴比妥钠睡眠时间试验:小鼠连续灌胃 3 d，于末
次灌胃 30 min后，各组小鼠腹腔注射 50 mg /kg 戊巴比妥钠
阈上催眠剂量，观察记录腹腔注射后小鼠翻正反应消失(翻
正反射消失 1 min为指标)到恢复的时间，即睡眠持续时间。
1. 2. 5 统计与分析 实验数据采用均数 ±标准差(x ± s)表
示，应用 SPSS17. 0 应用统计分析软件进行数据处理，睡眠只
数的组间比较采用卡方检验，睡眠持续时间的组间比较采用
t检验。
2 结果与分析
2. 1 夜交藤改善睡眠活性部位的确定
从表 1 可以看出，在戊巴比妥钠阈下催眠剂量实验中，
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30%乙醇洗脱组和 60% 乙醇洗脱组小鼠入睡只数分别为 5
只和 4 只，与空白组比较有显著差异，而与酸枣仁阳性对照
组比较无统计学意义;在戊巴比妥钠阈上催眠剂量实验中，
30 %和 60 %乙醇洗脱组与空白对照组相比差异极显著(P
< 0. 01)，与酸枣仁阳性对照组相比，差异不显著，说明这两
部分具有较好的改善小鼠睡眠活性。
表 1 夜交藤各组分对小鼠睡眠的影响(n =10，x ± s)
组 别
给药剂量
/(g /kg)
小鼠入睡
只数
小鼠睡眠时
间 /min
可延长睡眠
时间 /%
空白组 0 0△ 41. 9 ± 5. 3△△ -
石油醚萃取组 6. 1(生药) 0△ 45. 0 ± 5. 6△△ 7. 2
蒸馏水洗脱组 6. 1(生药) 0△ 40. 8 ± 4. 3△△ -
30%乙醇洗脱组 6. 1(生药) 5* 60. 9 ± 8. 4 47. 7
60%乙醇洗脱组 6. 1(生药) 4* 64. 5 ± 8. 1 53. 9
90%乙醇洗脱组 6. 1(生药) 1△ 43. 9 ± 6. 5△△ 4. 7
枣仁安神制剂组 0. 168(制剂) 5* 62. 2 ± 7. 9 48. 5
注:与空白组相比，* P < 0. 05， P < 0. 01;与阳性对照组相
比，△P < 0. 05，△△P < 0. 01。
2. 2 夜交藤活性部位化学成分的分离纯化
2. 2. 1 提取与分离 另取夜交藤干燥药材 20 kg，按照 1. 2.
1 项所述方法得到大孔树脂 60 %乙醇洗脱部分(231g)。将
该洗脱部分进行硅胶柱层析，氯仿-甲醇梯度洗脱，得到 Fr 1
～ Fr 4 四个部分。其中 Fr 1 和 Fr 2 部分分别经硅胶柱层析，
石油醚-丙酮(10 ∶ 1)洗脱后，用 Sephadex LH-20 凝胶柱纯化
得化合物 1 和化合物 2;Fr 3 部分经反复硅胶柱层析，氯仿-
甲醇(20 ∶ 1)洗脱得到化合物 3 和化合物 4。
2. 2. 2 结构鉴定 化合物 1:黄色晶体，EI-MS m/z(%):
284［M］+(100);1HNMR (400 MHz，CDCl3)δ:7. 61 (1H，
s，5-H)，7. 35 (1H，s，4-H)，7. 08 (1H，s，7-H)，6. 69
(1H，s，2-H)，3. 94 (3H，s，Ar-OCH3)，2. 45 (3H，s，Ar-
CH3)。
13C NMR (100 MHz，CDCl3)δ:190. 8(C-9)，182. 0
(C-10)，166. 4 (C-3)，165. 1 (C-1)，162. 1 (C-8)，148. 4
(C-6)，135. 2 (C-5a)，133. 2 (C-4a)，124. 5 (C-7)，121. 2
(C-5)，113. 7 (C-1a)，110. 0 (C-8a)，108. 2 (C-4)，106. 6
(C-2)，56. 0 (Ar-OCH3)，22. 0 (Ar-CH3)。以上数据与文
献［10］相符，化合物鉴定为大黄素甲醚。
化合物 2:橙黄色针晶，EI-MS m/z (%):270 ［M］+
(100);和大黄素对照品对照，TLC的 Rf值和显色一致，确定
为大黄素。
化合物 3:黄色针晶，EI-MS m/z (%):284 ［M-glu］+
(100);1H-NMR (400 MHz，DMSO-d6)δ:13. 03 (1H，s，1-
OH )，7. 46 (1H，s，5-H)，7. 33 (1H，d，J = 2. 4 Hz，4-H
)，7. 16 (1H，s，2-H)，7. 16 (1H，s，7-H)，5. 15 (1H，d，
J = 7. 2 Hz，糖上端基 H，β构型) ，4. 70 (1H，t，J = 6. 0
Hz，糖上 C6-OH)，3. 16 ～ 3. 75 (6H，m，糖上的 6 个 H)，
3. 95 (3H，s，6-OCH3)，2. 40 (3H，s，3-CH3);
13 C-NMR
(100 MHz，DMSO-d6) δ:186. 5 (C-9)，181. 9 (C-10)，
164. 7 (C-6)，161. 7 (C-8)，160. 7 (C-1)，147. 2 (C-3)，
136. 4 (C-5a)，132. 1 (C-4a)，124. 3 (C-2)，119. 4 (C-4)，
114. 5 (C-1a)，114. 4 (C-8a)，107. 3 (C-7)，106. 5 (C-5)，
100. 6 (glu-C-1)，77. 5 (glu-C-5)，76. 6 (glu-C-3)，73. 3
(glu-C- 2)，69. 8 (glu-C-4)，60. 8 (glu-C-6)，56. 1 (6-
OCH3)，21. 5 (3-CH3)。与文献［11］对照确定为大黄素甲
醚-8-O-β-D-葡萄糖苷。
化合物 4:黄色针晶，EI-MS m/z (%):270 ［M-glu］+
(100);1H-NMR (400 MHz，DMSO-d6)δ:13. 08 (1H，s，1-
OH )，7. 41 (1H，s，5-H)，7. 26 (1H，d，J = 2. 4 Hz，4-H
) ，7. 11 (1H，s，2-H)，6. 99 (1H，d，J = 2. 4 Hz，7-H)，
5. 04 (1H，d，J = 7. 6 Hz，糖上端基 H，β 构型) ，4. 64
(1H，t，J = 6. 0 Hz，糖上 C6-OH)，3. 32 ～ 3. 73 (6H，m，
糖上的 6 个 H)，2. 37 (3H，s，3-CH3);
13C-NMR (100 MHz，
DMSO-d6)δ:186. 4 (C-9)，182. 1 (C-10)，164. 2 (C-6)，
161. 7 (C-8)，161. 1 (C-1)，146. 9 (C-3)，136. 5 (C-5a)，
132. 0 (C-4a)，124. 2 (C-2)，119. 3 (C-4)，114. 4 (C-1a)，
113. 3 (C-8a)108. 4 (C-7)，108. 4 (C-5)，100. 8 (glu-C-
1)，77. 3 (glu-C-5)，76. 4 (glu-C-3)，73. 3 (glu-C-2)，69. 4
(glu-C-4)，60. 6 (glu-C-6)，21. 4 (3-CH3)。与文献［11］对
照确定为大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷。
2. 3 改善睡眠活性成分的确定
由于化合物 1 和化合物 3 在药材中的含量较低，分离得
到的量不足以进行整体动物试验，所以只对化合物 2(大黄
素)和化合物 4(大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷)进行了改善睡眠
试验。将 50 只小鼠随机分为 5 组，分别为大黄素组、大黄素
糖苷组、空白组、枣仁安神制剂和褪黑素阳性对照组，改善睡
眠试验同 1. 2. 4 项。从表 2 可以看出:大黄素糖苷组在戊巴
比妥钠阈下催眠剂量实验中小鼠入睡只数与枣仁安神制剂
组和褪黑素组相接近，而与空白组相差较大;在戊巴比妥钠
阈上催眠剂量实验中，大黄素糖苷组小鼠睡眠时间与空白组
差异极显著(P < 0. 01)，而与两个阳性对照组差异不显著，
说明大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷具有较好的改善小鼠睡眠活
性。
表 2 夜交藤活性部位化学成分对小鼠睡眠的
影响(n =10，x ± s)
组 别
给药剂量
/(mg /kg)
小鼠入睡
只数
小鼠睡眠
时间 /min
可延长睡眠
时间 /%
空白组 0 1△ 36. 9 ± 7. 4△△ -
大黄素组 45 1△ 41. 6 ± 12. 0△△ 12. 7
大黄素糖苷组 45 5* 59. 0 ± 15. 3 59. 9
枣仁安神制剂组 168 6* 54. 3 ± 9. 7 47. 2
褪黑素 84 7* 61. 1 ± 18. 9 65. 6
注:与空白组相比，* P < 0. 05， P < 0. 01;与阳性对照组相
比，△P < 0. 05，△△P < 0. 01。
3 讨 论
夜交藤中主要含有蒽醌类成分、二苯乙烯苷类成分，含
量较高的代表性化合物分别为大黄素、2，3，5，4′-四羟基二苯
乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷［4］。关于蒽醌类成分改善睡眠功能
的报道，有学者提到大黄能延长巴比妥类药物助睡眠时间，
大黄素 42 mg /kg 可延长睡眠时间 18. 7 %，芦荟大黄素 40
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mg /kg可延长睡眠时间 64. 3 %，大黄酸作用最强，47 mg /kg
可延长睡眠时间 87. 8 %［12］。本研究发现大黄素-8-O-β-D-
葡萄糖苷也有改善睡眠的作用，而大黄素改善睡眠的作用与
空白组比较差异不显著。至于大黄素苷比大黄素苷元改善
睡眠效果好的原因有待进一步研究。此外，从夜交藤各分段
提取物改善睡眠实验结果可以看出，除了大孔树脂 60 %乙
醇洗脱部分具有较好的改善睡眠活性外，大孔树脂 30 %乙
醇洗脱部分也同样具有较好的改善睡眠活性。但是由于该
洗脱部位化学成分极性较大，给分离纯化工作带来极大困
难，因此要全面系统的了解夜交藤中改善睡眠的活性成分有
待于进一步的研究。
参考文献:
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去氢骆驼蓬碱固体脂质纳米粒包封率测定方法研究
黄川生1， 王新春1，2* ， 王鲁妹2， 李 寅1
(1. 石河子大学药学院，新疆 石河子 832002;2.石河子大学医学院一附院，新疆 石河子 832008)
收稿日期:2009-12-09
基金项目:石河子大学医学院一附院科研起动资金专项(Yy2007-25)
作者简介:黄川生(1985-)，男，硕士生。
* 通讯作者:王新春，女，博士，主任药师，硕士生导师。研究方向:中药新药开发及新型纳米给药系统。Tel:(0993)2855827 E-mail:cwjwxc
@ 163. com。
关键词:去氢骆驼蓬碱;固体脂质纳米粒;包封率;透析法
摘要:目的:建立去氢骆驼蓬碱固体脂质纳米粒包封率的测定方法。方法:以紫外分光光度法测定，考察药物加样回收
率、透析平衡时间和透析体积比。结果:药物加样回收率是(99. 48 ± 0. 31)%，透析法平衡时间为 6 h，透析体积比为 1 ∶
15，去氢骆驼蓬碱固体脂质纳米粒的平均包封率为(81. 76 ± 0. 21)%。结论:透析法便捷、准确，适用于去氢骆驼蓬碱固
体脂质纳米粒的包封率测定。
中图分类号:R944 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2011)03-0516-03
去氢骆驼蓬碱(Harmine，HM)为蒺藜科 Zygophyllaceae
植物骆驼蓬 Peganum harmala L. 中 β-咔啉类生物碱，它源
自新疆维吾尔族特有抗肿瘤药用植物多裂骆驼蓬草的种籽
提取物，对 HeLa 细胞、人肝癌 (BEL-7402)及乳腺癌
(MA7825S)细胞等具有显著的抑制作用［1-4］。
固体脂质纳米粒(solid lipid nanaparticles，SLN)是以固
态的天然或合成的类脂为载体，将药物包裹于类脂核中制成
粒径约为 50 ～ 1000 nm 的固体胶粒给药体系［5-6］，具有制备
方法简单，利于工业化生产的优势，应用日益受到重视。
本研究采用两次高剪切乳化-超声法制备去氢骆驼蓬碱
固体脂质纳米粒(HM-SLN)，建立 HM-SLN 包封率的测定方
法，该法操作简单、可行、准确性较好，为去氢骆驼蓬碱固体
脂质纳米粒的研究奠定了一定的基础。
1 仪器与试药
UV-2201 分光光度计(日本岛津);AE-200 万分之一分
析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司);FSH-Ⅱ高速电
动匀浆器(江苏云坛);JY92-Ⅱ型超声波细胞粉碎机(宁波
新芝科器研究所);SHA-L 水浴恒温振荡器(江苏省金坛市
医疗仪器厂);HJ-7 六联恒温搅拌器(金坛市华峰仪器有限
公司);电热恒温水浴锅(北京市光明医疗仪器厂);透析袋
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