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红参中非挥发脂溶性成分含量测定



全 文 :人参研究 GINSENG RESEARCH 2014 年第 1 期
红参为五加科植物人参 (Panax ginseng C. A.
Mey.)经蒸制后的干燥根和根茎,其味甘,微苦,性温,
归脾、肺、心经,具大补元气,复脉固脱,益气摄血功效
[1]。 红参的成分较为复杂,其主要成分为皂苷类、氨基
酸类、挥发油类、无机元素和脂肪酸类等[2,3]。关于人参
脂溶性成分的研究已有很多报道,其主要包括脂肪酸
和酯、挥发油[4]。张宏桂等用甲醇和乙醚提取人参中脂
肪酸成分, 主要是亚油酸和油酸等不饱和脂肪酸 [5,6],
阎吉昌等采用 GC-MS鉴定了人参中的挥发油发现萜
烯类成分较多[7]。许多不饱和脂肪酸具有降血脂、抗动
脉粥样硬化、抗血栓形成等作用[8]。鲁歧发现人参加工
品种经加热处理,亚油酸含量呈上升趋势[9]。这部分物
质通常不易除去,通过提取、干燥后进入加工产品及
其相关制剂中,成为影响药品质量的一类成分,而关
于红参非挥发脂溶性物质总体含量测定的研究未见
报道,因此本文对红参非挥发脂溶性成分进行含量检
红 参中非挥发脂溶性成分含量测定
杨会芳 1 李德坤 2 周大铮 2 杨悦武 2 叶正良 2 张 勉 1* 鞠爱春 2*
(1.中国药科大学中药学院,南京,211198;2. 天津天士力之骄药业有限公司,天津,300402)
摘 要:目的 测定红参中非挥发脂溶性物质的含量。 方法:以提取溶剂用量、提取时间和提取次数为考察
对象设计正交试验,采用回流法提取红参中的非挥发脂溶性成分。结果 正交试验最佳优化方案为
A3B2C3,即 12倍量提取溶剂,提取 4 次,每次 2小时。 结论 经验证,此法普遍适用于各批红参药
材,为红参非挥发脂溶性成分的含量测定提供一个参考。
关键词:红参;非挥发脂溶性物质;含量测定
Determination of non-volatile fat-soluble component
content in Ginseng Radix
YANG Huifang1 LI Dekun2 ZHOU Dazheng2 YANG Yuewu2 YE Zhengliang2 ZHANG Mian1* JU Aichun2*
(1. China Pharmaceutical University, Nanjing 211198, China; 2. Tianjin Tasly Pride Pharmaceutical Co., Ltd., Tianjin 300402, China)
Abstract:Objective: the non -volatile fat -soluble component content in Ginseng Radix were determine.
Method: refluxing extraction was adopted to design the orthogonal experiment, extraction solvent
dosage, extraction time and extraction times as the investigation object extract the fat -soluble
components in the Ginseng Radix. Results: Orthogonal test the best optimization scheme for
A3B2C3, i.e., 12 times the amount of extraction solvent, extraction four times, each time 2 hours.
Conclusion verified that this method is generally applied to each batch of Ginseng Radix, for
removal and test of Ginseng Radix non-volatile fat-soluble components to provide a reference.
Key words: Ginseng Radix; non-volatile fat-soluble component; Content determination
基金项目:天津市科技重大专项“重大新药创制”,项目编号:2013ZX09402202。
作者简介:杨会芳,女,中国药科大学中药学院在读硕士,研究方向:中药学。
通讯作者:张勉,女,中国药科大学教授,博士生导师。 E-mail:mianzhang@126.com.
鞠爱春,男,高级工程师。 E-mail:juach@tasly.com.
6
人参研究 GINSENG RESEARCH 2014 年第 1 期
测,为其加工品的应用和质量控制提供一定参考。
1材料
1.1材料
红参,购于吉林省长白县,为 6 年生鲜参加工而
成。
1.2仪器及试剂
BUCHI R-215 型旋转蒸发仪; 电热恒温水浴锅
(上海森信实验仪器有限公司);电热恒温干燥箱(天
津市天宇实验仪器有限公司制造 ); METTLER
TOLEDO AL-204万分之一电子天平。 石油醚、乙醚、
二氯甲烷、三氯甲烷均为分析纯。
2方法与结果
2.1 药材粗细的选择
将同一批号的红参药材粉碎, 分别过 1 号筛、2
号筛、3 号筛、4 号筛。 称取过筛后的药材粉末各 5g,
加入三氯甲烷 10mL,没过药材表面,密闭,室温静置
48h,溶液过滤,水浴挥干,放入烘箱内干燥至恒重,称
重。 平行两次实验,实验结果见表 1。
表 1 药材粗细对非挥发脂溶性成分溶出度的影响
Table 1 Herbs thickness influence on non-volatile fat-soluble
ingredient dissolution
由以上实验结果明显看出,过 4 号筛红参药材非
挥发性脂溶性成分溶出率最高,所以本实验选用过 4
号筛粉末。
2.2提取溶剂的选择
将红参药材粉碎,过 4 号筛。 称取药材粉末 5g 4
份,分别加入石油醚、乙醚、二氯甲烷、三氯甲烷各
10mL,使其没过药材表面,密闭,室温静置 24h,溶液
过滤,水浴挥干,放入烘箱内干燥至恒重,称重。 按上
述方法做两次平行实验,实验结果见表 2。
表 2 溶剂对非挥发脂溶性成分溶出度的影响
Table 2 solvent influence on non-volatile fat-soluble ingredient dissolution
由以上结果明显看出: 三氯甲烷提取效果最好,
可选为红参非挥发脂溶性成分提取的最佳提取溶剂。
2.3提取方法的选择
将红参药材粉碎,过 4 号筛。 称取药材粉末 5g 3
份,加入 100ml 三氯甲烷,分别采用超声、回流、索氏
提取 1h,过滤,滤液水浴挥干,放入烘箱中干燥至恒
重,称重。每种提取方法做两次平行实验,实验结果见
表 3。
表 3 不同提取方法的比较
Table 3 Comparison of different extract method
由以上结果明显看出:通过实验结果可得出采用
回流提取红参,所得脂溶性成分含量最多,超声提取
红参所得脂溶性成分含量最少。故本试验选用回流提
取方法。
2.4正交试验建立最佳提取方法
为进一步优化红参中脂溶性物质提取方法, 采用
正交试验,以提取溶剂用量(倍)、提取时间(h)、提取次
数为因素进行考察,设计 L9(3)4正交表,结果见表 4。
表 4 因素水平表
Table4 Factors and levels
通过正交实验得出的结果,如表 5 所示,极差分
析表见表 6,方差分析表见表 7。
表 5 正交实验结果
Table5 Results of orthogonal experiments
实验 A(倍) B(h) C(次) D 重量(mg)
1 1 1 1 1 47.1
2 1 2 2 2 54.6
3 1 3 3 3 58.4
4 2 1 2 3 54.1
5 2 2 3 1 59.4
6 2 3 1 2 51.6
7 3 1 3 2 60.2
8 3 2 1 3 53.0
9 3 3 2 1 55.4
K1 160.1 161.4 151.7 161.9
K2 165.1 167.0 163.9 166.4
K3 168.6 167.0 178.0 165.5
R 8.5 5.6 26.3 4.6
杨会芳等:红参中非挥发脂溶性成分含量测定
分组 平行 1(mg) 平行 2(mg) 平均值(mg)
超声 48.7 46.2 47.5
回流 59.7 57.6 58.7
索氏提取 44.8 42.0 43.4
分组 平行 1(mg) 平行 2(mg) 平均值(mg)
石油醚 25.4 28.7 27.1
乙醚 32.2 32.4 32.3
二氯甲烷 36.0 39.7 37.9
三氯甲烷 40.8 42.3 41.6
分组 平行 1(mg) 平行 2(mg) 平均值(mg)
1 号筛 18.9 19.9 19.4
2 号筛 29.0 30.0 29.5
3 号筛 47.8 49.7 48.8
4 号筛 68.9 70.4 69.7
1 8 1.5 2
2 10 2 3
3 12 2.5 4
水平
A B C
溶剂用量/倍 提取时间/h 提取次数/次
7
人参研究 GINSENG RESEARCH 2014 年第 1 期
表 6 直观分析表
Table6 the result of visual analysis
表 7 方差分析表
Table 7 Variance analysis
经直观分析和方差分析得出,影响提取效率的主
次因素是:提取次数>溶剂用量>提取时间;其中提取
次数有显著性影响,提取溶媒用量和提取时间无显著
性影响。优选的最佳提取方案是 A3B2C3,即 12 倍量溶
剂,提取 4次,每次 2 小时。
2.5验证实验
正交实验结果显示, 影响提取效率的主次因素
是:提取次数>溶剂用量>提取时间。 最佳提取方案是
A3B2C3,即 12 倍量溶剂,提取 4次,每次 2 小时。 取同
一批红参药材粉末,按上述优化条件做 3 组平行验证
实验。 实验结果见表 8。
表 8 验证实验结果
Table 8 Results of verification experiment
验证实验结果均高于正交试验中最大值即第 7
组实验结果,且结果稳定。
2.6样品测定
为验证不同批次的红参药材和红参药材的不同
部位中脂溶性成分含量的差异性,选用不同批次的红
参药材 10批 (其中前六批为红参饮片, 后四批为芦
头,参须,参表皮,参芯四个部位)粉碎,过 4 号筛,分
别取 5g,加 12 倍量氯仿,提取 4 次,每次 2 小时。 提
取液减压浓缩至干,放入烘箱干燥至恒重。 依上述实
验方法平行 2 次。
2.6.1红参十批药材水分测定
按照 2010 版“中国药典”附录 IX H 水分测定法
进行测定。
2.6.2 实验结果
10批药材非挥发性脂溶性成分含量测定,结果见表 9。
表 9 样品测定结果
Table 9 Results of sample determination
本实验以干品计算红参中脂溶性成分的含量介
于 1.28%~1.45%之间。红参芦头中含有的非挥发脂溶
性成分含量较高,在 2.16%左右。
3讨论
人参中脂溶性物质主要是脂肪酸和挥发油, 本试
验所测 6批红参药材皆为去芦、去须的红参主根,参表
皮和参芯是从主根部分机械分离得到。 试验结果显示
提取的红参中非挥发脂溶性成分重量基本稳定在
60mg 左右,含量在 1.28%~1.45%之间,不同部位含量
的高低顺序是芦头>参须>主根,参表皮>参芯。 参须和
芦头的脂溶性成分含量均高于主根, 提示应用该部分
时应予以相应考虑。综上认为,本方法在不需要明确成
分的情况下可以作为检测红参中非挥发脂溶性成分含
量的一种简单有效的方法。 后续研究将扩大样品量检
测,寻找该类成分的边界值,为红参应用提供参考。
参 考 文 献
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CO2 萃取人参脂溶性成分的 GC-MS分析 [J]. 人参研
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学报, 1993,(04) : 52~53.
A 56.20 2.83
B 55.13 1.87
C 59.33 8.76
因素 极差
k3
53.37
53.80
50.57
k1
水平
k2
55.03
55.67
54.70
方差来源 离差平方和 自由度 F 比 F 临界值 显著性
A 12.167 2 3.219 19
B 5.547 2 1.467 19
C 115.407 2 30.531 19 *
误差 3.78 2
平行实验 重量/mg RSD%
1 62.8
0.64422 63.1
3 62.3
红参批号
平行 1
(mg)
平行 2
(mg)
平均
(mg)
水分
含量
脂溶性成分
含量 (按干
燥品计算)
20120302 67.1 67.3 67.2 7.64% 1.45%
20121104-2 60.0 60.2 60.1 8.58% 1.31%
20121101 59.8 57.0 58.4 8.41% 1.28%
20130201 61.0 59.5 60.3 8.3% 1.31%
20130105 59.2 60.2 59.7 8.06% 1.30%
20130503 60..8 61.4 61.1 8.5% 1.33%
参须 20090301 74.7 73.1 73.9 8.75% 1.62%
芦头 20120902 126.8 127.6 127.2 8.21% 2.16%
参皮 20130503 64.4 66.2 65.3 7.31% 1.40%
参芯 20130503 52.5 54.1 53.3 7.53% 1.15%
8