全 文 ：药 物 研 究
The medicine study
基金项目:蓝菊抗病毒口服液工艺及质量标准研究 (广东省中医药局课题，项目号:2009121 )。
HPLC测定蓝菊抗病毒口服液中蒙花苷的含量
郑艳平 林壮民
广东省第二人民医院，广东 广州 510317
【摘 要】 目的:建立蓝菊抗病毒口服液中蒙花苷的含量测定方法。方法:采用 HPLC 法，色谱柱:Acclaim120C18柱 (4. 6mm ×
250mm，5μm) ;流动相:甲醇 －水 －冰醋酸 (26∶ 23∶ 1) ;柱温:25℃;检测波长为 334nm;流速为 1. 0mL·min －1。结果:蒙花苷在 0. 025
～ 0. 25μg 之间线性关系良好，R2 = 0. 9999，平均加样回收率为 102. 41% (RSD = 1. 5%，n = 6)。结论:本方法简便、准确，重复性好，可
用于该制剂的质量控制。
【关键词】 蒙花苷;蓝菊抗病毒口服液;HPLC
【中图分类号】R284. 1 【文献标识码】A 【文章编号】1007 － 8517 (2011)16 － 0045 － 02
Determination of linarin in Lanju Kangbingdu oral liquid by HPLC
Zheng Yan － ping，Ling Zhuang － min
The second People’ s Hospital of Guangdong Province，Guangzhou 510317，China
Abstract:Objective:To establish a method for the content determination of linarin in Lanju Kangbingdu oralliquid by HPLC．
Methods:The content of adenosine was determined by HPLC and the chromatographic conditions were:Acclaim 120 C18 column
(4. 6mm × 250mm，5μm) ;the mobile phase consisting of methanol － water － glacial acetic acid slution (26∶ 23∶ 1) ;column tem-
perature at 25℃;detection wavelength being 334nm;flow rate 1. 0 mL·min －1;Results:A good linearity of linarin was in the range
of 0. 025μg ～ 0. 25μg (R2 = 0. 9999) ;The average recovery rate was 102. 41%，RSD = 1. 5% . Conclusion:The method is simple
and accurate and with a good reproducibility and can be used for the quality control of Lanju Kangbingdu oralliquid．
Key words:Linarin;Lanju Kangbingdu oralliquid;HPLC
蓝菊抗病毒口服液是广东省第二人民医院生产的中药
制剂，处方由板蓝根、大青叶、野菊花、重楼等中药组成。
具有清热解毒、凉血利咽的功效，临床用于防治病毒或细
菌引起的上呼吸道感染、扁桃体炎、肺炎等炎症。野菊花
为方中君药，具有抗病原微生物、抗炎、免疫、抗氧化等
作用［1］，其主要有效成分为蒙花苷，具有抗菌消炎活性，
对金黄色葡萄球菌和乙型溶血链球菌有一定的抑制作用［2］。
目前尚未见对蓝菊抗病毒口服液中蒙花苷含量测定报道，
故本文在相关报道［3 ～ 6］的基础上，采用 HPLC 法建立蓝菊
抗病毒口服液中蒙花苷含量测定方法，为进一步提高医院
制剂质量的可控性，提供试验基础，以确保其临床疗效。
1 仪器与试药
Ultimate 3000 智能高效液相色谱仪 (Ultimate 3000
HPLC泵，Ultimate 3000 HPLC 自动进样器;Ultimate 3000
HPLC柱温箱;Ultimate 3000 HPLC紫外检测器，Chromeleon
色谱工作站，) ;ER － 120A 电子分析天平 (Tokyo Japan) ;
超声波清洗仪 (北京医疗设备二厂) ;蓝菊抗病毒口服液
(广东省第二人民医院制剂室提供，批号:090720、
091214、100719) ;蒙 花 苷 对 照 品 (批 号: 111528 －
200605，供含量检测用)由中国药品生物制品检定所提供;
甲醇、冰醋酸为色谱纯 (天津四友精细化学品有限公司) ，
水为灭菌注射用水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
色谱柱:Acclaim 120 C18柱 (4. 6mm × 250mm，5μm) ;
流动相:甲醇 －水 －冰醋酸 (26 ∶ 23 ∶ 1) ;流速:1. 0mL·
min －1;柱温:25℃;检测波长:334nm;进样量 10μL。自
动精密吸取供试品溶液、对照品溶液和阴性样品溶液各
10μl，进行高效液相含量测定，蒙花苷保留时间为
5. 27min，分离度大于 2. 0，理论塔板数以蒙花苷峰计不低
于 4000，阴性样品溶液对实验结果无干扰，结果见图 1
～ 3。
2. 2 对照品溶液的制备 取蒙花苷对照品适量，精密称
定，加甲醇制成每 1mL含 25μg 的对照品溶液，即得。
2. 3 供试品溶液的制备 取蓝菊抗病毒口服液 5 支混合均
匀，精密量取 2. 00ml，置 25ml 的容量瓶中，加甲醇至刻
度，摇匀，静置过夜，用 0. 45μm的微孔滤膜滤过，即得。
2. 4 阴性样品溶液的制备 按蓝菊抗病毒口服液处方和工
艺制备不含野菊花的阴性样品，按“2. 3”项下方法制备阴
性样品溶液。
2. 4 线性关系考察 分别精密吸取“2. 2”项下蒙花苷对
照品溶液适量，加甲醇稀释使蒙花苷浓度分别为 2. 5、7. 5、
12. 5、20. 0、25. 0μg·mL －1的系列对照品溶液。精密吸取
系列浓度的对照品溶液各 10μL，按上述色谱条件测定峰面
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积，以进样量 (μg)为横坐标，以峰面积为纵坐标，得蒙
花苷的的回归方程为 Y = 0. 468X － 0. 052，线性范围为
0. 025 ～ 0. 25μg，r = 0. 9999。
2. 5 精密度试验 精密吸取“2. 2”项下蒙花苷对照品溶
液 10μL，在相同色谱条件下，重复进样 6 次，测定峰面积
并计算 RSD值。结果 RSD为 0. 727%。
2. 6 重复性试验 取同一批蓝菊抗病毒口服液 (批号:
100719) ，按“2. 3”项下方法平行制备 6 份，按上述色谱
条件测定峰面积。结果蒙花苷平均含量为 164. 715
μg·mL －1) ，RSD%为 0. 051%。
2. 7 稳定性试验 精密吸取同一批号室温放置的供试品溶
液 (批号:100719)10μL，分别于 0，2，4，8，24h 进样，
按上述色谱条件测定峰面积，结果其 RSD 值为 0. 362%，
表明供试品溶液在室温放置 24h稳定性良好。
2. 8 加样回收率试验 精密吸取已知含量的蓝菊抗病毒口
服液 (批号:100719，含量 164. 715μg·mL －1)1. 00mL，
共 6 份，分别置 25ml 的容量瓶中，分别精密加入 “2. 2”
项下蒙花苷对照品溶液 6mL (150μg) ，分别按“2. 3”项下
方法制备加样供试品溶液，按上述色谱条件测定峰面积，
计算，结果见表 1．
2. 9 样品含量测定 取 3 批蓝菊抗病毒口服液样品，按
“2. 3”项下方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液各
10μL，注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定峰面积，
代入标准曲线计算含量，结果见表 2.
表 1 蓝菊抗病毒口服中蒙花苷回收率测定结果 (n = 6)
实验号 取样量 /ml 样品含量 /μg 加入量 /μg 测得值 /μg 回收率 /% 平均回收率 / % RSD /%
1 1. 00 164. 715 150 318. 599 102. 66
2 1. 00 164. 715 150 318. 145 102. 29
3 1. 00 164. 715 150 318. 268 102. 37
4 1. 00 164. 715 150 318. 105 102. 26
5 1. 00 164. 715 150 318. 267 102. 37
6 1. 00 164. 715 150 318. 478 102. 51
102. 41 1. 5
表 2 三批蓝菊抗病毒口服液蒙花苷含量测定结果 (n = 3)
批 号
测定次数
1 2 3
蒙花苷平均含量
μg·ml －1
090720 164. 680 164. 674 164. 879 164. 744
091214 164. 678 164. 724 164. 656 164. 686
100719 164. 735 164. 669 164. 741 164. 715
3 讨论
3. 1 指标成分的选取 野菊花是方中君药，蒙花苷是野菊
花中主要有效成分，具有广泛的生理和药理活性，具有抑
制磷酸二氢酶、醛糖还原酶、金黄色葡萄球菌和乙型溶血
链球菌，抗菌等作用［2］。故我们在实验中以蒙花苷为含量
测定指标。
3. 2 样品提取条件的确定 实验中比较了水浴蒸干、不同
甲醇浓度制成不同供试品的方法，结果以甲醇提取分离效
果最佳，基线平整，蒙花苷峰踏板数较高，加样回收率好。
3. 3 色谱条件的选择 本实验考查甲醇 －乙腈 － 0. 5%醋
酸溶液［7］、甲醇 －水 －冰醋酸 (26∶ 23∶ 1) ，结果以甲醇 －
水 －冰醋酸 (26∶ 23∶ 1)为流动相，出峰时无拖尾，峰形对
称，分离度较大。波长比较了 207、267、326、334nm 附近
均有较大吸收峰，在 334nm 峰面积最大，无杂质干扰，故
以 334nm为检测波长。
3. 4 本文建立的方法稳定性和专属性良好，可用于蓝菊抗
病毒口服液中蒙花苷含量测定，以控制该制剂的质量。
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(收稿日期:2011. 07. 26)
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