全 文 ：论著 文章编号:1000-5404(2007)06-0516-03
水红花子醇提物抑制大鼠组织脂质过氧化反应的体外作用研究
葛　斌 1 ,张振明 1 ,许爱霞1 ,高　湘 1 ,雷晓燕 2　　(甘肃省人民医院:1药剂科 , 2小儿科 , 兰州 730000)
　　提　要:目的　研究水红花子醇提物的抗氧化活性。方法　用· OH生成系统 Fe2++抗坏血酸诱导大鼠心 、肝 、肾组
织匀浆脂质过氧化 , 用 TBA比色法测定 MDA含量;用 NBT还原法测酵母多糖 A刺激大鼠中性白细胞产生的 O-2 ;用分光
光度法测 H2O2诱发的大鼠红细胞溶血度。结果　6.3、12.5、25、50、100、200μg/LEFPO能不同程度抑制 Fe2++抗坏血酸
诱导的大鼠心 、肝 、肾脂质过氧化产物 MDA生成 ,其抑制心 、肝 、肾 MDA生成的 IC50分别为 31.8、 32.5、40.2 μg/L, 量效关
系均呈负相关, r分别为 -0.886、 -0.874及 -0.918(P<0.01);能不同程度抑制酵母多糖 A刺激中性粒细胞生成 O-
2
, IC
50
为 31.9μg/L,量效关系呈负相关 , r为 -0.873(P<0.01);能不同程度抑制 H2O2诱发的红细胞氧化溶血 , IC50为 56.2 μg/L,
量效关系呈负相关 , r为 -0.888(P<0.01)。结论　水红花子醇提物通过清除· OH、O-2 及 H2O2发挥抗氧化活性。
　　关键词:水红花子醇提物;丙二醛;自由基;溶血度;红细胞;中性粒细胞;抗氧化活性
　　中图法分类号:R282.71;R285.5 文献标识码:A
EffectofalcoholicextractfromFructusPolygoniOrientalisonlipidperoxidationin
rattissues
GEBin1 , ZHANGZhen-ming1 , XUAi-xia1 , GAOXiang1 , LEIXiao-yan2(1DepartmentofPharmacy, 2DepartmentofPediat-
rics, ThePeople sHospitalofGansuProvince, Lanzhou730000)
　　Abstract:Objective　TostudytheactivitiesofthealcoholicextractfromFructusPolygoniOrientalis
(EFPO)againstantioxidation.Methods　Theperoxidationinhomogenateofratheart, liverandkidneywas
inducedby· OHgenerationsystemFe2+ +ascorbicacid.Malondialdehyde(MDA)wasdeterminedbyTBA
colorimetricmethod.Superoxide(O-2 )fromzymosan-stimulatedneutrophilsofratwasmeasuredbyNBTreduc-
tionmethod.H2O2 -causedhemolysisoferythrocyteswasmeasuredbyspectrometry.Results　MDAinhomog-
enateofheart, liverandkidneyofratthatinducedby·OHgenerationsystemFe2+ +ascorbicacidwasinhibi-
tedby6.3, 12.5, 25, 50, 100, 200μg/LEFPO;IC50 ofEFPOtoMDAinheart, liverandkidneywas31.8,
32.5 and40.2μg/Lrespectivelyanditsdose-efectrelationwasofnegativerelativityandtherelativecoefi-
cientwas-0.886, -0.874and-0.918(alP<0.01).O-2 generationfromzymosan-stimulatedneutrophils
ofratwasinhibitedbyEFPO;IC50 ofEFPOtoO-2 generationwas31.9μg/Landitsdose-efectrelationwasof
negativerelativityandtherelativecoeficientwas-0.873(P<0.01).H2O2-causedhemolysisoferythrocytes
wasinhibitedbyEFPO.IC50 ofEFPOtoerythrocytehemolysiswas56.2μg/Landitsdose-efectrelationwasof
negativerelativityandtherelativecoeficientwas-0.888(P<0.01).Conclusion　EFPOexertsitsantioxi-
dationbyscavenging·OH, O-2 andH2O2 inbiologicalsystem.
　　Keywords:alcoholicextractfromFructusPolygoniOrientalis;malondialdehyde;freeradicals;hemoly-
sis;erythrocyte;neutrophil;antioxidation
　　水红花子(FructusPolygoniOrientalis, FPO)为蓼
科植物荭蓼的干燥果实 ,有消瘀破积 、健脾利湿功效。
　　基金项目:甘肃省自然科学基金计划项目(3ZS041-A25-073)
SupportedbytheNaturalScienceFoundationofGansuProvince
(3ZS041-A25-073)
　　作者简介:葛　斌(1965-),男 ,辽宁省大连市人 ,副主任药师 ,主要从事抗
衰老基础药理方面的研究 ,发表论文 10余篇。电话:(0931)
8281345, E-mail:gjy0630@163.com
　　收稿日期:2006-01-20;修回日期:2006-11-22
有研究资料表明 ,水红花子对艾氏腹水癌和肉瘤-180
有一定抑制作用 [ 1] 。本实验将对水红花子醇提物(ex-
tractfromfructuspolygoniorientalis, EFPO)体外抗氧化
活性进行探讨 ,旨在为开发中药类抗氧化剂提供理论
依据。
1　材料与方法
1.1　材料
　　硫代巴比妥酸(Thio-barbituricacid, TBA)为上海试剂二厂
516
第 29卷第 6期
2007年 3月 　 　
第　三　军　医　大　学　学　报
ACTA　ACADEMIAE　MEDICINAE　MILITARIS　TERTIAE　 　
Vol.29, No.6
Mar.2007
DOI :10.16016/j.1000-5404.2007.06.015
第 6期　 葛　斌 ,等.水红花子醇提物抑制大鼠组织脂质过氧化反应的体外作用研究 　　
产品 , 氯化硝基四氮唑蓝(Nitrobluetetrazolium, NBT)为上海前
进试剂厂产品 , 酵母多糖 A系 Sigma产品 , 其他试剂均为进口
或国产分析纯级产品。 Wistar大鼠 40只 , 雌雄不拘 , 体质量
(210±20)g,由兰州医学院实验动物中心提供。水红花子购自
药房 , 经甘肃省药品检验所宋平顺主任药师鉴定为蓼科植物红
蓼(PolygonumorientaleL.)的干燥成熟果实。
1.2　水红花子醇提物的制备
　　用回流提取法 , 将药材适度粉碎 , 用 80%乙醇浸泡 24h,水
浴中加热回流 , 放冷过滤 , 第 1次回流 1 h, 第 2次及第 3次各
约 30min,回收乙醇 , 60℃干燥即得 EFPO。提取物量(g)与原
药材比例约为 1.2∶100, EFPO用 5%二甲亚砜溶解备用。
1.3　实验分组
　　设空白组 、对照组和 6个剂量的试药组 , 每组 5只大鼠。
空白组大鼠组织不加诱发剂和试药 ,对照组大鼠组织仅加诱发
剂 , 试药组大鼠组织加诱发剂和不同剂量 EFPO。
1.4　酵母多糖 A悬浮液的制备 [ 2]
　　酵母多糖 A用大鼠血清悬浮为 5%质量浓度 , 37 ℃温育
30 min, 4 ℃, 3 000 ×g离心 10 min, 弃上清 , 沉淀用 4倍量
0.15 mmol/L磷酸缓冲盐水(BPS, pH7.4)冲洗 , 同法离心后弃
上清 , 洗 3次后用 BPS悬浮 ,低温贮存备用。
1.5　中性粒细胞的制备[ 2]
　　大鼠腹腔注射液体石蜡 10ml, 22 ～ 22h断头处死 ,用 4℃
D-Hanks液 (pH 7.4, 内含 1.3 mmol/LCa2+, 0.8 mmol/L
Mg2+, 10mmol/L葡萄糖)分 3次抽洗出腹腔渗出液 , 4 ℃,
500×g离心 10 min, 弃上清 , 沉淀用 4倍量 D-Hanks液洗涤及
同法离心 , 洗 3次后用 D-Hanks液悬浮 ,调中性粒细胞计数为 1
×106 /L, 低温贮存备用。
1.6　红细胞的制备[ 3]
　　大鼠断头 , 取肝素抗凝全血 , 2 000×g离心 6min,弃血浆 ,
所剩红细胞用 4倍量生理盐水洗涤及同法离心 , 洗 3次后用生
理盐水悬浮 , 调红细胞质量浓度为 0.5%,贮存备用。
1.7　· OH生成系统体外诱发大鼠心 、肝 、肾匀浆产
生丙二醛(malondialdehyde, MDA)的测定 [ 4]
　　取大鼠心 、肝 、肾 , 用 Tris缓冲液(pH 7.4, 10 mmol/L
Tris· HCl, 0.1 mmol/LEDTA-2Na, 10 mmol/L蔗糖 , 0.8%
NaCl)制备成 5%匀浆 , 组织匀浆 1 ml与药液(对照及空白管加
2.5 μmol/L二甲亚矾)37 ℃温育 10 min, 除空白管外 ,各管加
入 50∶50 μmol/LFe2+ +抗坏血酸溶液(终浓度), 继续温育
30 min, 用 TBA比色法测定 MDA含量 , 其中抑制率%=[对照
管 D(532)-测试管 D(532)] /[对照管 D(532)-空白管
D(532)] ×100%[ 5] 。
1.8　酵母多糖 A刺激大鼠中性粒细胞生成 O-2 的测定
　　取中性粒细胞悬浮液 1 ml,按 NBT还原法测定 O-2 [6] ,用吡
啶作参比 , 515nm波长处测定吸光度值 [ D(515)] , 以 NBT还原
物的量反映 O-
2
的变化。抑制率%=[对照管 D(515)-测试管
D(515)] /[对照管 D(515)-空白管D(515)] ×100%
1.9　H2O2诱发大鼠红细胞氧化溶血的测定 [ 3]
　　取红细胞悬浮液 1ml,加入 100 mmol/LH2O2(空白管不加
H2O2)及药液 , 37 ℃温育 1 h,加 4倍量生理盐水稀释 , 3 000×g
离心 6 min, 上清液于 415 nm波长处测定吸光度值 [ D(415)] ,
溶血度 =[测试管 D(415)-空白管 D(415)] /[对照管
D(415)-空白管 D(415)] ×100%, 抑制率% =[对照管
D(415)-测试管 D(415)] /[ 对照管 D(415)-空白管
D(415)] ×100%。
1.10　统计学处理
　　实验数据用 x±s表示 , 采用 SPSS10.0统计软件 ,组间比
较行 t检验 , 受试药量效相关显著性差异行相关性分析 , 用半
对数回归求算 IC50。
2　结果
2.1　EFPO对· OH生成系统诱发大鼠心 、肝 、肾匀浆
MDA的影响
　　大鼠心 、肝 、肾匀浆经 Fe2++抗坏血酸溶液诱发后 MDA显
著升高 , 6.3、 12.5、25、50、100、 200 μg/LEFPO不同程度抑制
Fe2++抗坏血酸诱导的大鼠心 、肝 、肾 MDA生成 , 其抑制心 、
肝 、肾 MDA生成的 IC
50
分别为 31.8、 32.5、40.2 μg/L,其量效
关系均呈负相关 , r分别为 -0.886、 -0.874、 -0.918(P<
0.01)(表 1)。
表 1　EFPO对· OH生成系统诱发大鼠心 、肝 、肾匀浆
MDA的影响(n=5)
MDA(nmol·g-1湿组织) 抑制率(%)组别 剂量(μg/L) 心 肝 肾 心 肝 肾
空白 　55.8±7.0 39.8±4.2 75.6±7.3
对照 149.3±6.3c 107.9±10.5c 197.3±8.2c
EFPO 200 61.2±7.1b 44.4±8.2b 88.6±8.2b 94.2 93.2 89.3
100 74.5±4.9b 53.7±5.9b 112.1±10.1b 80.0 79.6 70.0
50 90.2±4.7b 65.1±7.1b 132.7±6.6b 63.2 62.8 53.0
25 106.3±16.7b 74.5±8.9b 150.0±8.0b 46.0 49.0 38.9
12.5 129.8±8.6a 94.0±6.4a 171.5±13.1a 20.8 20.4 21.1
6.3 138.0±7.4a 102.2±7.0 185.0±7.6a 12.0 8.3 10.1
a:P<0.05, b:P<0.01,与对照组比较;c:P<0.01,与空白组比较
2.2　EFPO对大鼠中性粒细胞生成 O-2 及红细胞氧化
溶血的影响
　　大鼠中性粒细胞受酵母多糖 A刺激后 O-2 显著升高 , 红细
胞经 H2O2诱发后溶血度显著升高 , 6.3、 12.5、 25、 50、 100、
200μg/LEFPO不同程度抑制酵母多糖 A刺激大鼠中性粒细
胞生成 O-2 ,其 IC50为 31.9 μg/L, 不同程度抑制 H2O2诱发红细
胞氧化溶血 , IC50为 56.2 μg/L,其量效关系均呈负相关 , r分别
为 -0.873和 -0.888(P<0.01)(表 2)。
表 2　EFPO对大鼠中性粒细胞生成 O-2 及红细胞氧化溶血
的影响(n=5)
红细胞组别 剂量(μg/L)
粒细胞
D(515) 抑制率(%)溶血度(%)抑制率(%)
空白 0.185±0.008 3.4±0.8
对照 0.388±0.013c 100.0±0.0
EFPO 200 0.208±0.015b 88.7 27.8±3.2b 74.7
100 0.238±0.009b 74.2 40.1±3.4b 62.0
50 0.267±0.010b 59.6 51.7±3.7b 50.0
25 0.292±0.008b 47.3 67.6±9.4b 33.5
12.5 0.327±0.009b 30.2 82.1±3.7a 18.5
6.3 0.360±0.013a 13.6 96.3±11.2a 3.8
a:P<0.05, b:P<0.01,与对照组比较;c:P<0.01,与空白组比较
517　　
3　讨论
　　根据 Fenton反应原理 , Fe2+ +抗坏血酸可产生羟
自由基(·OH)[ 7] 。酵母多糖 A可诱发中性粒细胞产
生超氧阴离子自由基 (O-2 )[ 6] 。氧自由基包括 · OH
和 O-2 ,它们不断产生于生物体。适量自由基对细胞
的分裂 、生长 、消炎 、解毒等起积极作用 ,但过剩会损伤
细胞膜 ,使 DNA断裂 ,蛋白质变性 ,酶失活 ,最后导致
细胞解体和死亡 。脂质过氧化是氧自由基损伤组织的
重要方式[ 8] ,若设法清除氧自由基 ,就可抑制脂质过
氧化。已有研究证明 ,氧自由基过剩可诱发炎症 、免疫
失调 、恶性肿瘤等 [ 9] ,也是导致肝 、肾缺血性损伤及心
脑组织缺血再灌注损伤的关键因素 [ 10] ,研究和开发抗
氧化剂及自由基清除剂对防治与自由基有关的疾病有
重大意义。
　　本实验结果表明:大鼠心 、肝 、肾匀浆经 Fe2+ +抗
坏血酸溶液诱发后 MDA含量显著升高 ,中性粒细胞
受酵母多糖 A刺激后 O-2 显著升高 ,红细胞经H2O2诱
发后溶血度显著升高 。EFPO能不同程度抑制 Fe2+ +
抗坏血酸诱导的大鼠心 、肝 、肾脂质过氧化产物 MDA
生成 , 这提示 EFPO具有清除 · OH的显著作用。
EFPO能不同程度抑制酵母多糖 A刺激中性粒细胞生
成 O-2 ,提示其具有清除 O-2 的显著作用;能不同程度
抑制 H2O2诱发的红细胞氧化溶血 ,提示其具有清除
H2O2及对抗生物膜过氧化的显著作用:可见 , EFPO通
过清除 ·OH、O-2 及 H2O2而发挥抗氧化活性 。结果提
示 EFPO是一种有效的氧自由基清除剂 ,可能用于与
自由基相关疾病的防治。
参考文献:
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16(11):969-985.
(编辑　张大春)
个案与短篇 文章编号:1000-5404(2007)06-0518-01
药物输注系统植入治疗顽固性疼痛 1例
刘海鹏 ,杨　辉 ,杨天德 ,黄其林　　(第三军医大学新桥医院神经外科伽玛刀中心 , 重庆 400037)
　　通过植入性鞘内药物输注系统(implantedintrathecaldrug
deliverysystem, IDDS)进行鞘内给予阿片类药物来治疗顽固性
疼痛 ,是其他镇痛方法无效之后的一种治疗手段 [ 1 , 2] 。我科与麻
醉科合作 ,对 1例顽固性疼痛患者实施了该治疗 ,现报告如下。
　　患者 , 男性 , 31岁 , 因 “外伤性高位截瘫伴全身疼痛 3年”
于 2005年 6月 28日入院。患者于 3年前因车祸致伤 , 当时出
现颈部以下完全性瘫痪及感觉消失 ,且有大小便失禁。在其他
医院行颈 4植骨固定术后 , 颈部以下完全性瘫痪及感觉消失仍
　　作者简介:刘海鹏(1966-), 男 , 陕西省兴平市人 ,博士 ,副主任医师 ,副教
授 ,主要从事功能神经外科和立体定向放射神经外科方面的研究。
电话:(023)68755231, E-mail:haipengliu@sina.com
　　通讯作者:杨　辉 ,电话:13808390069
　　收稿日期:2006-04-20;修回日期:2006-07-25
然存在。出院后 10d左右出现颈部以下疼痛不适 , 呈针刺 、烧
灼样疼痛 , 持续性 ,间断时间短 。疼痛发作时用多种止痛药物 ,
都无明显缓解。以后出现四肢僵硬 ,肌肉萎缩 , 双手内收畸形 ,
双踝伸直畸形。因疼痛加剧 , 同时精神差 , 食欲下降 , 大小便不
能自解 , 要求行止痛治疗。
　　在植入药物输注系统之前 , 先进行筛选试验。筛选试验
前 1 d镇痛用药减量 50%,当天的镇痛药停用。患者在清醒状
态下由麻醉科医师在神经外科监护室行蛛网膜下腔穿刺。穿
刺成功 、脑脊液阳性的时候在蛛网膜下腔放置 1根硬膜外导
管 , 待患者发作剧烈疼痛时 , 经导管向蛛网膜下腔单次给予吗
啡 , 用量为 0.3mg。在筛选试验中 , 严密观察患者疼痛发作情
况的变化及生命征有无改变。筛选结果表明 ,患者疼痛明显缓
　　(下转 525页)
518
第 29卷第 6期
2007年 3月 　 　
第　三　军　医　大　学　学　报
ACTA　ACADEMIAE　MEDICINAE　MILITARIS　TERTIAE　 　
Vol.29, No.6
Mar.2007