全 文 :西 北 师 范 大 学 学 报 (自然科学版) 第 43卷 2007 年第 1 期
Journal o f No r thw est No rmal Univer sity (Na tur al Science) Vo l. 43 2007 No. 1
收稿日期:2006-03-22;修改稿收到日期:2006-06-12
作者简介:赵伟民 (1975—), 男 , 甘肃武威人 , 在读硕士研究生. 主要研究方向为细胞与发育生物学.
*通讯联系人 , E-mail:htd0147@sina. com
杏仁油对实验性高血脂大鼠肝脏中
脂酶活性及脂肪含量的影响
赵伟民 , 侯天德* , 张 继 , 程 , 李芳成 , 贾凌云
(西北师范大学 生命科学学院 , 甘肃 兰州 730070)
摘 要:以实验性高血脂模型大鼠为实验对象 , 设置 3 个杏仁油剂量(0. 5 , 1 , 1. 5 mL)组 、 高血脂组(HG)和对照组
(CG), 观察了不同剂量杏仁油对高血脂大鼠肝脏总脂解酶(LA)、 肝脏脂蛋白脂酶(LPL)和肝脂酶(H L)活性以及肝脏
脂肪含量的影响. 结果表明 , 杏仁油高剂量组(HDG)和杏仁油中剂量组(HMG)大鼠肝脏中 LA、 LPL、 H L 活性均显
著高于高血脂组(P<0. 01 或 P <0. 05), 杏仁油低剂量组(H LG)大鼠肝脏中 LA 、 H L 活性显著高于高血脂组(P<
0. 05), 杏仁油高 、 中剂量组大鼠的肝脏脂肪含量显著低于高血脂组(P<0. 01). 因此 , 杏仁油具有提高实验性高血脂
大鼠肝脏脂酶活性以及预防和改善肝脏脂肪积累的作用.
关键词:杏仁油;总脂酶;脂蛋白脂酶;肝脂酶;肝脂肪含量
中图分类号:Q 593. 1 文献标识码:A 文章编号:1001-988 Ⅹ(2007)01-0076-04
Effect of almond oil on lipase activity and fat content of
liver in experimental hyperlipemia rats
ZHAO Wei-min , HOU Tian-de , ZHANG Ji , CHENG Fang , LI Fang-cheng , JIA Ling-yun
(Co llege o f Life Science , Nor thw est No rmal Univer sity , Lanzhou 730070 , Gansu , China)
Abstract:U sing hyperlipmia model rats as the expe rimental animal , the effect o f almond oil on 3 doses of
almond oil g roups(0. 5 mL , 1 mL , 1. 5 mL), hyperlipemia g roup(HG) and control g roup(CG) is
investig ated. The results show that the lipase(LA), lipoprotein lipase(LPL), hepatic lipase(HL) activi ts
of liver in high do se of almond oil g roup(HDG) and middle dose o f almond oi l g roup(MDG) are obviously
higher than that in hyperlipemia g roup(P <0. 01 o r P<0. 05), the LA , HL activity of liver in low dose of
almond oil g roup(LDG) are obviously highe r than that in hyperlipem ia g roup(P <0. 05), the fat content
of liver in high dose o f almond oi l g roup and middle do se of almond oil group are obviously lowe r than
hyperlipemia g roup(P<0. 01). Therefo re , the almond oil could increase lipase act ivity of live r and prevent
and improve fat ty liver in experimental hyperlipemia rat.
Key words:almond oil;LA;LPL ;HL;fat content of liver
杏仁是我国北方普遍栽植的杏树果实种子 , 具
有多种药用价值和保健功效[ 1 ] . 但有关杏仁油对
肝脏总脂酶(LA)、 脂蛋白脂酶(LPL)、 肝脂酶
(HL)和脂肪肝的作用尚未见报道. 本实验观察了
杏仁油对高血脂大鼠肝脏 LA 、 LPL 、 HL 活性和
肝脏脂肪含量的影响.
1 材料和方法
1. 1 药品与仪器
杏仁购自辽宁东部地区 , 脂蛋白脂酶(LPL)及
肝脂酶(HL)测定试剂盒 、考马斯亮蓝蛋白测定试
剂盒购自南京建成生物工程研究所 , 其他试剂均为
76
2007 年第 1 期 赵伟民等:杏仁油对实验性高血脂大鼠肝脏中脂酶活性及脂肪含量的影响
2007 No. 1 Effect of almond o il on lipase activity and fat content o f liv er in expe rimental hyper lipemia r ats
国产分析纯. 724-型分光光度计 , 高速低温离心机
(Beckman , 美 国 ), 匀 浆 器 , 超 低 温 冰 箱
(Fo rma , 美国), 显微镜 (Nikon , 日本) 等.
1. 2 实验方法
1. 2. 1 实验动物分组 Wister 雄性大鼠 30 只 ,
鼠龄 6 ~ 8周 , 体重 210 ~ 280 g , 购自兰州大学实
验动物中心. 大鼠随机分为 5组 , 每组 6只 , 分笼
饲养. 5组分别是对照组 、 高血脂组 、 杏仁油高剂
量组 、杏仁油中剂量组 、 杏仁油低剂量组.
1. 2. 2 高血脂模型及给药 对照组给予普通饲料
并每只每日灌胃 1 mL 生理盐水 , 高血脂组和不同
剂量杏仁油组先喂以高脂饲料 (1%胆固醇 、 0. 5%
胆盐 、 0. 2%甲基硫氧嘧啶 、 2%猪油 、 5%黄豆 、
1%鱼粉和鸡蛋 、 2%鸡蛋蛋黄粉 、 88. 3%普通饲
料) 建立高血脂模型[ 2 , 3] ;两周后再根据不同组给
予不同处置 , 高血脂组予高脂饲料并每只每日灌胃
1 mL 生理盐水 , 不同杏仁油剂量组除给予高脂饲
料外 , 均给予相应的杏仁油 , 杏仁油高剂量组每只
每日灌胃 1. 5 mL , 杏仁油中剂量组每只每日灌胃
1 mL , 杏仁油低剂量组每只每日灌胃 0. 5 mL. 各
组饲料和饮水不加限制 , 室温保持在 22℃左右.
30 d后 , 禁食 16 h , 杀死 , 取对照组 、 高血脂组和
不同剂量杏仁油组肝脏 , 液氮速冻后超低温冰箱保
存待用.
1. 2. 3 杏仁油的提取 CO 2 超临界法提取杏仁
油[ 4 , 5] .
1. 2. 4 肝脏中 LA 、 LPL 、 H L 活性测定 称取肝
脏 0. 2 g , 按 1∶9的重量体积比加入生理盐水冰浴
匀浆后 , 0 ~ 4℃下在 2500转 /min离心 10 m in , 取
上清液即 10%匀浆测定 , 然后再取 10%匀浆用生
理盐水按 1∶4稀释成 2%的匀浆测定.
1. 2. 5 肝脏中的脂肪含量测定 根据 Hanson 等
(1963)[ 6 ]脂肪提取法测定肝脏中的脂肪含量. 称
取肝脏 2. 0 g , 加入 1 mL 蒸馏水 、 1 mL 氯仿 、 2
mL 甲醇 , 冰浴匀浆 2 min;加入 19 mL 氯仿 、 38
mL 甲醇 、 15 mL 蒸馏水 , 搅匀 , 再加入 2 mL 氯
仿 , 冰浴匀浆 30 s;加入 18 mL 氯仿搅匀后 , 再
加入 1 mL 蒸馏水 , 冰浴匀浆 30 s , 加入 19 mL 蒸
馏水搅匀. 匀浆液于 0 ~ 4℃下在 12000转 /min 离
心 30 min , 吸取下层含脂肪的氯仿层 , 用旋转蒸
发仪将氯仿蒸干 , 在真空氮气流中蒸发掉全部氯仿
溶剂. 用 1 /10 000 g 电子天平称重 , 求出肝脏脂
肪的含量.
1. 2. 6 肝脏病理组织学检查 先进行肝脏形态观
察 , 后取各组动物肝脏右叶作常规病理切片 , HE
染色 , 光镜下观察切片中肝脏细胞中脂肪含量程
度[ 7 , 8] .
1. 3 统计学处理
各组数据以平均值±标准差表示 , 采用 t检验
判断各组之间差异的显著程度 , 用统计软件 spss
处理数据.
2 结果
2. 1 新鲜肝脏形态观察与病理组织学检查
对照组肝脏形态特征均无异常变化;高血脂组
肝脏体积与对照组相比无明显差异 , 但色泽都是黄
白色且切面油腻;杏仁油高 、 中剂量组肝脏体积 、
色泽 、 切面都与对照组相似;杏仁油低剂量组肝脏
体积 、 色泽 、切面都与高血脂组肝脏相似.
对照组肝脏病理组织学检查均无异常变化 (图
1). 高血脂组和杏仁油低剂量组肝脏细胞内有很多
大小不一的脂肪滴泡且数量上没有明显变化 , 但杏
仁油低剂量组脂肪滴泡的分布明显比高血脂组肝脏
细胞中集中 (图 2 、 图 3).
杏仁油高 、中剂量组肝脏细胞内也有大小不一
的脂肪滴泡 , 但两组的数量明显少于高血脂组;而
且杏仁油高剂量组肝脏细胞内脂肪滴泡的数量明显
少于杏仁油中剂量组肝脏细胞质内脂肪滴泡 (图
4 、 图 5).
2. 2 杏仁油对高血脂大鼠肝脏中 LA、 LPL 及 HL
活性的影响
杏仁油对高血脂症大鼠肝脏中 LA 、 LPL 及
H L 活性的影响见表 1. 高 、 中 、 低剂量杏仁油显
著提高了 HL 活性(P <0. 05 或 P <0. 01), 高 、
中 、低剂量杏仁油对高血脂大鼠肝脏 HL 活性提高
率分别是 24. 17%、 32. 63%、 48. 33%;高 、中剂
量杏仁油可提高 LPL 活性(P <0. 05), 其中高剂
量杏仁油对高血脂大鼠肝脏 LPL 活性提高率是
27. 19%, 中剂量杏仁油对高血脂大鼠肝脏 LPL 活
性提高率是 24. 98%, 低剂量对 LPL 活性没显著
影响(P>0. 05);高 、中 、 低剂量杏仁油显著提高
LA 活性(P<0. 01或 P <0. 05), 高 、 中 、低剂量
杏仁油对高血脂大鼠肝脏 LA 活性提高率分别是
53. 88%、 28. 14%、 23. 57%. 提高率计算:(杏仁
油组脂酶活性-高血脂组脂酶活性)/高血脂组脂酶
活性×100%.
77
西 北 师 范 大 学 学 报 (自然科学版) 第 43 卷
Journal of Nor thw est Normal Unive rsity (Natural Science) Vo l. 43
图 1 对照组肝脏切片(HE×40)
Fig 1 The paraffin-section o f CG liver(HE×40)
图 2 高血脂组肝脏切片(HE×40)
Fig 2 The paraffin-section o f HG liver(HE×40)
图 3 杏仁油低剂量组肝脏切片(HE×40)
Fig 3 The paraffin-section o f LDG liver(HE×40)
图 4 杏仁油高剂量组肝脏切片(HE×40)
F ig 4 The pa raffin-section of HDG liv er(HE×40)
图 5 杏仁油中剂量组肝脏切片(HE×40)
Fig 5 The par affin-section of MDG liv er(HE×40)
2. 3 杏仁油对高血脂大鼠肝脏脂肪含量的影响
杏仁油对高血脂大鼠肝脏脂肪含量的影响见表
2和图 5. 高血脂组肝脏脂肪含量显著高于对照组
(P<0. 01), 杏仁油组对高血脂大鼠肝脏脂肪显著
降低(P<0. 01), 新鲜肝组织颜色为白色 , 对照组
肝为鲜红色;杏仁油组介于二者之间. 杏仁油高剂
量对高血脂大鼠肝脏脂肪的抑制率达到 22. 81%,
杏仁油中剂量对肝脏脂肪的抑制率达到 11. 03%.
抑制率计算:(高血脂组脂肪含量 - 杏仁油组脂肪
含量) /高血脂组脂肪含量×100%[ 9 ] .
表 1 肝脏各种脂酶的活性( χ±SD)
Tab 1 Activ ity of three kinds o f lipases in liver( χ±SD) U /mgpro t
组别(gr oup) 动物数(N) 肝脂酶(HL) 脂蛋白脂酶(LPL) 总脂酶(LA)ρ- 1(pro t)=U /mg
对照组(CG) 6 0. 654±0. 229 0. 713±0. 249 1. 366±0. 371
高血脂组(HG) 6 1. 229±0. 183 △△ 1. 313±0. 312△△ 2. 541±0. 339△△
杏仁油高剂量组(HDG) 6 1. 526±0. 186*△△ 1. 67±0. 195*△△ 3. 91±0. 216**△△
杏仁油中剂量组(MDG) 6 1. 63±0. 269*△△ 1. 641±0. 181*△△ 3. 256±0. 225**△△
杏仁油低剂量组(LDG) 6 1. 823±0. 324**△△ 1. 316±0. 254△△ 3. 14±0. 492*△△
注:*P<0. 05 , **P<0. 01(与高血脂饲料组比较);△P<0. 05 , △△P<0. 01(与普通饲料组比较).
Annotation:*P<0. 05 , **P<0. 01(as com pared with HG);△P<0. 05 , △△P<0. 01(as compared with CG).
78
2007 年第 1 期 赵伟民等:杏仁油对实验性高血脂大鼠肝脏中脂酶活性及脂肪含量的影响
2007 No. 1 Effect of almond o il on lipase activity and fat content o f liv er in expe rimental hyper lipemia r ats
表 2 肝脏脂肪含量( χ±SD)
Tab 2 The content of fat in liver( χ±SD)
组别(g roup) 动物数(N) 脂肪 /肝湿重(fa t /fresh liver w eight) /% 抑制率(r ate of reduction) /%
对照组(CG) 6 6. 75±0. 99 —
高血脂组(HG) 6 22. 67±1. 69△△ —
杏仁油高剂量组(HDG) 6 17. 5±1. 05 **△△ 22. 81
杏仁油中剂量组(MDG) 6 20. 17±1. 61**△△ 11. 03
杏仁油低剂量组(LDG) 6 22±1. 26 △△ 2. 96
注:*P<0. 05 , **P<0. 01(与高血脂饲料组比较);△P<0. 05 , △△P<0. 01(与普通饲料组比较).
Annotation:*P<0. 05 , **P<0. 01(as com pared with HG);△P<0. 05 , △△P<0. 01(as compared with CG).
3 讨论
LPL 在许多组织中产生 , 主要分布在脂肪和
心肌等组织的毛细血管内皮细胞表面并在肝素作用
下释放进入血液 , LPL 是分解血清乳糜微粒
(CM)、 极低密度脂蛋白(V LDL)中甘油三脂(TG)
的脂解酶 , 可将 CM 和 V LDL 中的 TG 水解为甘
油和游离脂肪酸(FFA)[ 10] . HL 则主要在肝细胞中
合成 , 具有两种生物学功能 , 血浆中的 HL 水解各
种脂蛋白中的 TG 和磷脂(PL), 肝细胞中的 HL
还能作为配体促进肝细胞摄取高密度脂蛋白
(HDL)中的胆固醇或 LDL 残粒以及含载脂蛋白 B
脂蛋白 , 这种功能可影响血浆中脂蛋白的浓度[ 11] .
LA 是 LPL 与 H L酶活性的总和 , 同时具有甘油三
脂脂肪酶 、 甘油一脂脂肪酶及磷脂酶的活性. 通过
这些脂解酶类的作用可分解出游离脂肪酸 , 再进一
步由 β-氧化作用分解[ 12-14] .
结果表明 , 杏仁油显著降低高血脂大鼠肝脏脂
肪含量作用可能与提高 LA 、 LPL 、 HL 的活性有
关 , 提示 LA 、 LPL 、 HL 活性的提高可能加速肝
脏脂肪分解成游离脂肪酸 , 从而限制脂肪在肝脏内
积累. 另外 , 肝脏脂肪含量降低可能也与杏仁油对
胰脂酶的作用有关[ 15] . 高血脂组和杏仁油高 、中 、
低剂量组肝脏 LA 、 LPL 、 HL 活性均比对照组高 ,
可能是由于食物中脂类物质增多 , 肝脏 LA 、
LPL 、 H L活性随之增高所致. 因此 , 杏仁油可提
高肝脏脂酶活性 , 进而增加肝脏脂质分解 , 对脂肪
肝有一定的预防以及改善肝脂肪积累等作用.
参考文献:
[ 1 ] 李淑芳 , 陈晓明 , 郭意如. 杏仁的营养成分与功能
因子[ J] . 营养保健 , 2004 , (12):23-24.
[ 2 ] 杨 丹 , 于景翠 , 姜玉梅 , 等. 高脂血症沙鼠某些
脂酶活性的变化及鸦胆子油乳剂降脂作用的研究
[ J] . 中医药信息 , 1994 , (5):46-48.
[ 3] 于晓光 , 王淑娟 , 张淑杰 , 等. 高脂血症沙鼠某些
酯酶活性的变化及药物降脂作用的研究[ J] . 哈尔滨
医科大学学报 , 1997 , 31(1):12-14.
[ 4] 李科友 , 史清华 , 唐德瑞 , 等. 超临界 CO2 萃取杏仁
油的研究[ J] . 西北林学院学报 , 2001 , (1):56-58.
[ 5] 师梓文 , 付其仲, 陈邦杰 , 等. 杏仁油的物化性能及其
脂肪酸组成的分析[ J] . 色谱, 1999 , (5):506-507.
[ 6] HANSO S W F , OLLEY J. Application of the
Blight and Dyer me thod of lipid ex traction to tissue
homogenates[ J] . Biochem J , 1963 , 89:101-102.
[ 7] 潘 华 , 姚菊芳 , 朱萍妹 , 等. 高脂饮食性脂肪肝
模型大鼠动态病理学观察[ J] . 实验动物与比较医
学 , 2005 , 25(2):83-85.
[ 8] 黄海雄 , 张炳尧 , 段立华. 笔架山牌矿泉水对家兔
血脂水平的影响及抗脂肪肝作用观察[ J] . 中国实验
动物学杂志 , 1999 , 9(4):202-205.
[ 9] 高荫榆 , 罗丽萍 , 王应想 , 等. 薯蔓多糖对高脂血
症大鼠降血脂作用研究[ J] . 食品科学 , 2005 , 26
(2):197-201.
[ 10] 李佳楠 , 陈东辉 , 罗 霞 , 等. 温胆肠对高脂血症
大鼠及小鼠体内脂质代谢调节机理研究[ J] . 江汉大
学学报 , 2004 , 32(2):62-66.
[ 11] 张晓刚. 肝脂酶与脂蛋白代谢[ J] . 国外医学:临床
生物化学与检验学分册 , 2002 , 23(1):48-49.
[ 12] 单安山 , 徐奇友. 动物脂肪代谢与调控[ J] . 东北农
业大学学报 , 2004 , 35(2):129-134.
[ 13] 杜 荣 , 秦 健 , 王俊东. 动物脂质代谢调控的关
键及其研究进展[ J] . 动物科学与动物医学 , 2002 ,
19(10):16-19.
[ 14] 张晓刚 , 陈运贞 , 雷 寒 , 等. 实验性兔脂肪肝肝
脂酶活性变化及茶多酚的作用[ J] . 中华肝脏病杂
志 , 2003 , 11(2):77-80.
[ 15] 郑毅南 , 李慧萍 , 张 晶 , 等. 西洋参皂苷对脂肪
食小鼠脂肪和胰脂肪酶活性的研究[ J] . 吉林农业大
学学报 , 2005 , 27(5):519-521 , 542.
(责任编辑 陈广仁)
79