全 文 :基金项目:北京市中青年骨干人才培养项目(编号:201008102);北京
市教委科技计划面上项目(编号:KM20110858003)
作者简介:危晴(1971-),女,北京电子科技职业学院讲师,硕士。
E-mail:weiqing310420501@163.com
通讯作者:王晓杰
收稿日期:2013-04-11
第29卷第3期
2 0 1 3年5月
Vol.29,No.3
May.2 0 1 3
10.3969/j.issn.1003-5788.2013.03.008
乌骨藤脂肪酸组成成分的GC/MS分析
Analysis of faty acid composition fromCaulis
marsdeniaetenocissimaeby GC/MC
危 晴1
WEI Qing1
王晓杰1
WANG Xiao-jie1
王维彬1
WANG Wei-bin1
张佳琦1
ZHANG Jia-qi1
陈 亮2
CHEN Liang2
(1.北京电子科技职业学院,北京 100029;2.北京化工大学生命科学与技术学院,北京 100029)
(1.Beijing Polytechnic,Beijing100029,China;2.College of Life Science and
Technology,Beijing University of Chemical Technology,Beijing100029,China)
摘要:通过水浴回流提取乌骨藤中的脂肪酸,利用气相色谱
-质谱联用技术对乌骨藤的成分进行分析检测。结果表明:
在乌骨藤中共检测到27种物质,其中不饱和脂肪酸6种
(43.77%)、饱 和 脂 肪 酸 10 种 (33.53%)、醇 类 2 种
(5.18%)、烃类9种(12.48%)。3种奇数碳原子的脂肪酸为
十七碳酸、十九碳酸、二十三碳酸。乌骨藤中(E)-9-十八碳
烯酸、(10E,12Z)-十八碳二烯酸、棕榈酸含量较高。
关键词:乌骨藤;回流提取;脂肪酸;气相色谱/质谱
Abstract:Fatty acids were extracted from Caulis Marsdeniae
Tenocissimae by water reflux extraction.The extracts were analyzed
by GC/MC.The results showed that 27compositions were identified
in the extracts,which includes 6kinds of unsaturated fatty acids
(43.77%),10kinds of saturated fatty acids(33.53%),2kinds of
alcohol(5.18%)and 9kinds of hydrocarbons(12.48%).Three
kinds of fatty acids which were composed of odd-numbered carbon at-
oms were checked out in the experiment,including heptadecanoic
acid,nonadecanoic acid and tricosanoic acid,and the contents of(E)-
9-Octadecenoic acid,methyl ester,methyl 10-trans,12-cis-octadeca-
dienoate and Hexadecanoic acid,methyl ester were relatively higher.
Keywords:caulis marsdeniae tenocissimae;water reflux extraction;
fatty acid;GC-MS analysis
乌骨藤又名通光散、通光藤,是萝藦科牛奶菜属植物通
光藤(Marsdenia tenacissima(Roxb)Wight et Am.)的干燥
藤茎[1],主要分布在云南、贵州、广东、广西等地,含酚酸类、
甾体皂苷类、多糖类、生物碱类等有效成分[2-5]。研究[6-8]
表明乌骨藤具有清热解毒、止咳平喘、消炎镇痛、抗肿瘤、抗
病毒、调节免疫、保肝利尿等作用,已制成注射剂和片剂等多
种剂型应用于临床。张慧[7]、赵陆华等[9]均对乌骨藤的脂溶
性成分进行了研究,结果表明乌骨藤脂溶性成分中含有脂肪
酸、甾类、醇类、角鲨烯等主要成分,其中脂肪酸中的不饱和
脂肪酸具有抗肿瘤的活性成分,脂溶性成分中的角鲨烯也具
有抑制肿瘤生长的作用。目前脂肪酸的提取方法主要有超
声波辅助提取法[10,11]、超临界提取法[12]、索氏提取法[13]。
李双石等[14]采用超临界萃取乌骨藤挥发油的主要成分为二
十四烷、油酸、油酸乙酯、二十八烷。王晓杰等[15]采用顶空
固相微萃取乌骨藤挥发油,采用干法前处理得到的主要成分
为1-氯-4-[(4-硝基苯)磺酰基]苯、α-蒎烯、正丁醇、乙酸乙
酯,采用湿法前处理得到的主要成分为1-辛烯-3-醇、苏合香
醇、反氧化芳樟醇、苯乙酮。以上方法繁琐且对仪器的要求
较高。本试验采用水浴回流提取乌骨藤中的脂肪酸,同时利
用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术对乌骨藤脂肪酸中
的活性成分进行分析鉴定,探讨不同提取方法对乌骨藤脂肪
酸组成的影响,为乌骨藤脂肪酸的提取和开发利用提供科学
依据。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
1.1.1 材料与试剂
乌骨藤:购自安徽毫州;
CO2 气体:纯度99.5%,北京天佑顺气体有限公司;
石油醚(60~90℃)、氢氧化钾、甲醇、正己烷、无水硫酸
钠:分析纯,北京化工厂。
1.1.2 主要仪器设备
气相测谱仪:GC-MS7890A型,安捷伦公司;
质谱仪:5975型,安捷伦公司;
电子天平 :AR224CN型,奥豪斯仪器上海有限公司;
13
恒温水浴锅:HH-S型,江苏省金坛市医疗仪器厂;
旋转蒸发仪:LR4000型,瑞士Buchi公司。
1.2 方法
1.2.1 乌骨藤样品制备
(1)乌骨藤的预处理:将乌骨藤用蒸馏水冲洗后,放入
40℃电热鼓风干燥箱中干燥2h,粉碎过40目筛,置于试剂
瓶中备用。
(2)水浴回流提取:在250mL圆底烧瓶中加入乌骨藤
粉10g,石油醚150mL,放入90℃恒温水浴锅中,回流提取
4h,提取液减压蒸馏得挥发油,重量为1.422g。
(3)脂肪酸的甲酯化:取乌骨藤油样50mg,置于10mL
具塞试管中,依次加入0.5mL苯、0.5mL乙醚和1.0mL
2% NaOH-CH3OH溶液,45℃水浴酯化20min,冷却后加
水定容至10mL,待分层后吸取上清液用于 GC/MS分
析[16,17]。
1.2.2 GC-MS分析
(1)色谱条件:色谱柱为DB-FFAP柱(30m×0.25mm
×0.5μm);载气:氦气(99.999%);进样量:1μL;进样口温
度:230℃;流速:1.0mL/min;溶剂延迟:5.00min;柱温:升
温程序为起始温度100℃,保持2min,以5℃/min速率升
到260℃,保持20min。
(2)质谱条件:电子轰击离子源(EI),电离能量为
70eV;离子源温度为230℃;四级杆温度150℃;接口温度
为250℃;激活电压1.5V;质量扫描范围m/z35~450。
2 结果与讨论
2.1 GC-MS分析乌骨藤中脂肪酸的化学成分
通过对乌骨藤成分进行 GC-MS分析,得到总离子流
谱图,见图1。
应用色谱峰面积归一法测定各组分的相对含量,鉴定结
果见表1。
由表1可知,乌骨藤中共检测出27种成分,占提取物总
量的 97.36%。其中脂肪酸类 16 种,占提取物总量的
78.36%,烃类9种,占提取物总量的16.31%,醇类2种,占
提取物总量的3.14%。脂肪酸中含量较多的为正十六碳酸
图1 乌骨藤水浴回流提取物总离子流图
Figure 1 The gas chromatogram of water refluxing
extraction of Caulis marsdeniae tenocissimae
表1 乌骨藤提取物的化学成分及相对含量
Table 1 Chemical composition and relative content
of Caulis marsdeniae tenocissimae
序
号
保留
时间/min
名称 分子式
相对
含量/%
匹配
度
1 14.25 肉桂酸 C9H8O2 5.28 97
2 22.07 十四碳酸(肉豆蔻酸) C14H28O2 1.30 99
3 24.07 9-十二碳烯酸 C12H22O2 2.46 86
4 24.45 十五碳酸 C15H30O2 0.79 99
5 26.44 (Z)-十六烯酸 C16H30O2 1.40 99
6 27.21 十六碳酸 C16H32O2 18.08 98
7 29.33 二十烷 C20H42 0.97 84
8 30.12 十七酸 C17H34O2 1.03 98
9 32.37
(10E,12Z)-十八碳二
烯酸
C18H32O2 16.38 99
10 32.60
(E)-9-十八碳烯酸(反
油酸)
C18H34O2 16.70 99
11 32.72 油酸 C18H34O2 1.56 99
12 33.36 硬脂酸 C18H36O2 2.68 99
13 35.866 十五烷 C15H32 0.57 94
14 36.776 十九酸 C19H38O2 0.62 96
15 39.37 11-正戊基二十一碳烷 C26H54 1.74 94
16 40.33 18-甲基十九碳酸 C20H40O2 2.52 98
17 42.93 二十四烷 C24H50 0.90 98
18 44.00 顺-13-二十二烯醇; C22H44O 2.12 98
19 46.52 二十烷 C20H42 3.52 98
20 47.53 二十二烷酸(山嵛酸) C22H44O2 2.72 99
21 50.07 二十四烷 C24H50 1.41 97
22 51.09 二十三烷酸 C23H46O2 0.58 99
23 53.66 三十碳烷 C30H62 3.40 98
24 54.83 木蜡酸(二十四酸) C24H48O2 2.20 99
25 55.84 γ-谷甾醇 C29H50O 3.06 96
26 57.94 二十八烷 C28H58 1.91 96
27 58.35 角鲨烯 C30H50 1.46 99
(18.08%)、(E)-9-十八碳烯酸(16.70%)、(10E,12Z)-十八碳
二烯酸(16.38%)、肉桂酸(5.28%)。
2.2 乌骨藤中脂肪酸生物活性成分分析
水浴回流提取乌骨藤挥发油27种成分中,有多种具有
生物活性,如含量较高的不饱和脂肪酸(10E,12Z)-十八碳二
烯酸(16.70%)和(E)-9-十八碳烯酸(16.38%)具有抗氧化、
抗自由基、抗肿瘤、增强免疫的作用[18]。不饱和脂肪酸中的
(10E,12Z)-十八碳二烯酸(16.38%)具有抗动脉粥样化形
成,抗糖尿病、抗过敏、调节免疫、促进生长、降低身体脂肪并
增加瘦肉量及影响骨骼形成等多种生理作用[19]。饱和脂肪
酸中含量较高的十六碳酸具有较强的增强心肌活性的功
能[20]。角鲨烯(1.46%)是一种具有抗氧化、增强免疫功能
和抑制肿瘤生长的化合物[7]。
23
基础研究 2013年第3期
3 结论
通过水浴回流法提取乌骨藤中的脂肪酸,利用气相色
谱-质谱联用技术进行分析检测,共鉴定出27种化合物,其
中6 种 不 饱 和 脂 肪 酸 (43.77%)、10 种 饱 和 脂 肪 酸
(33.53%)、2种醇类(5.18%)、9种烃类(12.48%)。这些化
合物中有多种生物活性成分,如含量较高的(E)-9-十八碳烯
酸 (16.70%)、(10E,12Z)-十八碳二烯酸(16.38%)、十六酸
(18.08%)和含量较少的角鲨烯(1.46%)均有抗氧化、抗自
由基、抗癌的作用,与乌骨藤的药理活性相一致。乌骨藤挥
发油中的其它成分是否有生物活性有待进一步研究。
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