全 文 ：2011 年 6 月
第 25 卷第 2 期总 84 期
北京联合大学学报(自然科学版)
Journal of Beijing Union University(Natural Sciences)
Jun． 2011
Vol． 25 No． 2 Sum No． 84
［收稿日期］ 2010 － 01 － 04
［作者简介］ 王丽(1984—)，女，江苏徐州人，浙江中医药大学药物研究所硕士研究生，研究方向为中药化合物的提取
及质量标准。
HPLC测定乌药叶中槲皮素的含量
王 丽1，吕圭源1，王 利2
(1. 浙江中医药大学，杭州 310053;2. 浙江天台山乌药生物工程有限公司，浙江 天台 317200)
［摘 要］ 目的:建立高效液相色谱测定乌药叶中槲皮素含量的方法。方法:色谱柱(ZORBAX
ECLIPSE XDB-C18，150 mm × 4. 6 mm，5 μm)，以甲醇 ∶ 0. 4% 磷酸 = 50 ∶ 50 为流动相，流速:
1. 0 mL /min，检测波长:360 nm，柱温:30℃。结果:槲皮素在 0. 129 μg ～ 1. 29 μg 内线性关系良好
(r2 ＞ 0. 9999);重复性 RSD 为 4. 2%;平均加样回收率为 101. 0%，RSD 为 2. 37%。结论:该方法
专属性强，简便快捷，结果准确，可用作乌药叶槲皮素的含量测定。
［关键词］ 乌药叶;槲皮素;含量测定;高效液相
［中图分类号］ R 284 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1005-0310(2011)02-0050-03
Determination of Quercetin in the Leaves of
Lindera aggregate (Sims)Kosterm． by HPLC
WANG Li1，LV Gui-yuan1，WANG Li2
(1. Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou 310053，China;
2. Biological Engineering Co．，Ltd．，Zhejiang Tiantai Aggregata，Tiantai Zhejiang 317200，China)
Abstract:Objective To establish a method for the determination of quercetin in the leaves of Lindera aggregate
(Sims)Kosterm． Methods Colum ZORBAX ECLIPSEXDB-C18，150 mm × 4. 6 mm，5 μm，the mobile phase
consisted of methanol － 0. 4% phosphoric acid 50 ∶ 50 with a flow rate of 1. 0 mL /min，the detection wavelength
was monitored at 360 nm，and the column temperature was maintained at 30℃ ． Results The calibration curves
of quercetin were linear in the range of 0. 129 μg ～ 1. 29 μg． The reproducibity RSD was 4. 18%，the average re-
covery of quercetin was 101. 0%(RSD = 2. 37%)． Conclsion The method is specific，simple，quick，accurate
and can be used for the determination of quercetin in leaves of Lindera aggregata ．
Key words:leaves of Lindera aggregate (Sims)kosterm;quercetin;determination;HPLC
0 引言
乌药 Lindera aggregate (Sims)Kosterm．为樟科
(Lauraceae)山胡椒属(Lindera)植物，分布于江苏、
浙江、台湾、福建、广东等省，以浙江省天台县较为
著名，称天台乌药或天台药。乌药为常用中药材，
药典记载其根、茎、叶均可入药，而历代方书多用其
根，其叶的记述极少，但是近年来乌药叶的研究越
来越受到关注，乌药叶主要含槲皮苷、山萘酚等多
种黄酮类化合物［1］，黄酮类物质可以抗氧化、保护
四氯化碳致小鼠肝损伤［2］，乌药叶茶可以提高机体
的抗氧化能力［3］。乌药叶中的槲皮素可由槲皮苷
转化而来，在槲皮苷测定［4］的基础上，采用盐酸进
行水解，可使其中的槲皮苷转化成槲皮素。乌药叶
中本含有槲皮素，但是含量很低，经水解后，含量大
大提高。本研究采用液相色谱法测定乌药叶中槲
皮素的含量，为乌药叶的质量控制提供了检测依
据。
DOI:10.16255/j.cnki.ldxbz.2011.02.020
第 25 卷第 2 期 王 丽等:HPLC 测定乌药叶中槲皮素的含量
1 仪器、试剂与药品
Agilent1200 高 效 液 相 色 谱 仪;METTLER
AG135 电子分析天平(Switzerland);KQ － 500DE 型
数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司);TC
－ 15 套式恒温器(海宁市新华医疗器械厂);DGG
－ 9070B 型电热恒温鼓风干燥箱(上海森信实验仪
器有限公司)。
槲皮素对照品(批号:100081 － 200907，中国药
品生物制品检定所)。
水为超纯水，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分
析纯。
乌药叶采自浙江省台州市天台县，经浙江大学
生仪学院田景奎教授鉴定为 Liaggregate(Sims)Ko-
sterm．的干燥叶。
2 方法与结果
2. 1 系统适应性试验
色谱柱:ZORBAX ECLIPSE XDB-C18(150 mm
× 4. 6 mm，5 μm)，流 动 相:甲 醇:0. 4% 磷 酸
(50∶ 50)，流速 1. 0 mL /min，检测波长:360 nm，柱
温:30℃，进样量:10 μL。在此色谱条件下，槲皮素
与样品中其他成分能达到基线分离，分离度 ＞ 1. 5，
理论塔板数≥5000。见图 1。
表 1 加样回收率试验结果
取样量 / g 测得含量 /mg 对照品加入量 /mg 样品含量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD /%
0. 750 1 6. 601 3. 19 3. 406 100. 2
0. 750 2 6. 597 3. 19 3. 407 100. 0
0. 750 4 6. 575 3. 19 3. 406 99. 3 101. 0 2. 37
0. 750 1 6. 742 3. 19 3. 408 104. 5
0. 750 5 6. 602 3. 19 3. 408 100. 1
2. 2 对照品溶液的制备
取槲皮素对照品适量，精密称定，置 10 mL 容
量瓶中，用甲醇溶解并定容，制成 0. 129 mg /mL 的
溶液，即得。
2. 3 供试品溶液的制备
取乌药叶粉末(过 4 号筛)约 1. 5 g，精密称定，
置 50 mL 圆底烧瓶中，精密加入 70% 乙醇 25 mL，
精密称定，加热回流 90 min，放冷，再称定重量，
70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液 10
mL，加入圆底烧瓶内，精密加入 2. 5 mL 25% 的盐
酸，混匀，加热回流 1 h，待冷后，转移至 25 mL 容量
图 1 HPLC 方法系统适应性试验图谱
瓶中，用 70%乙醇定容至刻度，摇匀，即得。
2. 4 线性关系考察
分别取槲皮素对照品溶液 1、2、4、6、8、9、10 μL
进样，在相同条件下测定，以峰面积(A)对进样量 μg
(X)作线性回归，得回归线性方程:A = 5 365. 7X －
7. 6742，r2 ＞ 0. 9999，表 明 槲 皮 素 A 在 0. 129 ～
1. 29 μg内线性关系良好。
2. 5 精密度试验
取槲皮素对照品溶液，连续进样 6 次，测定峰
面积，RSD 为 0. 28%，表明精密度良好。
2. 6 稳定性试验
取对照品溶液，分别在 0、1、2、4、6、8、12 h 进样
2 μL，测定峰面积的 RSD 为 0. 65%，表明对照品溶
液在 12 h 内稳定。
2. 7 重复性试验
取乌药叶粉末 6 份，按“2. 3”方法处理，测定峰面
积，计算样品中平均含量为 0. 454%，RSD为 4. 2%。
2. 8 加样回收率试验
取已知含量的乌药叶样品粉末约 0. 75 g，平行
测 5 份，分别加入槲皮素对照品，按“2. 3”方法处
理，测定峰面积，计算加样回收率。结果见表 1。
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北京联合大学学报(自然科学版) 2011 年 6 月
2. 9 乌药叶样品的含量测定
分别取 3 批样品(批号为:100507、100709、
100905)，按本实验选定的色谱条件，测定其峰面
积，计算得 3 批乌药叶中槲皮素的含量分别为
0. 34%、0. 43%、0. 08%。
3 讨论
乌药叶中的槲皮素主要是由槲皮苷转化而来
的，如果不经过盐酸水解，槲皮素含量极低，水解
后，含量大大提高。
考察了水、甲醇和 70%乙醇对槲皮素含量的影
响，得出用 70%乙醇含量明显高于水和甲醇，乙醇
也比甲醇安全性更高;另比较超声跟回流的效果，
在 70%乙醇下，30、60、90 min 加热回流提取的含量
比超声提取的含量高。随着加热回流时间的延长，
含量也呈增加趋势，在 90 min 内效果最好。
不同产地和不同月份的乌药叶中槲皮素的含
量差别很大，5 月和 7 月采摘的比 9 月份采摘的含
量高;不同月份的乌药叶颜色也不一样，嫩绿的叶
子比焦黄的叶子中含量高，这样在不知道月份的情
况下，为乌药叶的直观选择提供了简单快捷的方
法。所建立的方法简便、快捷、准确，重现性好，为
乌药叶的质量评价提供了良好的依据。
［参考文献］
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249.
(责任编辑 柴智
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)
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弯曲，鳞茎组中的延胡索波状弯曲较为明显;垂周壁以刻叶紫堇、珠芽尖距紫堇及延胡索稍有弯曲，而黄
堇、夏天无及蛇果黄堇较平直。
［参考文献］
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(责任编辑 柴智)
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