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高山大黄的质量控制研究*
宋盼红1 费烨1 曾祖平2 彭冰2 闫兴丽3 陈静4 多杰仁青4 高增平1#
(1 北京中医药大学中药学院 北京 100102;2 北京中医研究所;
宋盼红，女，在读硕士生
# 通信作者:高增平，女，博士，教授，博士生导师，研究方向:中药有效物质基础及质量研究，E-mail:gaozp@ bucm． edu． cn
* 北京中医药大学自主选题(藏医药类)资助项目(No． 2013 － zyy － 02)
3 北京中医药大学基础医学院;4 西藏藏医学院)
摘要:目的 建立高山大黄药材的质量控制方法。方法 采用薄层色谱法，以白皮杉醇-4-O-β-D-
葡萄糖苷为对照品对高山大黄药材进行薄层鉴别。按照 2010 版《中国药典》附录 IX 方法对高山
大黄药材进行水分、总灰分及酸不溶灰分的测定。采用 HPLC法同时测定高山大黄中白皮杉醇-4-
O-β-D-葡萄糖苷和白藜芦醇-4-O-β-D-葡萄糖苷的含量。结果 10 批高山大黄中白皮杉醇-4-O-
β-D-葡萄糖苷在所建立的色谱条件下分离效果好，斑点清晰。10 批高山大黄药材的水分含量在
7. 46% ～9． 14%，总灰分含量在 2． 72% ～8． 75%，酸不溶灰分含量在 0． 50% ～ 2． 51%。10 批高山
大黄药材中白皮杉醇-4-O-β-D-葡萄糖苷的含量在 1． 768 ～ 70． 720 mg /L范围内呈良好的线性关系
(r = 0． 999 8)，加样回收率为 101． 11% (ＲSD = 0. 89%);白藜芦醇-4-O-β-D-葡萄糖苷的含量在
0. 416 ～ 16． 640 mg /L 的范围内呈良好的线性关系(r = 0． 999 6)，加样回收率为 99． 68% (ＲSD =
2. 54%)。结论 高山大黄药材的薄层鉴别方法和 HPLC含量测定方法简便、准确、重复性好，可作
为高山大黄药材的质量控制方法。
关键词:高山大黄;薄层鉴别;高效液相色谱法;含量测定
中图分类号:Ｒ284． 2 doi:10． 3969 / j． issn． 1006-2157． 2016． 01． 012
Establishment of quality control of Ｒheum nobile*
SONG Panhong1， FEI Ye1， ZENG Zuping2， PENG Bing2， YAN Xingli1， CHEN Jing3， DOＲ
Jerenchen4，GAO Zengping1#
(1 School of Chinese Materia Medica，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102;2 Bei-
jing Ｒesearch Institute of Traditional Chinese Medicine;3 College of Preclinical Medicine，Beijing Uni-
versity of Chinese Medicine;4 Tibet Traditional Medical College)
Abstract:Objective To explore the method to control the quality of Ｒheum nobile．，a widely used Tibet-
an herbal medicine． Methods The herb powder of ten batches of Ｒheum nobile was identified by thin
layer chromatography (TLC)with piceatannol-4-O-β-D-glucopyranoside as the reference substance，and
the moisture content，total ash and acid-insoluble ash were detected in accordance with Appendix IX of
Chinese Pharmacopoeia 2010 Edition． The contents of piceatannol-4-O-β-D-glucopyranoside and res-
veratrol-4-O-β-D-glucopyranoside were determined by using HPLC． Ｒesults The spots of piceatannol-
4-O-β-D-glucopyranoside of ten batches of Ｒheum nobile were clear and well separated． The range of
moisture content was from 7． 46% to 9． 14%，and that of total ash was 2． 72% to 8． 75%，and that of
acid-insoluble ash 0． 50% to 2． 51% ． The content of piceatannol-4-O-β-D -glucopyranoside was showed
a good linear relationship at the range of 1． 768 to 70． 720 mg /L (r = 0． 999 8)and the recovery rate was
101. 11% (ＲSD = 0． 89%) ，by parallel，that of resveratrol-4-O-β-D-glucopyranoside was showed a
16
第 39 卷第 1 期 2016 年 1 月
Vol． 39 No． 1 Jan． 2016
北京中医药大学学报
Journal of Beijing University of Traditional Chinese Medicine
good linear relationship at the range from 0． 416 to 16． 640 mg /L (r = 0． 999 6)and the recovery rate was
99． 68% (ＲSD =2． 54%)． Conclusion The methods of TLC and HPLC are simple，accurate and re-
peatable，which could be the option of the quality control of Ｒheum nobile．
Keywords:Ｒheum nobile;TLC identifation;HPLC;content determination
高山大黄是蓼科植物高山大黄(Ｒheum nobile
Hook． f． et Thoms)或西伯利亚蓼(Polygonum sibiri-
cum Laxm)的根和根茎［1 － 2］，为常用藏药。主产于
西藏喜马拉雅山麓及云南西北部［3］，因其淡黄色半
透明苞叶对包裹其中总状花序有类似温室的保温作
用而有“温室植物”之称，形似宝塔，别名塔黄［4］。
高山大黄性寒，味苦，具有散瘀消肿，泻热导滞的功
效。主治实热便秘、谵语发狂、湿热发黄、食积痞满、
闭经、痈肿疔毒［1］。至今关于高山大黄的化学成分
和质量控制的研究几乎为空白，本课题组对其进行
了化学成分和质量控制方法的研究。由于二苯乙烯
苷类成分是高山大黄的特征性成分，与其质量优劣
关系密切。因此，本文对高山大黄中二苯乙烯苷类
成分进行含量测定研究，建立了白藜芦醇-4-O-β-D-
葡萄糖苷和白皮杉醇-4-O-β-D-葡萄糖苷的 HPLC
含量测定方法，以及白藜芦醇-4-O-β-D-葡萄糖苷的
薄层色谱鉴别方法，并依据 2010 版《中华人民共和
国药典》［5］方法对 10 批高山大黄药材进行了水分、
总灰分和酸不溶灰分的测定，为建立高山大黄的质
量控制标准提供了科学依据。
1 材料
1． 1 仪器
分析天平(梅特勒 －托利多超越系列 XS-5，十
万分之一) ;电子天平(EＲ-182A，Tokyo Japan，万分
之一) ;超声波清洗仪(上海亚荣生化仪器厂) ;聚酰
胺薄膜(浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂) ;薄层
色谱成像仪(武汉药科新技术开发有限公司 YOKO-
ZS)。电热恒温水浴锅(金坛市杰瑞尔电器有限公
司) ;真空干燥箱(DZ-2BC II 天津市泰斯特仪器有
限公司) ;箱式电阻炉(天津市中环实验电炉有限公
司，SX2-2． 5-10)。1100 型高效液相色谱仪(美国
Agilent) ;八两高速中药粉碎机(浙江瑞安市百信药
机器械厂，LG-08A) ;SHZ-III 循环水式多用真空泵
(河南省巩义市英峪电子仪器厂)。
1． 2 试药
硅胶 G板，GF254板(青岛海洋化工厂) ;硅胶 G
板(烟台市化学工业研究所) ;甲醇(分析纯，北京化
学试剂公司) ;乙腈(色谱纯，Fisher 公司)。白皮杉
醇-4-O-β-D-葡萄糖苷对照品，白藜芦醇-4-O-β-D-
葡萄糖苷对照品(本课题组自制，纯度均 ＞ 98%)。
硝酸银溶液，稀盐酸溶液，高纯水(Milli-Q 超纯水系
统制备)。
1． 3 药材
10 批高山大黄均采自西藏林芝色季拉山脉，经
西藏藏医学院嘎乌教授鉴定为蓼科(Polygonaceae)
大黄属(Ｒheum)高山大黄 Ｒheum nobile Hook． f． et
Thoms。药材分别用 S1 ～ S10 表示 10 个批次，标本
保存在北京中医药大学中药学院中药化学系。
2 方法与结果
2． 1 薄层鉴别
2． 1． 1 供试品溶液的制备
称取 10 批高山大黄药材粉末(过 60 目筛)各
0． 3 g，置于 50 mL锥形瓶中，加 15 mL甲醇，超声提
取 30 min，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2． 1． 2 对照品溶液的制备
取白皮杉醇-4-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量，加
甲醇制成每 1 毫升含 3． 5 mg白皮杉醇-4-O-β-D-葡
萄糖苷的溶液，即为对照品溶液。
2． 1． 3 薄层色谱条件的选择
展开剂:分别考察了氯仿 －甲醇、乙酸乙酯 －丙
酮、正丁醇 －甲醇、氯仿 －正丁醇 －甲醇、氯仿 －乙
酸乙酯 －甲醇、石油醚 －甲酸甲酯 －甲酸、甲苯 －甲
醇 －丙酮等 14 个展开系统，结果以甲苯 －甲醇 －丙
酮(44∶ 25∶ 4)为展开剂展开，分离效果最好。
显色剂:分别考察了三氯化铁溶液，茴香醛溶
液，对二苯甲基溶液，硫酸乙醇溶液，5%香草醛硫酸
溶液，结果以 5%香草醛浓硫酸溶液显色效果最好。
薄层板:分别考察了硅胶 H 板，硅胶 GF254板，
聚酰胺板，不同厂家的硅胶 G 板，结果表明硅胶 H
板、硅胶 GF254板、青岛海洋硅胶 G板均可。
点样量:分别考察了 2、4、6、8、10、12、14、16
μL，结果表明点样 4 μL 时斑点清晰，分离度好，不
出现拖尾现象。
2． 1． 4 精密度、稳定性及重复性的考察
精密度:取同一份供试品溶液在同一块板上点
6 个点，同法展开显色，结果表明同板精密度良好;
取同一份供试品溶液点在不同板上，同法展开显色，
结果表明异板精密度良好。
26 北京中医药大学学报 第 39 卷
稳定性:取同一份供试品溶液放置 1 周，5、3、1
d，6、0 h后分别点样，结果表明供试品溶液 1 周之内
稳定性良好。
重复性:取同一批样品，平行操作制备 6 份供试
品溶液，点在同一块板上，同法展开显色，结果表明
该条件下进行高山大黄药材的薄层鉴别试验重复性
良好。
2． 1． 5 10 批样品的薄层鉴别
分别吸取供试品溶液及对照品溶液各 4 μL，点
于同一硅胶 G板上，以甲苯 －甲醇 －丙酮(44∶ 25∶
4)为展开剂，展开 8 cm，取出，晾干，喷以 5%香草醛
浓硫酸溶液，加热至斑点清晰。结果 10 批高山大黄
药材的供试品溶液色谱中，在与对照品相同的位置
上均显蓝紫色斑点，见图 1。
1 ～ 3 批次 S1 ～ S3;4 对照品;5 ～ 11 批次 S4 ～ S10。
1 ～ 3 Batch S1 ～ S3;4 reference;5 ～ 11 Batch S4 ～ S10．
图 1 10 批高山大黄药材的薄层鉴别色谱图
Fig． 1 TLC chromatograms of ten batches of Ｒheum nobile
2． 2 水分测定
按照 2010 版《中国药典》附录 IX H 项下水分
测定法中的第一法，测定并计算 10 批高山大黄水分
含量，结果显示 10 批高山大黄的水分在 7. 46% ～
9． 14%之间，结果见表 1。
2． 3 总灰分和酸不溶灰分的测定
按照 2010 版《中国药典》附录 IX K项下灰分测
定方法，测定并计算高山大黄灰分及酸不溶灰分。
结果显示 10 批高山大黄药材总灰分在 2． 72% ～
8． 45%之间，酸不溶灰分在 0． 50% ～ 2． 51%之间，
结果见表 2。
2． 4 HPLC含量测定
2． 4． 1 色谱条件及系统适应性试验
色谱柱:Kromasil 100 － 5PHENYL(4． 6 mm ×
250 mm，5 μm) ;流动相:乙腈 －水(85∶ 15) ;流速:1
mL /min;柱温:室温;进样量:10 μL;检测波长:304
nm。此条件下药材中的白皮杉醇-4-O-β-D-葡萄糖
苷和白藜芦醇-4-O-β-D-葡萄糖苷与其他成分均能
达到基线分离，见图 2。
表 1 高山大黄的水分测定结果
Table 1 Moisture content of ten batches of
Ｒheum nobile
批次
Batch No．
称样量
Sample (g)
水分
Moisture(%)
平均水分
Average moisture(%)
S1 2． 030 92． 040 0
7． 42
7． 50 7． 46
S2 2． 031 92． 033 5
8． 29
8． 05 8． 17
S3 2． 054 52． 074 3
7． 68
7． 67 7． 68
S4 2． 021 42． 027 8
9． 09
9． 18 9． 14
S5 2． 013 32． 026 1
7． 65
7． 78 7． 72
S6 2． 063 22． 045 3
8． 40
8． 41 8． 41
S7 2． 156 62． 118 1
8． 40
8． 28 8． 34
S8 2． 017 32． 017 4
8． 00
7． 98 7． 99
S9 2． 016 22． 017 3
8． 01
8． 14 8． 08
S10 2． 009 82． 010 5
8． 55
8． 67 8． 61
36第 1 期 宋盼红等 高山大黄的质量控制研究
表 2 高山大黄的总灰分和酸不溶灰分的测定结果
Table 2 Contents of total ash and acid － insoluble ash of ten batches of Ｒheum nobile
批次
Batch No．
称样量
Sample (g)
总灰分
Total ash (%)
平均总灰分
Average total
ash (%)
酸不溶灰分
Acid-insoluble
ash (%)
平均酸不溶灰分
Average of acid-insoluble
ash (%)
S1 3． 032 33． 062 0
5． 06
5． 14 5． 10
1． 59
1． 42 1． 51
S2 3． 006 43． 007 6
7． 74
7． 80 7． 77
1． 34
1． 37 1． 36
S3 3． 007 23． 009 4
2． 74
2． 70 2． 72
1． 41
1． 34 1． 38
S4 3． 415 13． 711 5
3． 64
3． 81 3． 73
0． 81
0． 80 0． 81
S5 3． 029 43． 022 0
4． 85
4． 96 4． 66
1． 38
1． 44 1． 41
S6 3． 012 93． 023 0
6． 05
6． 03 6． 04
1． 58
1． 65 1． 62
S7 3． 001 13． 002 0
5． 16
5． 24 5． 20
0． 51
0． 48 0． 50
S8 3． 003 03． 003 0
6． 14
6． 04 6． 09
1． 89
1． 83 1． 86
S9 3． 001 73． 000 9
8． 47
8． 43 8． 45
2． 52
2． 50 2． 51
S10 3． 039 33． 166 5
6． 11
6． 01 6． 06
1． 76
1． 79 1． 78
A 高山大黄药材;B 白皮杉醇-4-O-β-D-葡萄糖苷对照品;C
白藜芦醇-4-O-β-D-葡萄糖苷对照品;1 白皮杉醇-4-O-β-D-葡萄糖
苷;2 白藜芦醇-4-O-β-D-葡萄糖苷。
A test sample;B resveratrol-4-O-β-D-glucopyranoside reference;
C piceatannol-4-O-β-D-glucopyranoside reference;1 resveratrol-4-O-
β-D-glucopyranoside;2 piceatannol-4-O-β-D-glucopyranoside．
图 2 高山大黄药材 HPLC色谱图
Fig． 2 HPLC chromatograms of Ｒheum nobile
2． 4． 2 供试品溶液的制备
取高山大黄药材粉末(60 目)0． 3 g，精密称定，
置于 100 mL锥形瓶中，精密加入 45 mL 70%甲醇，
称定重量，回流提取 30 min，冷却至室温，称重，用
70%甲醇补足减失重量，摇匀。滤过，精密吸取续滤
液 1 mL置于 10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，
过 0． 45 μm滤膜，取续滤液作为供试品溶液。
2． 4． 3 对照品溶液的制备
精密称定白皮杉醇-4-O-β-D-葡萄糖苷和白藜
芦醇-4-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量，加甲醇制成浓
度分别为 0． 353 6、0． 041 6 g /L的对照品溶液。
2． 4． 4 线性及线性范围
分别精密量取白皮杉醇-4-O-β-D-葡萄糖苷对
照品溶液 0． 05、0． 10、0． 20、0． 60、0． 80、1． 00、2． 00
mL，置于 10 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，
得白皮杉醇-4-O-β-D-葡萄糖苷的浓度分别为
1. 768、3． 536、7. 072、21． 216、28． 288、35． 360、
70. 720 mg /L的溶液。以对照品溶液浓度为横坐标
(X) ，以色谱峰峰面积为纵坐标(Y)做标准曲线，得
回归方程为:Y = 27． 204X － 0． 256 8，r = 0． 999 8。
分别精密量取白藜芦醇-4-O-β-D-葡萄糖苷对
46 北京中医药大学学报 第 39 卷
照品溶液 0． 1、0． 4、0． 6、0． 8、1． 0、2． 0、4． 0 mL，置 10
mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得白藜芦醇-4-
O-β-D-葡萄糖苷的浓度分别为 0． 416、1． 664、
2. 496、3. 328、4． 160、8． 320、16． 640 mg /L。以对照
品溶液浓度为横坐标(X) ，以色谱峰峰面积为纵坐
标(Y)做标准曲线，得回归方程为:Y = 54． 121X －
0. 282 7，r = 0． 999 6。
结果表明:白皮杉醇-4-O-β-D-葡萄糖苷在
1. 768 ～ 70． 720 mg /L的范围内呈良好的线性关系;
白藜芦醇-4-O-β-D-葡萄糖苷在 0． 416 ～ 16． 640
mg /L 的范围内呈良好的线性关系。
2． 4． 5 精密度试验
取对照品溶液按照“2． 4． 1”项下色谱条件进
样，重复 6 次，测定白皮杉醇-4-O-β-D-葡萄糖苷和
白藜芦醇-4-O-β-D-葡萄糖苷的峰面积，峰面积的
ＲSD分别为 1． 29%和 1． 78%，表明仪器在该方法下
精密度良好。
2． 4． 6 稳定性试验
取同一供试品溶液，在常温下放置 0、1、2、4、6、
8 h 后分别进样 10 μL，测定白皮杉醇-4-O-β-D-葡
萄糖苷和白藜芦醇-4-O-β-D-葡萄糖苷的峰面积，峰
面积在 8 h内的 ＲSD分别为 1． 77%和 3． 88%，说明
供试品溶液在 8 h内基本稳定。
2． 4． 7 重复性试验
精密称取同一批高山大黄药材 6 份，按照
“2． 4． 2”项下方法制备供试品溶液，分别进样 10
μL，外标一点法测定白皮杉醇-4-O-β-D-葡萄糖苷
和白藜芦醇-4-O-β-D-葡萄糖苷的含量，平均含量分
别为 5． 64% 和 0． 34%，ＲSD 分别为 1． 16% 和 2．
24%，表明该方法重复性良好。
2． 4． 8 加样回收率试验
精密称取同一批高山大黄药材粉末 6 份，每份
约 0． 05 g，置于 50 mL 锥形瓶中，分别加入 0． 646 8
g /L白皮杉醇-4-O-β-D-葡萄糖苷溶液 3． 8 mL 及
0． 080 4 g /L白藜芦醇-4-O-β-D-葡萄糖苷 2． 2 mL，
按照“2． 4． 2”项下制备供试品溶液，分别进样 10
μL，测定，计算回收率，结果见表 3。
表 3 加样回收率试验结果
Table 3 Ｒecovery rate results
成分
Ingredient
称样量
Quantity of
sample (g)
样品中的量
Quantity of
sample(mg)
加入的量
Addition
quantity(mg)
总量
Total quantity
(mg)
回收率
Ｒecovery
rate(%)
平均回收率
Average recovery
rate(%)
ＲSD
(%)
白皮杉醇-4-O-β-D-葡
萄糖苷 Piceatannol-4-
O-β-D-glucopyranoside
白藜芦醇-4-O-β-D-葡
萄糖 苷 Ｒesveratrol-4-
O-β-D-glucopyranoside
0． 050 7 2． 595 2 2． 457 8 5． 091 5 101． 56
0． 050 5 2． 587 0 2． 457 8 5． 036 0 99． 64
0． 051 1 2． 616 7 2． 457 8 5． 111 8 101． 52
0． 049 3 2． 524 5 2． 457 8 4． 991 6 100． 38 101． 11 0． 89
0． 049 2 2． 521 4 2． 457 8 5． 029 5 102． 04
0． 049 7 2． 546 5 2． 457 8 5． 041 1 101． 49
0． 050 7 0． 172 6 0． 176 9 0． 350 4 100． 50
0． 050 5 0． 172 1 0． 176 9 0． 353 7 102． 72
0． 051 1 0． 174 0 0． 176 9 0． 350 7 99． 86
0． 049 3 0． 167 9 0． 176 9 0． 347 6 101． 59 99． 68 2． 54
0． 049 2 0． 167 7 0． 176 9 0． 339 9 97． 36
0． 049 7 0． 169 4 0． 176 9 0． 339 3 96． 06
2． 4． 9 样品的含量测定
取 10 批高山大黄药材粉末(60 目)各 3 份，每
份约 0． 3 g，精密称定，按“2． 4． 2”项下方法制备供
试品溶液，测定各色谱峰峰面积，外标一点法测定两
种待测成分的含量，结果见表 4。
3 讨论
在建立含量测定方法时，选择白皮杉醇-4-O-β-
D-葡萄糖苷和白藜芦醇-4-O-β-D-葡萄糖苷作为含
量测定的目标成分，是因为在本课题组进行化学成
分和指纹图谱研究时发现，高山大黄中二苯乙烯苷
类成分的含量远远高于大黄，尤其是白皮杉醇-4-O-
β-D-葡萄糖苷，因此本试验选择二苯乙烯苷类成分
作为含量测定的对象，而没有选择大黄属共有的蒽
醌类成分。另外，对提取溶剂、提取方法、提取时间
及流动相等方面也进行了考察，结果表明 70%的甲
醇提取液中 2 个化合物的含量最高，回流提取效果
56第 1 期 宋盼红等 高山大黄的质量控制研究
表 4 10 批高山大黄的含量测定结果(%;n = 3)
Table 4 Test results of ten batches of Ｒheum nobile
(%;n = 3)
批次
Batch
白皮杉醇-4-O-
β-D-葡萄糖苷
Piceatannol-4-O-β-D-
glucopyranoside
平均含量
Average content ＲSD
白藜芦醇-4-O-
β-D-葡萄糖苷
Ｒesveratrol-4-O-β-D-
glucopyranoside
平均含量
Average content ＲSD
S1 7． 66 0． 34 0． 38 1． 91
S2 8． 60 2． 51 0． 54 1． 09
S3 5． 64 0． 70 0． 34 1． 39
S4 10． 50 1． 69 0． 51 0． 41
S5 5． 29 1． 77 0． 29 2． 83
S6 9． 38 1． 15 0． 33 1． 36
S7 6． 62 1． 56 0． 36 2． 46
S8 5． 66 1． 80 0． 27 0． 90
S9 9． 52 1． 34 0． 62 0． 90
S10 6． 95 1． 70 0． 40 1． 30
优于超声，回流 30 min和 45 min及 1 h的提取效果
相似，均优于 15 min，因此选择了回流提取 30 min。
在流动相的选择方面，分别考察了甲醇 －水、乙腈 －
水和乙腈 － 0． 1%甲酸水，结果乙腈 －水(85:15)为
流动相时分离效果最好。
本试验建立了高山大黄药材的薄层鉴别方法和
药材中白皮杉醇-4-O-β-D-葡萄糖苷和白藜芦醇-4-
O-β-D-葡萄糖苷的 HPLC 含量测定方法，并检测了
10 批高山大黄药材的水分、灰分及酸不溶灰分的含
量，填补了高山大黄质量研究的空白，为高山大黄药
材质量标准的建立奠定了坚实的基础。
参考文献:
［1］国家中医药管理局《中华本草》编委会． 中华本草:藏药
卷［M］． 上海:上海科学技术出版社，1998:280．
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［5］国家药典委员会． 中华人民共和国药典:一部［M］．
2010 版．北京:中国医药科技出版社，2010．
(收稿日期:2015-05-29
檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪
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66 北京中医药大学学报 第 39 卷