全 文 ：树舌胞内粗多糖的提取及其抗炎活性研究
张凌凌 , 潘景芝 , 张文婷 , 王　琦
(吉林农业大学食药用菌教育部工程研究中心 , 长春 130118)
摘　要:采用正交试验设计 , 对微波辅助法提取树舌胞内多糖的工艺进行了优化;采用二甲苯致小鼠耳肿胀
模型 、角叉菜胶致小鼠足肿胀模型对多糖抗炎活性进行了研究。根据极差分析确定了微波辅助法的最优工艺
为微波处理 10 min、液料比 40∶1、提取 2 次。按此工艺多糖提取率为 24.92%, 多糖得率和含量分别为
188.3 mg/g 和 78.47%。抗炎活性试验结果表明:树舌胞内多糖高 、中 、低剂量组对二甲苯致小鼠耳肿胀有明
显的抑制作用 ,抑制率分别为 52.16%、37.80%、27.97%,与空白对照组均有极显著性差异(P<0.01);树舌胞
内多糖高 、中 、低剂量可显著抑制角叉菜胶致小鼠足肿胀 , 具有良好的抗炎作用。
关键词:树舌;胞内多糖;提取工艺;抗炎活性
中图分类号:R285.5;S567.31　　　文献标识码:A　　　文章编号:1672-3538(2010)02-0085-05
Extraction and Anti-Inflammatory Activity of Endo-Polysaccharide
from Ganoderma applanatum
ZHANG Ling-ling , PAN Jing-zhi , ZHANG Wen-ting , WANG Qi＊＊
(Engineering Research Center of Edible and Medicinal Fungi of Ministry of Education in China , Jilin A-
gricultural University , Changchun 130118 , China)
Abstract:In order to get the optima extraction technology and anti-inflammatory activity of endo-polysac-
charide from Ganoderma applanatum .Choosing several main influencing factors , microwave-assisted ex-
traction method was optimized by using orthogonal experiment , and the anti-inflammatory activity of endo-
polysaccharide from G.applanatum was observed with the xylene-induced swelling of ear and carrageen-
induced swelling of paw in mice.By analysis of range , the optimized condition of microwave-assised ex-
traction method:processing 10 min for twice , liquid/ solid ratio being 40 , the extraction rate was
24.92%, the yield and content of polysaccharide were 188.3 mg/g , 78.47%, respectively.It showed
that the effectiveness of microwave-assisted extraction method is the best for extracting endo-polysaccha-
ride from G.applanatum and the supersonic extraction method is better.Oral administration with endo-
polysaccharide from G.applanatum showed a significant inhibitory effect on xylene-induced swelling of
ear in mice (P <0.01)compared with control group.The inhibition rates of endo-polysaccharide were
52.16 , 37.80% and 27.97% at doses of 500 , 250 , and 125 mg/kg , respectively.It also showed an
obvious inhibitory effect on carrageen-induced swelling of paw in mice.So it was concluded that endo-
polysaccharide from G.applanatum obtained a prominent anti-inflammatory activity.
Key words:Ganoderma applanatum ;endo-polysaccharide;extraction process;anti-inflammatory activi-
ty
　　树舌[ Ganoderma applanatum (Pers.ex Gray.)
Pat]隶属于担子菌亚门(Basidiomycotina)、层菌纲
(Hymenomycetes)、灵芝目(Ganodermatales)、灵芝科
(Ganodermataceae)、灵芝属(Ganoderma)[ 1-2] , 学名

通讯作者:王琦 , E-mail:qwang2003@hotmail.com
作者简介:张凌凌 ,女 ,硕士研究生 ,研究方向:药用菌物。
收稿日期:2010-04-12　　
　第 8卷第 2 期 菌　物　研　究 Vol.8 No.2　
　2010 年 6月 Journal　of　Fungal　Research June 2010　
树舌灵芝 ,又称平盖灵芝 、老牛肝 、扁芝 、老母菌 、
枫树菌等[ 3] 。树舌性平 ,味淡 ,能祛风除湿 、清热 、
止痛 、止血 、化积化痰 。临床上常用树舌子实体治
疗急慢性肝炎 、食道癌 、胰腺癌 、消化道溃疡[ 4-5] 。
药理研究表明树舌具有调节免疫力 、抗肿瘤 、抗病
毒 、降血糖等多种药理活性[ 6-8] 。目前 ,对树舌的
研究多集中在抗癌方面 ,而对于树舌菌胞内多糖
的抗炎作用尚未见报道。本试验利用正交设计 ,
以多糖含量为指标 ,优化了树舌胞内多糖提取工
艺 ,并采用二甲苯致小鼠耳肿胀和角叉菜胶致小
鼠足肿胀模型考察了树舌胞内多糖抗炎活性 ,旨
在为其临床合理应用和进一步寻找抗炎作用的活
性成分提供参考依据 。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　树舌菌丝体　树舌菌种由吉林农业大学
药用菌研究室筛选保藏。通过深层发酵得到的菌
丝体再经过滤 、洗涤 、烘干获得干燥菌丝体。
1.1.2　实验动物　昆明种小鼠 , 雄性 ,体质量
(20±2)g ,6 周龄 ,购于长春生物制品研究所 ,合
格证编号:0006456。
1.1.3　主要仪器及试剂　T60 紫外分光光度计
(上海精胜科技), BCN-1360型生物洁净工作台
(北京东联哈尔仪器制造有限公司), RE-52AA
旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)。
吲哚美辛(临汾奇林药业有限公司 ,国药准字
H14020549),角叉菜胶(日本和光纯药工业株式会
社 ,批号为 ODG7176)。其余试剂均为国产分析
纯。
1.2　试验方法
1.2.1　微波辅助提取　采用正交试验设计[ 9] :
以微波提取时间 、液料比 、浸提次数为试验因素 ,
以粗多糖得率为指标 ,选用 L9(33)正交试验设计
(表 1)。
提取工艺[ 10] :取干燥至恒重的菌丝体 3 g ,轻
微研磨粉碎 ,按液料比加入一定量的水 ,置于微波
炉中 ,调节温度至中高温 ,计时提取。过滤 ,合并
提取液 ,移至量瓶中 ,加蒸馏水补充损失水分 。
1.2.2　多糖含量测定　采用苯酚 —硫酸法[ 11]测
定树舌胞内多糖含量 ,以葡萄糖制作标准曲线。
计算多糖含量及多糖提取率。
表 1　L9(33)正交试验因素水平表
Table 1.Factors and levels in test of orthogonal experiment
水平
Level
因素
Factor
提取时间/min
Ext raction
time
A
提取次数
Extraction times
B
液料比
Ratio of
liquid to
material
C
1
2
3
10
15
20
2
3
4
30∶1
40∶1
50∶1
多糖含量=[ (样品溶液中葡萄糖浓度×样品
稀释倍数)/样品干重] ×100%
多糖得率=[ (样品溶液中多糖含量×所得醇
沉产品干重)/菌丝体干重] ×100%
1.2.3　胞内多糖的制备　按照最佳工艺提取胞
内粗多糖。合并提取液 ,浓缩 , 加入 3倍体积的
95%乙醇 ,4℃冰箱过夜 , 3 000 r/min离心 10 min ,
收集醇沉物 。再依次用 75%乙醇 、无水乙醇和丙
酮滤洗 ,60℃恒温箱干燥 ,称重 ,计算多糖含量及
提取率。
1.2.4　树舌胞内多糖对二甲苯致小鼠耳肿胀的
影响试验　试验方法参照文献[ 12-13] 。取雄性
昆明小鼠 50只 ,随机分为 5组 ,即树舌胞内多糖
高(Ⅲ)、中(Ⅳ)、低(Ⅴ)剂量组(剂量分别为 500 ,
250 ,125 mg/kg)、阳性对照吲哚美辛组(10 mg/kg)
(Ⅱ)和空白对照生理盐水组(Ⅰ),每组 10只 。各
组小鼠灌胃给药 ,剂量均为20 mL/kg ,空白对照组
给予等体积的生理盐水。每 12 h给药 1次 ,连续
3次。末次给药后 30 min在小鼠左侧耳壳前后两
面均匀涂二甲苯 0.05 mL 致炎 ,右耳作自身对照。
致炎后 1 h ,小鼠脱臼致死。沿耳廓基线剪下两
耳 ,用 8 mm打孔器于同一部位分别打一个耳片 ,
分析天平称重 ,以两耳片重之差为肿胀度 ,计算肿
胀抑制率。分别取脾脏和胸腺称重 ,并计算脾脏
指数及胸腺指数。
抑制率=[(对照组平均肿胀度-给药组平均
肿胀度)/对照组平均肿胀度] ×100%;
脾脏指数=脾脏质量/体质量;
胸腺指数=胸腺质量/体质量 。
1.2.5　树舌胞内多糖对角叉菜胶致小鼠足肿胀
的影响试验　参照文献[ 14-15] ,分组及给药剂量
同本文“1.2.4” 。各组小鼠均于每日上午 9:00灌
86 菌　物　研　究 2010 年
胃给药 ,每天 1次 ,连续 3 d。末次给药后 30 min ,
在每只小鼠右侧足趾皮下注射 1%角叉菜胶
0.05 mL 致炎。致炎前及致炎后 1 ,2 , 4 ,6 ,24 h分
别用千分尺测量炎足厚度 ,以致炎前 、后鼠足厚度
之差为鼠足肿胀度。计算抑制率。取出脾脏和胸
腺称重 ,计算脾脏指数和胸腺指数 。
1.2.6　统计分析方法　用 SPSS12.0软件对试验
数据进行统计分析 ,试验结果用( x ±s)表示 。
2　结果与分析
2.1　微波辅助法最优工艺
由表 2 可知 , 3个因素对胞内多糖提取率的
影响提取次数(B)>液料比(C)>浸提时间(A)。
微波提取法的最佳工艺为 A2B1C2 , 即微波处理
10 min 、液料比 40∶1 、提取 2次 。在按此条件进行
提取 ,提取率为 24.92%。
表 2　微波提取 L9(33)正交试验结果
Table 2.Result of L9(33)orthogonal experiment by microwave
试验号
No.
因素 Factor
A B C
w(多糖)%
Polysaccharide
1 1 1 1 17.93
2 1 2 2 7.21
3 1 3 3 5.08
4 2 1 2 24.92
5 2 2 3 6.72
6 2 3 1 16.77
7 3 1 3 5.73
8 3 2 1 8.05
9 3 3 2 11.60
k1 10.07 16.19 14.25
k2 16.14 7.33 14.58
k3 8.46 11.15 5.84
R 7.68 8.87 8.73
最优工艺
Optimum process
A 2 B1 C2
2.2　树舌胞内多糖的含量
按照最佳工艺提取胞内粗多糖 。干燥后的多
糖颜色为棕黄色 。多糖得率为 188.3 mg/g ,多糖
含量为78.47%。
2.3　树舌胞内多糖对二甲苯致小鼠耳肿胀影响
表3中结果显示 ,树舌胞内多糖 3个剂量组
对小鼠耳肿胀有明显的抑制作用。与空白对照组
比较 ,肿胀度均显著性降低(P<0.01),耳肿胀抑
制率为吲哚美辛组>树舌胞内多糖高剂量组>树
舌胞内多糖中剂量组>树舌胞内多糖低剂量组。
表 3　树舌胞内多糖对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用
Table 3.Inhibitory effect of the endo-polysaccharide from G.applanatum on xylene-induced swelling of ear in mice
组别
Group
小鼠体质量/g
Weight
给药前
Before t reatment
给药后
After treatment
耳肿胀度/mm
Engorgement degree
抑制率/ %
Inhibition rate
Ⅰ 20.45±1.44 23.30±1.80 19.61±2.35
Ⅱ 20.15±1.62 21.40±1.31＊ 6.63±3.08＊＊ 66.21
Ⅲ 20.30±1.67 23.50±1.93 9.38±3.55＊＊ 52.16
Ⅳ 20.25±1.51 23.38±1.03 12.20±2.93＊＊ 37.80
Ⅴ 20.33±1.00 22.88±1.48 14.12±3.78＊＊ 27.97
　　注:与空白组比较 “ ＊” P<0.05 “ ＊＊” P<0.01,下同
Notes:Compared with control group “ ＊” P<0.05 “ ＊＊”P<0.01 , the same below
87　第 8卷　第 2 期 张凌凌等:树舌胞内粗多糖的提取及其抗炎活性研究
2.4　树舌胞内多糖对二甲苯致耳肿胀小鼠免疫
器官的影响
树舌胞内多糖对小鼠免疫器官的影响见表
4。
表 4　树舌胞内多糖对小鼠免疫器官的影响(n=10)
Table 4.Effect of endo-polysaccharide from G.applana-
tum on immune organ of mice mg/ g
组别
Group
脾脏指数
Thymus index
胸腺指数
Spleen index
Ⅰ 3.40±0.46 3.89±1.07
Ⅱ 2.37±0.52＊＊ 2.33±0.84＊＊
Ⅲ 4.03±0.61＊＊ 4.38±0.95
Ⅳ 3.83±0.95 3.98±0.83
Ⅴ 3.45±1.18 3.93±0.63
由表 4可见 ,与空白对照组比较 ,树舌胞内多
糖高剂量组的脾脏指数与空白对照组相比有极显
著提高(P <0.01),胸腺指数与空白对照组比较
也有提高 ,但差异不显著 。阳性对照吲哚美辛组
抗炎作用虽好 ,但对耳肿胀小鼠的脾脏和胸腺生
长有明显的抑制作用 。
2.5　树舌胞内多糖对角叉菜胶致小鼠足肿胀的
影响
表5中结果显示 ,树舌胞内多糖高 、中 、低剂
量组在角叉菜胶注射后 2 ～ 24 h 内可显著减轻小
鼠足肿胀程度 ,抑制作用随时间延长而增强 ,且作
用呈量效增长趋势 。高 、中剂量组在 2 h 后开始
有极显著减轻角叉菜胶致小鼠足肿胀的作用
(P<0.01)。
2.6　树舌胞内多糖对角叉菜胶致足肿胀小鼠体
质量及免疫器官的影响
由表 6可知 ,与空白对照组比较 ,树舌胞内多
糖给药组小鼠体质量和胸腺指数均有所提高 ,其
中高剂量组的脾脏指数呈极显著性差异(P <
0.01),但对脾脏指数未表现出显著的影响 。
表 5　树舌胞内多糖对角叉菜胶致小鼠足肿胀的抑制作用(n=10 x ±s)
Table 5.Inhibitory effect of endo-polysaccharide from G.applanatum on carrageen-induced swelling of paw in mice
组别
Group
致炎后时间/ h
Time of swelling
1
足肿胀度/mm
Engorgement
degree
抑制率/%
Inhibition
rate
2
足肿胀度/mm
Engorgement
degree
抑制率/%
Inhibition
rate
4
足肿胀度/mm
Engorgement
degree
抑制率/%
Inhibition
rate
6
足肿胀度/mm
Engorgement
degree
抑制率/%
Inhibition
rate
24
足肿胀度/mm
Engorgement
degree
抑制率/%
Inhibition
rate
Ⅰ 1.31±0.39 2.24±0.35 2.18±0.31 2.06±0.31 1.01±0.40
Ⅱ 0.93±0.35 28.81 1.41±0.26＊＊　36.92 1.16±0.44＊＊　46.61 0.81±0.43＊＊　60.99 0.39±0.18＊＊　61.44
Ⅲ 1.06±0.29 18.56 1.65±0.30＊＊ 26.50 1.38±0.31＊＊ 36.76 1.20±0.37＊＊ 41.76 0.48±0.09＊＊ 52.38
Ⅳ 1.16±0.30 11.42 1.85±0.35＊＊ 17.66 1.56±0.54＊ 28.40 1.31±0.45＊＊ 36.62 0.64±0.20 37.33
Ⅴ 1.21±0.27 7.35 2.01±0.20 10.13 1.80±0.12 17.15 1.59±0.36＊ 22.86 0.73±0.38 28.12
表 6　树舌胞外多糖小鼠体质量及免疫器官的影响(n=10)
Table 6.Effect of exo-polysaccharide from G.applanatum on weight and immune organ of mice
组别
Group
小鼠体质量/g
Weight
给药前
Before t reatment
给药后
After treatment
脾脏指数/(mg·g-1)
Thymus index
胸腺指数/(mg·g -1)
Spleen index
Ⅰ 19.56±1.63 23.43±1.56 4.12±1.22 3.23±0.87
Ⅱ 19.80±1.60 22.56±1.15 3.45±0.49 2.80±0.17
Ⅲ 19.80±1.83 23.64±1.41 4.31±0.60 4.77±1.05＊＊
Ⅳ 19.80±1.60 23.50±0.76 3.13±0.52 3.52±0.69
Ⅴ 19.50±1.60 23.57±1.30 3.12±0.41 3.34±0.71
88 菌　物　研　究 2010 年
3　讨　论
多糖是一种能够增强人体免疫功能的生物活
性物质 ,国际学术界称之为生物应答效应物 ,目前
已经成为分子生物学 、食品科学 、药学等领域中的
热点研究内容之一[ 16-17] 。多糖的提取技术目前
常用的主要有热水浸提法 、超声波法 、微波法以及
酶法提取。在对树舌多糖提取工艺的研究中 ,张
世杰[ 18]等利用正交试验探讨了树舌子实体水溶
性成分提取工艺 ,结果表明 ,将树舌粉碎成最大粒
径为 1 ～ 2 cm ,加水湿润(吃水量为原料质量的
2.5倍)过夜 ,加入 7倍于原料重的水 ,保持液面
高度 ,煎煮或回流 3 ,2 , 1 h 共 3 次效果最佳。林
天幕[ 19]以浸膏得率和葡聚多糖含量为考察指标
改进树舌提取工艺 ,其最佳提取工艺为煎煮液 pH
值为 11 、首次煎煮时间 90 min 、煎煮时间比为 3.0
∶2.0∶0.5 、加液量为 10倍 ,酸碱条件下提取浸膏
得率均比水提法好 ,正交试脸法提取葡聚多糖含
量更高。詹道松[ 20]以蒸馏水 、氢氧化钠 、草酸 、尿
素的水溶液为溶剂提取树舌子实体中多糖 ,结果
表明碱液提取率最高 。
微波提取技术具有高效 、节能 、操作简单等特
点 ,应用于多糖提取 ,可大大加快反应速度 ,有效
地提高得率。本试验采用正交法研究了微波辅助
法提取树舌胞内粗多糖的最优工艺 ,根据极差分
析和实验室实际情况确定了微波辅助法的最优工
艺为微波处理 10 min 、液料比 40∶1 、提取 2次 ,提
取率达 24.92%,多糖得率约 188.3 mg/g ,多糖含
量为 78.47%。
多糖具有多种药理活性 ,抗炎是其中之一。
侯安继[ 21]研究了茯苓多糖的抗炎作用 ,结果显示
茯苓多糖对棉球所致大鼠皮下肉芽肿形成有抑制
作用 ,同时小剂量也能抑制二甲苯所致的小鼠耳
肿。香菇多糖能抑制二甲苯所致的小鼠耳肿 、鸡
蛋清所致小鼠足跖肿胀 ,对滤纸片诱发小鼠肉芽
组织增生形成有抑制作用 ,表明香菇多糖具有一
定的抑制急慢性炎症反应作用[ 22] 。
树舌是一种具有多种生物活性的药用真菌 ,
不仅具有调节机体免疫力[ 23] 、抗肿瘤[ 24]等作用 ,
还对胃及十二指肠溃疡 、肝炎 、胃炎和肾炎有一定
的治疗作用 ,有抗炎疗效 。马述清[ 25]研究表明树
舌子实体粗多糖可对抗二甲苯所致小鼠耳肿胀 ,
抑制率为 24.5%。但关于树舌胞内多糖的抗炎
作用研究目前国内还未见报道 。本试验采用二甲
苯所致小鼠耳肿胀 、角叉菜胶所致小鼠足肿胀模
型研究了树舌胞内多糖的抗炎作用 。结果显示 ,
树舌胞内多糖能显著抑制二甲苯致小鼠耳肿胀 ,
高 、中 、低剂量抑制率分别为 52.16%、37.80%、
27.97%,具有明显的剂量效应关系;给药组的脾
脏指数和胸腺指数较空白组均有所提高 ,表明树
舌胞内多糖与子实体多糖具有相同的抑制二甲苯
致小鼠耳肿胀作用 ,且抑制作用优于子实体多糖 ,
提示两种多糖在结构上可能存在差异。树舌胞内
多糖在角叉菜胶注射后 2 h 可显著减轻小鼠足肿
胀程度 ,作用呈量效趋势 ,并在选定的时间内 ,抑
制作用随时间延长而增强;与空白对照组比较 ,给
药组体重和胸腺指数亦有所提高。这初步证明了
树舌胞内多糖具有一定的抗炎作用 ,在抗炎的同
时提高了机体的免疫力。树舌胞内多糖对其他炎
症是否有抑制作用以及其具体的抗炎机制有待于
进一步研究。
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102 菌　物　研　究 2010 年