全 文 ：《 中国海洋药物 》杂志 2 0 02年第 6期 ( 总第 9 0期 )2 0
管角螺肌肉中性糖蛋 白的化学组成及抗肿瘤活性研究
傅余强 , 顾谦群 , 刘赛 , 方 玉春
t中国海洋大学 海洋药物与食品研究所 , 山东 青岛 26 6 0 0 3)
摘 要 : 目的 :研究海洋软体动 物管角螺 H e m i fu su : t ub a (G m iel n) 肌肉中糖蛋 白的化学组成 、 理化性质及杭
肿瘤活性 。 方法 : 管角螺肌 肉用盐水浸提 , 水提取液再 经 D E A D ce l lu los e 、 eS p ha de x G 10 O 柱 层析分 离 , 冷冻
干煤得到 l 种中性糖蛋 白 ( N e u t r a l G l y e o p r o t e in o f H . t u b a , N G H )和 3 种酸性糖蛋 白 ( A e i d ie G ly e o p r o t e in o f
H
.
ut ba
,
A G H ) ; H P L C 时 N G H 进行 了 纯度检测及相 对分子质 量浏定 , 改 良的苯盼一浓硫酸和 F iol n 盼 法浏
总掩 、 总蛋 白质的含黄 , 气相色语法浏定糖 组成 , IR 和 N M R 法确 定糖 普健类 型 。 结 果 : N G H 为均一性组分 ,
相对分子质量为 7 . 6 x 10 , ,其 总糖含量为 89 . 6 % , 蛋 白质含量为 7 . 2 % ;糖 组成 分析表明 : 糖链部分主要由半
乳糖及少蚤 的甘露糖和菊萄糖组 成 , 其物质 的量比 为 23 . 5 , 2 . 6 , 1 . 0 ; lR 及 ` H N M R 语分析表明 : 其单糖残
墓为 二毗喃构型 。 初步药理 实验表明 : N G H 叶小 鼠 S 。。种 瘤 具有显著的抑制作用 。
关键词 : 管角螺 ; 糖蛋白 ;肿瘤抑制
中图分类号 : R 9 3 1 . 7 4 文献标识码 : A 文章编号 : 10 0 2一 3 4 6 1 ( 2 0 0 2 ) 0 6一 0 0 2 0一 0 5
S t u d y o n t h e C h e m i c a l C o m P o s i t i o n A n d A n t i t u m o r A c t i v i t y o f
N e u t ar l G l y e o P r o t e i n F r o m t h e M u s c l e o f H e m if u s u s t u b a
( G m e l i n )
F U Y u
一
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,
G U Q i a n
一
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,
L I U R u i
, e t a l
.
( M d r i n e oF
o d A n d D r u g I n s t i t u t e
,
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v e r s i t夕 O了 hC i n a , Q i n g d a o 2 6 6 0 0 3 , hC i n a )
A b s t acr
t : A im T o s t u d y t h e e h e m i e a l e o m p o s i t io n a n d a n t i t u m o r a e t i v i t y o f g ly e o p r o t e i n
f r o m m a r i n e m o l l u s k H
e m i f u s u s t u b a ( G m e l in )
.
M e t h o d s T h e m u s e l e o f H
.
t u ba w a s e x
-
t r a e t e d b y b o i l i n g s a l t s o l u t i o n
.
T h e a q u e o u s e x t r a e t w a s e h r o m a t o g r a p h e d o n D EA E
一 e e l l u
-
l o s e a n d S e p h a d e x G 1 0 o
e o l u m n s
, e l u t i n g w i t h w a t e r a n d s o d i u m e h l o r id e s o l u t io n t o y i e ld
n e u t r a l g l y e o P r o t e i n ( N G H ) a n d t h r e e a e i d i e g l y e o p r o t e i n s ( A G H )
, r e s p e e t iv e l y
.
T h e p u r i t y
a n d M w o f N G H w e r e d e t e r m i n e d b y H P I
团
C
,
t h e e o r l t e n t s o f s u g a r a n d P r o t e i n w e r e m e a s
-
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一 s u l f u r i e a e i d a n d f o l i n
一
p h e n o l m e t h o d s
.
S u g a r e o m P o n e n t w a s a n a
-
l y s e d b y G C
,
IR a n d N M R w e r e u s e d t o d e t e r m i n e t l i e e o n f i g u r a t i o n o f g l y e o s id i e b o n d o f
N G H
.
R e s u l t s N G H w a s h o m o g e n e o u s a n d M w w a s 7
.
6 6 又 10 5 . I t s s u g a r e h a i n w a s e o n s i s -
t e d o f g a la e t o s e w i t h a l i t t l e o f m a n n o s e a n d g l u e o s e
.
S u g a r c o n t e n t w a s 8 9
.
6 % a n d p r o t e i n
w a s 7
.
2 %
,
T h e m o n o s a e e h a r id e c o n f ig u r a t i o n w a s a
一
p y r a n o s id e
.
N G H s h o w e d t u m o r
一
in h ib i
-
t i o n a e t i v i t y i n v i v o o n 5
1。。 一
b e a r i n g m i e e
.
K e y w o dr s
:
H e m i f u s u s t u ba ( G m e l i n ) ; g l y e o p r o t e i n ; t u m o r i n h i b i t i o n
随着生命科学的进展 ,糖蛋白的重要生物
活性不断被揭示 ,其中海洋软体动物中糖蛋白
的显著抗癌活性已引起众多学者的关注 。 目
前已有报道证实从海洋软体动物海兔 、 虾夷扇
《中国海洋药物 》杂志 2 0 0 2年第 6期 (总第 90 期 )
贝和文蛤中提取的糖蛋 白具有明显的抑瘤作
用 L’ 一 `〕 ,本实验室在对我国北方沿海产的栉孔
扇贝进行研究时 , 发现其所含的糖蛋白对小 鼠
5
8。肿瘤有显著抑制作用 5j[ ;为 了寻找更好的
高效低毒的活性糖蛋白 ,探讨其结构与活性的
关系 ,本文对采 自青岛海域的软体动物管角螺
中性糖蛋白进行 了初步研究 。 管角螺 月〔少2刀 i -
fu .’u 、 t “ ba ( Gme iln )属盔螺科 ,产于中国近海 ,
可以食用 。 我们首次从管角螺肌肉中得到 1
种中性糖蛋 白 ( N e u t r a l G ly e o p r o t e ; ; 1 o f H . t u -
撇 , N G H )和 3 种酸性糖蛋 白 ( A e id i e G l y e o p r o 一
iet n of H
·
t u ba
,
A G H )
,并重点报道管角螺肌
肉中性糖蛋白的化学组成及对小鼠 5 1 8。肿瘤
的抑瘤活性 。
1 材料与方法
1
.
1 材料
1
.
1
.
1 原料
管角螺采 自青岛海域 , 经青 岛海洋大学
水产学院王昭萍老师鉴定为 H e机 if u 、 u 、 ut -
b a ( G rn e l i n )
。
1
.
1
,
2 仪器与试剂
W a t e r S 6 0 0 E 高效液相 色谱仪 , N IC ( ) -
I
J
E T N E X I JS 4 70 红 外 光 谱仪 , B E C M A N
D U 6 4 O 紫 外 光 谱 仪 , H EW L E T T P A C K -
A R D 5 8 9 0 气相色谱仪 , V ar i c an 核磁共振仪
( SO OM H
z , D Z O 作 溶 剂 ) ; D E A E一 e e l l u l o s e
( s i g m a )
,
S e p h a d e x G
一
] 0 0 ( P }、 a r m a e i a )
,
l厂鼠
李糖 、 仆甘露糖 、 仆半乳糖 、 肌醇 ( 上海 试剂
厂 ) ; I 才 ( 十 关阿拉伯 糖 、 D ( + ) 一葡 萄糖 ( 5 19 -
m a) ;仆木糖 ( M e r ck ) , 多糖相对分子质量分
布测定所用的标准 品为 T 系列 的 I ) e xt r a n
( p h a r ` n a 〔
·
i a )
,其余 试剂均为分析纯 。
1
.
1
.
3 动物 18 一 20 9 雌性 昆明种小鼠 , 青
岛市药检所提供 。
方法
.
1 管角螺糖蛋白的制备
从管角螺中剥离 出肌肉部分 39 0 9 置高
速组织 匀 浆机 内匀 浆 , 匀 浆 液用 10 % 的
N a (
’
l 溶液 1 5 o o m I J 在 8 。℃水浴上提取 3 次 ,
提取液离心 ,合并上清液 。 上清液分别用超
滤仪和透析袋浓缩 ,脱盐 。 再经 D E A E一纤维
素柱 ,用蒸馏水和 o一 2 . 0 m ol · I厂 ’ N a CI 溶
液线性洗脱 ,紫外检测出峰 , 波长 2 2o n m ,分
别得到 N G H 和 A G H 工 、 fl 、 班粗提物 。 将
N G H 通过 S e p h a d e x G 一 1 0 0 柱 , 进一步分离
纯化 ,冷冻干燥得到白色粉末困 。
1
.
2
.
2 H P I
一
C 法测纯度和相对分子质量
色谱条件 : 色谱柱 U l t r a h y d r o g e l xj l n e a r
B l e n d X Z
,流动相 : 0 . 1 rn o l · I J 一 ` N a N O 3 ,柱
温 : 4 5 C ,池温 : 3 7 ℃ ,流速 : 0 . 9 m l _ · 。 、 i n 一 ’ ,
进样 量 : 2 0川 J ; 先 测 出标 准 品 T 一2 0 0 0 , T
1 0
,
T
一
8。 , T 一 7 0 , T 一 4 0 和 T 一 2 0 等系列葡聚糖
的保 留时间 , 以公式 K va 一 ( V e 一 V 。 ) (/ V t 一
V 。 )计算出对应 的 K va , 然后 以 l o g M w 一 K a v
作图得标准曲线 ,求得样品的相对分子质量 。
1
.
2
.
3 紫外光谱和红外光谱分析
将 10 m g 样 品溶于 3m L 蒸 馏水 中 , 在
1 9 0一 S OO m m 间紫外扫描 。 红外光谱测定采
用澳化钾压 片法 , 在 4 0 ~ 4 0 0 o c m 一 ` 之间扫
描 [ , 、 8」。
1
.
2
.
4 蛋白质含量测定
采用 F ol il 一酚法 0[] , 以 牛血清蛋 白为标
准作标准曲线 , 牛血清蛋白用凯氏定氮法测
定蛋 白质的含量 。
1
.
2
.
5 糖含量测定
采用改 良的苯酚一硫酸法 f ’ “ 1 。
1
.
2
.
6 糖组成分析
N G H 10 m g 加 2 m ol · L ` 三 氟 乙 酸
( T F A )1
.
s rln
创 ,封管后在 1 10 ℃水解 3 h ,冷却
后减压抽去 T F A , 用纸色谱 ( P C ) 法检测水
解产物 ,展开剂为乙 酸乙酷 一毗喧 一醋酸 一水 (弓
, 5 , 1 , 3)
,苯胺一邻苯二甲酸试剂显色 。 剩
余样品用 N a B H 4 还原 ,反复加 M e( ) H , 减压
抽干 以 除去硼 酸根 , 经 P : 0 5 二F 燥后 加 1 .
s m l
洲 毗呢 一乙酸酉「( 1 , l )于 1 ()O C反应 Z h , 加
压除去过量试 剂 , 所得 乙 酞化衍 生物 溶于
《中国海洋药物 》杂志 2 0 0 2 年第 6期 (总第 90 期 )
C H C I
。 , 气相色谱 ( G C )分析 [ ” 〕 。
1
.
2
.
7 核磁共振 ( N M R )分析
用重水 ( D Z O ) 作溶剂 , 进行核磁共振氢
谱分析 [ , 2: 。
1
.
2
.
8 抗肿瘤活性实验 la[ 」
昆明种小鼠 40 只 , 随机分成 5 组 , 每组
8 只 , 除空白组外 ,其余小鼠均在右腋下接种
5
1 , 。 瘤 株 。 治 疗 组 分 别 给 药 2 0 、 4 0
m g
·
k g
一 ` , 空白组和模型组注射生理 盐水 ,
对照组注射环磷酸胺 20 m g · k g 一 ` 。 从接种
肿瘤后第 2 天开始腹 腔注射给药 , 连续给药
d7
,停药后隔 日处死小 鼠 , 剥取瘤块 、脾 和胸
腺称重 ,计算抑瘤率 、 脾指数和胸腺指数 。 统
计结果做 t 检验 。
2 结果与讨论
2
.
1 管角螺 中性糖蛋白 的化学组成及理化
性质
2
.
1
.
1 样品制备
管角螺糖蛋白的提取分离纯化流程如图
1所示 。 用蒸 馏水洗脱 D E A E 一纤维 素柱得
到一较纯的单峰 (图 2 ) ,再通过 S eP h ad e x G
1 0 0 柱 进一 步 纯 化 , 冷 冻 干燥 得 N G H .6
9 7 9
, 得率 1 . 74 % 。 糖 蛋 白的提取 受温 度 、
p H 值和盐浓度等因素 的影响较大 。 本实验
采用 8 0℃ 、 10 % N a C I溶液浸提具有较高的
产率 。
Mu s e l e o f 双 t口如
{
h o . o g e n i 冬 e d
e x t ar
e t e d b y l叽 NaC I s o l u t i o n i n h o t b a t h , t h r e e t i . e s
e e n t r i f u g a t i o n
P r e C i p i t 妞t e S U P e r D a t e n t
口 e m b r a n e s u p e r f i l t e r , d i a l y z e d
DEAE一 e e l l u l o s e e o l u m n e l U t i o n
f o r 2 4 h
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Se p h a d e x G
一 10 0 v o l u口 n e l u t i o n b y w a t e r
Me爪 b r a n e s u Pe r f i l t e r , d i a l y z e d f o r 2 4 h
F r e e z e d d r i e d t o OP
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甘h 1 t e P o’ d e r
F i g l P er p a ar t i
o n o f N G H
,
A G H
,
A G H 1 a n d A G H I
2
.
1
.
2 纯度和相对分子质量检测 ( 图 4 ) ; 红外 光谱在 4 0 , 一 4 0 0 0 c m 一 ` 扫描 ,
H P L C 检测为分布均匀 的单一峰 , 流出 N G H 显示具有糖蛋 白的一般特征吸收 (图
谱图如图 3 所示 ,对照标准 曲线测得 N G H S ) , I R 谱图中 , 在 3 4 2 0 C m ’ 附近有强吸收 ,
相对分子质量为 7 6 , 7 4 0 。 示有一 O H 的 0 一 H 键伸缩振动 , 2 9 3 0 c m 一 `
标准曲线 : I召M w - 一 0 . 4 59 R T + 1 3 . 01 2 附近有中强吸收 , 示有 C一 H 键 的伸缩振 动 ,
R
Z一 0 . 9 9 8 4 。 1 6 4 0 C m 一 `附近有强吸收 ,示有酞胺键的 C -
2
.
1
.
3 紫外光谱和红外光谱分析 0 键伸缩及 N 一 H 键 的变角 振动 。 N G H 在
I JV 分析 N G H 在 Zo o n m 附近为强吸收 1 1 5 4 C m 一 ` , 10 8 2 Cm 一 ` , 1 0 2 4 c m 一 ’ 处还有 3
《中国海洋药物 》杂志 20 0 2年第 6期 (总第 09 期 )
iF g 2 D E A E- ele l u l os e E l
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F ig 6 G C sP ce t r u m o f NG H
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c t r u m o f N G H
个强吸收峰提示组成的单糖可能为毗喃环结
构 ;在 8 5 1 c m 一 ` 有吸收峰 ,在 8 9 0 。 m 一 ` 附近
无吸收峰 ,示多糖以 a 一糖昔键连接 。
2
.
1
.
4 蛋白质 、 糖含量测定
对照糖及蛋白质含量的标准 曲线 , 计算
出 N G H 的蛋 白质含量 为 7 . 2% , 糖含量 为
8 9
.
6%
。
N G H 主要 由糖组成 , 含有少量 的
F i g 7 G C s p
e e tur m
o f 7 s ta n d a r d m on 储 ac c h a r o ` e
1 R h
a , 2 A r a
,
3 X y l
,
4 M a n
,
5 G le
,
6 G
a
l
,
7 I n o s i t o l
.
蛋白质 。
2
.
1
.
5 糖组成分析
N G H 经气相色谱分析 , 与标准糖的谱
图进行对照 , N G H 的糖链部分 主要由半乳
糖组成 ,另外 还含有少量甘露糖和葡萄糖 。
对照峰面积计算其摩尔比为 2 3 . 5 : 2 , 6 : 1 .
O
,结果如图 6 、 7 所示 。
2
.
1
.
6 ` H N M R 分析
N G H 的 ’ H N M R 谱中 , 可见到半乳糖端
基质子信号为 翁 . 36 0 ; 甘露糖端基质子信号
为 台5 . 18 5 。 在糖 的’ H N M R 谱中 , 端基质子
信号在 翁 . 0 以下的一般为 汗构型 , 在 翁 . 0
以上的一般为 a 一构型 , 与文献对照推断半乳
糖和甘露糖残基为 a 一毗喃型 , 与红外光谱分
析一致 。 半乳糖端基质子信号强度远大于甘
露糖端基质子信号 , 与其含量大小有关 , 葡萄
糖端基质子信号未能检测出可能是因为含量
太低 。 其它氢的信号堆积在一起 ,难以归属 。
2
.
1
,
7 N G H 抗肿瘤活性
对 N G H 进行体 内抗肿瘤活性实 验 , 实
验结果见表 1 。
《中国海洋药物 》杂志 2 2 0 0年第 6 期 (总第 9 0期 )
由表 1可 以看 出 , N G H 在低 剂 量 ( 20
m g
·
k g
一 `
) 有 显 著 的 抑瘤 作 用 , 抑 瘤率为
51
.
0 %
,作用强弱与环磷酞胺相似 , 而在高剂
量时抑瘤效果 明显降低 。 近年研 究表明 , 多
糖及以多糖为主的一类药物是肿瘤抑制剂 ,
具有免疫调节作用 , 它一般是通过提高机体
的免疫功能而发挥抑瘤作 用 , 这类物质在机
体内往往起双向调节作用 , 其作用强弱与剂
量大小不呈线性关系 , 而存在 1 个最佳抑瘤
剂量 , N G H 的最佳抑 瘤剂量及其作用 机理
有待进一步深入研究 。
T a b l A n t i t u m o r e fe
c st o f N G H o n 5 1 5。 m ie e ( x 士 s )
组别 剂量
(拜 g · g 一 ` )
空 白
模型
对照
N G H
N G H
体重变化 ( g) 瘤重 ( g ) 抑瘤率写
十 2 , O
+ 3
.
7 1
.
4 2士 0 . 4 7
+ 1
.
6 0
.
6 1土 0 . 2 0 ` ’ 5 7 . 0
斗一 3 . 9 0 . 6 9士 0 . 1 9 ` ’ 5 1 . 0
+ 3
.
4 1
.
1 4土 0 . 2 5 1 9 . 7
脾指数 胸腺指数
m g
·
1 0 9 一 1 m g
·
1 0 9 1
7 6
.
1 士 7 . 2 3 5 . 1士 6 . 3
1 2 2
.
5士 2 7 . 8 2 7 . 0 士 9 . 9
7 8
.
0 士 9 . 7 1 7 . 0 士 2 . 0
9 3
.
8 土 1 2 . 0 2 4 . 2 士 6 . 8
1 2 1
.
9 士 2 3 . 7 2 3 . 9士 5 . 0
0
O六ú9山庄二
注 : , , 尸 < 0 . o l v 、 模型组
糖蛋白广泛存在于 自然界 中 , 是一类具
有多种生物活性的大分子 , 它在结构上主要
由蛋白质和糖以糖昔键连接 。 近年来随着细
胞生物学和分子生物学的发展 , 科学家们发
现糖类化合物特别是糖复合物中的糖链参与
了各种生命现象的调节 , 如细胞识别 、 信号传
导 、 免疫与应答 、 细胞转化 、 分化和反分化等
都与糖链的作用有关 , 糖蛋 白的许多功能也
是在糖链 的参与下完成的 , 在有的情况下糖
链的作用甚至更直接 、 更突 出 。 我们 的研究
表明管角螺肌 肉中的中性糖蛋 白具有肿瘤抑
制活性 , N G H 分子 中糖链 占主要部分 , 该糖
链是 由半乳糖及少量甘露糖 和葡萄糖组成 ,
推测 N G H 的活性主要是由其糖链部分引起
的 ,对其糖链结构及其活性关 系 目前正在深
人研究 中 。
参考文献
〔l 〕 K a m jy a H . S t u d i e 。 。 n bi o a e t i v 。 m a r i n e m e t a b o l i t e s 一
福 e h a r a e t e r i z a t i o n o f t h e a n t ib a e t e r i a l a n d a n t i n e o p l a s t i e
9 ly e o p r o t e i n i n a s e a h a r e A P I夕s i a 少 u l i a n a 巨J ] . N I P P o n s u -
i s a n 6
a
k ka i劝 i , 1 98 8 , 54 ( 5 ) : 7 3 7 .
〔2〕 K i s it g i J . B i o p o ly m e r s f r o m m a r i n e i n v e r t o b r a t e , X .
m o d e o f a e t io n o f a n a n t ib a e t e r i a l g ly e o p r o t e i n
, a p l y
s i a 一l i r -
E
,
f
r o m e g g s o f a s e a h a r e
,
A p z夕 , i a 走。 or j a z [ J」. hC 己斑 .
P h a r m
.
B u l l二 1 98 9 . 37 ( 1 1) : 3 0 5 0 .
仁3三 T o k u n ,。 5 . A n z i t u m o r a e t i v i , y a n d i m m u n o m o d u ]a t o -
r y e f f e
e r o f g ly e o p r o t e i n f r a e t i o n f r o m s e a l lo p P a t i o n P e
c t e n
夕叼 、 、 o 尸 n s i , [ J〕. N : P P o n 、 u i: a n G a k k a葱sh i , 1 9 8 7 , 5 3 ( 2 ) :
2 6 7
-
「/几 黄庆 文 ,陈芳进 . 海洋 贝类 活性物 质的研究概况及进
展〔A」. 中国第五届海洋湖沼药物学术开 发研讨会 ( 上册 )
仁C〕 , 1 9 9 8 : 2 2 5 .
[ 5卫 顾谦群 , 方玉春 . 扇贝糖蛋 白的化学组成与抗肿瘤活
性的研究 [ A」. 中国第五届海 洋湖沼药 物学术 开发研讨会
( 中册 ) 〔C〕 , 1 9 9 8 , 34 .
[ 6〕 刘京丽 , 王叔茹 ` 九里香多糖和蛋 白多糖的分离 、 纯 化
和分析 [ J〕. 生物化学杂志 , 19 8 9 , 5 ( l ) : 3 3 .
〔7」 王仲孚 , 彭志英 . 钝顶螺旋 藻糖缀合物 S P P A 一 l 的理
化性质及活性的研 究仁J〕. 药学学报 , 2 0 0 1 , 3 6 ( 2 ) : 1 12 .
〔8口 黄琳娟 ,林颖 . 构祀子中免疫活性成分的分离 、 纯化及
物理化学性质 的研究仁J〕 . 药学学报 , 1 9 95 , 33 ( 7 ) : 5 1 2 .
[ 9〕 一李建武 , 萧能赓 . 生 物化学 实验 原理 和方法 〔M 〕. 北
京 : 北京大学出版社 , 1 9 7 : 1 6 .8
获1() 」 董群 , 郑丽伊 . 改 良的苯酚一 硫酸法测定多糖和寡糖
含量的研究〔J」. 中国药学杂志 , 19 96 , 3 1 ( 9 ) : 5 5 0 .
[ 1 1〕 张惟杰 . 糖复合物生化研 究技术 [ M」. 浙江 : 浙 江大
学出版社 . ] 9 94 : 63 .
[ 12」姚新生 . 天然 药物化 学 仁M 」. 北 京 : 人民卫 生 出版社 ,
1 9 9 7 : 1 0 3
.
[ 1 3〕徐叔云 ,卞如谏 . 药理实验方法学仁M」. 北京 : 人 民卫生
出版社 , 1 9 9 4 : 14 23 .
(收稿 日期 : 2 0 0 2 一 0 1一 1 2 )