免费文献传递   相关文献

无患子组织培养研究



全 文 :山 地农 业生 物学 报 24(2):119 ~ 123, 2005
Journal of Mountain Agriculture and Biology
无患子组织培养研究**
张凤龙
(重庆三峡职业学院 , 重庆 万州 404001)
摘 要:采用无患子 SapindusmukorossiGaerth成年结果母树上的越冬芽 、半木质化春 、夏梢嫩茎芽 、叶切块为外
植体 , 在含 BA、NAA、 2, 4-D、IBA、KT不同浓度及其配比的 MS培养基上进行芽的诱导。结果表明 , 剥除鳞片的
越冬芽是无患子快速繁殖最理想的外植体。无患子越冬芽萌发的适宜培养基为:MS+BA1.5mg· L-1 +NAA
0.2mg· L-1;春 、夏梢芽萌发的适宜培养基为:MS+BA4.0mg· L-1 +NAA0.3mg· L-1;春 、夏梢芽切块形成
愈伤组织的适宜培养基为:MS+2, 4-D1.5mg· L-1 +BA0.2mg· L-1;无患子愈伤组织诱导萌芽的适宜培养
基为:MS+BA3.0mg· L-1 +NAA0.2mg· L-1 +KT0.2mg· L-1;适宜的幼苗增殖培养基为:MS+BA1.0
mg· L-1 +IBA0.02mg· L-1;适宜的小苗生根培养基为:1/2 MS+NAA0.5mg· L-1 +IBA0.1mg· L-1。
关键词:无患子;组织培养;稍芽萌发;幼苗增殖
中图分类号:Q949.755.502  文献标识码:A  文章编号:1008-0457(2005)02-0119-05
Studyontissuecultureforsoapberry
ZHANGFeng-long(ChongqingThreeGorgesVocationalColege, ChongqingWanzhou404001, China)
Abstract:Withthesurmount-winterbuds, delicatecaulisbudoftreebranchinspringandsummerwithhalflignification
andbladeleafthatwerepickedupfromadultfemaletreeofsoapberryasexplantsthetenderbudswereinducedonMS
mediumwhichcontaineddifferentconcentrationandratioofBA, NAA, 2, 4-D, IBAandKT.Theresultsindicatedthat
thebestexplantwasthesurmount-winterbudwhosescaleswerepeeledforrapidpropagation.Forsoapbery, thesuitable
mediumforinducingsurmount-winterbudwasMSwith1.5mg· L-1 BAand0.2mg· L-1 NAA.Thesuitablemedium
forinducingbudoftreebranchinspringandsummerwasMSwith4.0mg· L-1 BAand0.3mg· L-1 NA, Thesuitable
mediumforinducingformationofcalusofbladeforspringbudandsummerbudwasMSwith1.5mg· L-1 2, 4-Dand
0.2mg· L-1 BA.ThesuitablemediumforinducingcallusgerminationwasMSwith3.0mg· L-1 BA, 0.2mg· L-1
NAAand0.2mg· L-1 KT.ThesuitablemediumforproliferationwasMSwith1.0mg· L-1 BAand0.02mg· L-1 IBA,
andthesuitablemediumforrootagewas1/2 MSwith0.5mg· L-1 NAAand0.1mg· L-1 IBA.
Keywords:soapberry;tissueculture;branchbudgermination;proliferation
无患子 ,又名油患子 SapindusmukorosiGaerth,为无患子科无患子属植物 ,是一种野生落叶乔木 ,集洗
涤 、药用 、水土保持 、环保等多种用途于一身 ,广泛分布于长江流域以南地区 。无患子无论是作为园林树种
或经济林树种 ,其栽植前景十分广阔 。张凤龙等[ 1]于 2003年对无患子种子萌发情况调查及人工催芽处理
试验 ,发现无患子种子在自然条件下虫蛀率达 60%~ 70%,其萌芽率为 8.9%,在长江流域几十年的无患子
母树周围 ,尽管母树年年结果 ,但难见其幼苗生长。范军科等 [ 2]对无患子种子进行沙藏层积处理后发芽
率为 60%~ 70%。作为人工栽培 ,探索其种子繁殖方法之外的其他方法十分必要。目前 ,木本植物组织培
养比草本植物难 [ 3, 4] ,人们对无患子科的龙眼 、荔枝 、红毛丹 、文冠果等的组织培养进行过研究 [ 5, 6] ,但尚未
见到对无患子的组织培养研究的报道 。为此 ,笔者于 2003 ~ 2004年利用其越冬芽 、半木质化春 、夏梢嫩茎
芽 、叶切块为外植体在各种不同培养基上进行萌发试验 ,经扩繁 、壮苗后转入生根培养 ,初步建立了无患子
* 收稿日期:2005-01-18;修回日期:2005-03-10
基金项目:重庆市万州区重点科技资助项目(2003102)
作者简介:张凤龙(1965-),女 ,重庆万州人 ,重庆三峡职业学院实验师 ,从事植物组织培养教学 、科研工作。
的微繁体系 ,现将结果报道如下:
1 材料与方法
1.1 外植体来源及处理
本试验所用材料采自万州区武陵镇长江北岸一成年结果母树上的越冬芽 、半木质化的春 、夏梢。先经
洗衣粉浸洗后用流水冲洗 1 ~ 2h,再用 75%的酒精浸泡 30s后 ,用 0.1%升汞溶液浸泡 15min,最后以无菌
水冲洗 4次 ,吸干表面水分 ,再接种。
1.2 外植体接种方式
2月上 、中旬所采集的未萌发越冬芽将其切下竖直插入培养基中 ,芽外层鳞片剥去或不剥 ,或直接剪
成 1 ~ 2cm长的带芽茎段接入培养基;春 、夏梢接种带芽茎段;愈伤组织诱导采用茎段 、嫩叶切块 、带有韧
皮部的芽切块。
1.3 培养基及培养条件
越冬芽萌发培养基:MS+BA(0.5mg· L-1 , 1.5mg· L-1 , 2.5mg· L-1 , 4.0mg· L-1)+NAA(0.2
mg·L-1 +0.3mg· L-1 +0.5mg· L-1);春 、夏梢嫩茎段萌发培养基:MS+BA(2.0mg· L-1 , 3.0
mg·L-1 , 4.0mg·L-1 , 5.0mg· L-1)+NAA(0.1mg·L-1 , 0.3mg·L-1 , 0.5mg· L-1);愈伤组织诱导培养
基:MS+2, 4-D(0.5mg·L-1 , 1.0mg· L-1 , 1.5mg· L-1 , 2.0mg·L-1)+BA(0.1mg·L-1 , 0.2mg· L-1 ,
0.4mg· L-1);愈伤组织诱导芽萌发培养基:MS+BA(1.0mg· L-1 , 2.0mg· L-1 , 3.0mg· L-1 , 5.0
mg·L-1)+NAA(0.05mg· L-1 , 0.1mg· L-1 , 0.2mg· L-1)或附加 KT0.2mg· L-1;芽增殖培养基:MS
+BA(0.5mg·L-1 , 1.0mg·L-1 , 2.0mg· L-1)+IBA(0mg· L-1 , 0.05mg· L-1 , 0.1mg· L-1);壮苗培养
基:MS +BA(0.4mg· L-1 , 0.6mg· L-1 , 1.0mg· L-1)+ NAA(0.05mg· L-1 , 0.1mg· L-1 , 0.2
mg·L-1);生根培养基:1/2 MS+IBA(0mg· L-1 , 0.2mg· L-1 , 0.5mg· L-1 , 1.0mg· L-1 )或附加 IBA
0.05mg·L-1。以上植物生长调节剂的组合配比采用正交试验或单因子试验设计 ,蔗糖 30g· L-1 ,琼脂
7g· L-1;培养温度 22 ~ 26℃,湿度 60%~ 70%,光强度 1 500 ~ 2 000lx,日照时间 12h。
1.4 培养过程
外植体接种后立即统计接种方式 、接种数 ,培养 7d后及时观察 ,记载 ,淘汰被感染的培养瓶;愈伤组织
形成后转入芽诱导培养基 ,待萌芽长至 2 ~ 3cm时及时转到增殖培养基上 ,增殖培养所得的小苗再经壮苗
培养或直接进入生根培养即得完整的小植株。
2 结果与分析
2.1 外植体的不同接种方式萌发情况比较
外植体经消毒后接入萌芽培养基或愈伤组织诱导培养基中 ,可有带芽茎段 ,带韧皮部的芽切片 ,叶切
块 ,亦即越冬芽剥去或保留外层鳞片等接种方式 ,其萌发情况见表 1。
表 1 无患子不同外植体的萌芽情况
Tab.1 Thegerminationofdiferentexplantsinsoapberry
外植体 处 理 方 式 接入总数(个)
污染率
(%)
萌发率
(%)
愈伤组织诱导率
(%) 操作难易度
开 始
萌发时间 生长情况
剥 去 鳞 片 72 52.78 93.06 较难 最短 极佳
越冬芽 不 剥 鳞 片 67 79.10 74.63 易 短 一般
带 芽 茎 段 96 91.67 81.25 最易 短 一般
带 芽 茎 段 329 58.36 50.46 36.47 最易 长 较弱
春夏梢 带韧皮部芽切块 235 46.38 66.81 59.15 较难 短 较弱
叶 切 块 83 87.95 20.48 易 长 极弱
注:表中的萌发率及愈伤组织诱导率是淘汰已感染的培养瓶数后已萌发接种瓶数与未感染瓶数之比;带芽茎段均不剥除鳞片 ,带芽茎段的
接入总数 329个 ,其中 206个接入萌芽培养基 , 123个接入愈伤组织诱导培养基;带韧皮部芽切块接入总数 235个 ,其中 76个接入萌芽培养
基 , 159个接入愈伤组织培养基。
120 山 地 农 业 生 物 学 报  2005年
由表 1可知 ,同是越冬芽 ,剥去外层鳞片的裸芽较未剥外层鳞片和带芽茎段接种 ,其感染率最低 ,萌发
率最高 ,且萌芽早 ,生长快 。春梢或夏梢作外植体接种时 ,带韧皮部的芽切块不论是直接萌芽还是诱导愈
伤组织 ,其萌芽率 、愈伤组织诱导率都高于带芽茎段 ,愈伤组织诱导率最低的是叶切块。剥除鳞片的越冬
芽是无患子微型扦插快速繁殖最理想的外植体 。但在剥鳞片时要特别细心 ,由于其芽为叠生 ,易将其下的
副芽剥去而降低芽的萌发数 ,所以剥去鳞片接种操作较困难 。另外 ,也曾有在 MS无菌培养基上使其沙藏
越冬种子出苗后再进行组织培养的试验 ,但由于其种子萌发慢 ,成芽倍数低而被淘汰 。
2.2 BA和 NAA不同浓度组合对越冬芽萌发的影响
表 2结果显示 , BA与 NAA配合使用时 ,以 BA1.5mg· L-1 +NAA0.2mg· L-1萌芽率最高 ,为
76.12%,且新生芽数多 ,长势好 ,而低浓度 NAA(0.2mg·L-1)比高浓度 NAA(0.3mg·L-1、0.5mg· L-1)
的萌芽率高;适量的 BA(1.0 ~ 2.0mg· L-1)对无患子越冬芽的萌发有促进作用 ,而高浓度 BA(4.0
mg·L-1)则对其有一定的抑制作用。
表 2 BA和 NAA不同浓度组合对无患子越冬芽萌发的影响
Tab.2 TheeffectsofdiferentconcentrationsofBAandNAAongerminationofsurmount-winterbudsinsoapberry
BA浓度
(mg· L-1)
NAA浓度
(mg· L-1)
接种越冬芽数
(个)
萌发率
(%)
最早萌发天数
(d)
萌发高峰需时
(d) 新 芽 生 长 状 况
0 0 50 16.00 23 -   萌发迟 ,芽生长极慢
0.5 0.2 41 43.90 9 23 +   萌发快 ,芽不整齐
1.5 0.2 67 76.12 7 20 +++ 萌发快 ,芽整齐 ,长势好
2.5 0.2 50 64.00 6 18 ++  萌发快 ,芽生长健壮
4.0 0.2 35 20.00 11 27 -   萌发迟缓 ,芽不整齐
0.5 0.3 37 32.43 12 29 -   萌发迟缓 ,芽生长缓慢
1.5 0.3 54 57.41 10 25 ++  萌发较快 ,芽生长较慢
2.5 0.3 46 41.30 9 23 +   萌发较快 ,芽不整齐
4.0 0.3 42 11.91 14 30 -   萌发迟缓 ,芽生长慢
1.5 0.5 32 18.75 14 35 -   萌发迟缓 ,芽不伸长
2.5 0.5 45 8.89 18 40 -   萌发迟缓 ,芽不伸长
2.3 不同浓度 BA与 NAA组合对春 、夏梢芽萌发的影响
从表 3可以看出 , BA与 NAA的不同浓度组合对无患子春 、夏梢芽萌发的影响也不同 ,其中 BA4.0
mg·L-1 +NAA0.3mg· L-1组合的萌发率最高 ,达 54.12%。高浓度 BA对春 、夏梢芽的促进作用大 ,而
低浓度 BA(2.0mg·L-1 、3.0mg·L-1)对春 、夏梢芽的萌发作用较高浓度 BA的作用小 ,而高浓度的 NAA
0.5mg·L-1对其芽萌发有抑制作用 。由表 2、3可看出 ,诱导春 、夏梢的芽萌发较诱导越冬芽萌发困难 ,且
作为启动芽萌发的细胞分裂素用量也高一些。
表 3 BA与 NAA不同浓度组合对无患子春 、夏梢芽萌发的影响
Tab.3 TheefectsofdiferentconcentrationsofBAandNAAongerminationofspringandsummerbudsinsoapberry
BA浓度
(mg· L-1)
NAA浓度
(mg· L-1)
接种越冬芽数
(个)
萌发率
(%)
最短萌发天数
(d)
萌发高峰需时
(d) 新 芽 生 长 状 况
2.0 0.1 93 20.43 31 49 --- 生长慢 ,萌芽细弱
3.0 0.1 119 27.73 26 45 --  生长较慢 ,萌芽纤细
4.0 0.1 235 43.83 20 31 +   生长较快 ,萌芽整齐
5.0 0.1 135 31.11 22 35 -   生长慢 ,萌芽细
2.0 0.3 80 28.75 24 39 -   生长慢 ,萌芽细弱
3.0 0.3 131 38.17 21 32 +   生长较快 ,苗整齐
4.0 0.3 194 54.12 17 29 ++  生长快 ,萌芽壮 ,长势好
5.0 0.3 106 41.51 19 30 +   生长快 ,萌芽细长
3.0 0.5 75 12.00 27 — --- 萌芽慢 ,或不生长
4.0 0.5 63 22.22 24 — -   萌芽慢 ,或不生长
2.4 不同浓度 2, 4-D和 BA组合对愈伤组织诱导率的影响
由表 4看出 ,生长素 2, 4 -D能诱导无患子嫩芽切块形成愈伤组织 ,浓度以 1.0 ~ 2.0mg· L-1并配以
121第 2期  张凤龙:无患子组织培养研究
低浓度的 BA(0.1 ~ 0.2mg·L-1)效果较好 ,最佳组合为 MS+2, 4-D1.5mg·L-1 +BA0.2mg·L-1 ,其
愈伤组织诱导率达 90%,且生长良好。
表 4 2, 4 -D和 BA不同浓度配比对无患子春 、夏梢芽切块形成愈伤组织的影响
Tab.4 Theeffectsofdifferentconcentrationsof2, 4-DandBAon
formationofcaluswiththeslicesofspringandsummerbuds
2, 4-D浓度
(mg· L-1)
BA浓度
(mg· L-1)
接种芽块数
(个)
愈伤诱导率
(%)
最短诱愈天数
(d)
愈伤形成高峰天数
(d) 愈伤组织生长状况
1.0 0.1 24 62.50 21 39 -  生长慢 ,紧密
1.5 0.1 31 74.19 15 31 -  生长紧密
2.0 0.1 35 60.00 17 34 +  生长较旺
3.0 0.1 27 48.15 20 37 -  生长过于疏松
1.0 0.2 42 78.57 14 31 +  生长紧密
1.5 0.2 40 90.00 12 28 ++ 生长细密
2.0 0.2 30 70.00 14 35 +  生长过旺
3.0 0.2 25 52.00 19 40 -  生长过于疏松
1.0 0 29 34.48 28 45 -  生长慢 ,紧密
2.0 0 35 42.86 25 40 +  生长紧密
2.5 不同生长调节剂用量及配比对愈伤组织诱导芽的影响
由表 5看出 ,在含有低浓度的细胞分裂素 BA1.0 ~ 2.0mg· L-1的培养基上 ,无患子愈伤组织切块很
难萌发成苗 ,但随着 BA浓度逐渐增大 ,其萌发率也逐渐增高 ,当 BA浓度超过 5.0mg·L-1时 ,愈伤组织萌
芽率开始下降 ,说明 BA浓度对诱导愈伤组织萌芽的适宜范围为 3.0 ~ 5.0mg· L-1 ,且 BA浓度 3.0
mg·L-1配以少量 KT0.2mg· L-1可促进萌芽。
表 5 不同生长调节剂用量及配比对无患子愈伤组织诱导萌芽的影响
Tab.5 Theeffectsofdifferentdosageandratioofregulatorsoninducinggerminationofcalusinsoapberry
BA浓度
(mg· L-1)
NAA浓度
(mg· L-1)
KT浓度
(mg· L-1)
接种块数
(块)
萌芽率
(%)
萌发高峰天数
(d) 萌 芽 苗 长 势
1.0 0.05 43 0 ---- 不萌发
2.0 0.05 66 6.06 42 --   基本不萌芽 ,生长慢
3.0 0.05 72 23.61 37 +    萌芽稀 ,生长慢
5.0 0.05 64 20.31 40 -    萌芽较少 ,生长慢
1.0 0.1 71 0 ---- 不萌发
2.0 0.1 79 8.86 40 ---- 萌芽极少 ,长势弱
3.0 0.1 83 30.12 35 ++   萌芽均匀 ,整齐
5.0 0.1 68 26.47 39 +    萌芽少 ,细弱
3.0 0.2 58 37.93 31 ++   萌芽均匀 ,长势好
5.0 0.2 61 31.15 35 +    萌芽稀疏 ,细长
3.0 0.1 0.2 85 43.53 29 ++   萌芽过密 ,纤细
3.0 0.2 0.2 78 47.44 26 +++  萌芽密 ,整齐
2.6 BA与 IBA不同浓度组合对幼苗增殖培养的影响
由表 6看出 ,单独使用细胞分裂素 BA可使无患子幼苗增殖 ,使用浓度以 1.0mg· L-1效果较好 ,增殖
倍数达 2.21;BA浓度为 0.5mg·L-1时 ,腋芽萌发少 ,增殖倍数低 ,只有 1.46;BA浓度达 2.0mg· L-1时 ,
增殖倍数开始下降 ,且萌发苗纤细;当 BA与适量 IBA配比使用时 ,效果比单独使用 BA要好。其中 BA
1.0mg·L-1配合低浓度 IBA0.02mg· L-1对幼苗增殖扩繁效果最好 ,增殖倍数最高 ,达 2.5,新生小苗长
势好 ,生长健壮。
2.7 几种培养基对小苗生根培养的影响
由表 7可以看出 ,无患子幼苗在无生长素的培养基上很难生根 。加入 NAA后 ,开始生根 ,且生根率随
NAA浓度增加逐渐增大 ,但生根率仍不理想 , NAA浓度为 1.0mg· L-1时 ,生根率仅 46.55%,且幼苗基部
形成瘤状的愈伤组织块 ,影响移栽成活。 NAA配以微量 IBA可以提高生根率 ,以 NAA0.5mg· L-1 +IBA
122 山 地 农 业 生 物 学 报  2005年
0.05mg· L-1组合生根率最高 ,为 57.55%。要使幼苗完全生根 ,仍需对 NAA与 IBA的配比浓度作进一步
研究。
表 6 BA与 IBA不同浓度组合对无患子幼苗增殖培养的影响
Tab.6 TheeffectsofdifferentconcentrationsofBAandIBAonshootsproliferationinsoapbery
BA浓度
(mg· L-1)
IBA浓度
(mg· L-1)
接种苗数
(株)
增殖高峰期芽数
(个) 平均增殖倍数 芽 生 长 状 况
0.5 0 145 212 1.46 +   腋芽部分萌发 ,生长好
1.0 0 117 259 2.21 ++  腋芽均能萌发 ,苗细长
2.0 0 131 247 1.89 +   腋芽大都能萌发 ,苗纤细
0.5 0.02 152 286 1.88 ++  腋芽大都萌发 ,生长好
1.0 0.02 197 493 2.50 +++ 叠生 ,副芽部分萌发 ,生长好
0.5 0.05 179 256 1.41 -   腋芽萌发较少 ,生长慢
1.0 0.05 166 307 1.85 +   腋芽大都萌发 ,生长慢
注:每瓶接种 2 ~ 3芽 ,接种苗数为每瓶接种数之和。
表 7 几种培养基对无患子小苗生根培养的影响
Tab.7 Theefectsofseveralmediaonrootagecultureofsoapberry
培养基成分 NAA浓度(mg· L-1)
IBA浓度
(mg· L-1)
接种苗数
(株)
生根率
(%)
最早生根时间
(d) 生 长 情 况
MS 0 0 35 0 0    未生根
1/2MS 0 0 71 0 0    未生根
1/2MS 0.2 0 126 26.98 28 -  只有少量根伸出
1/2MS 0.5 0 150 40.00 23 +  根较多,短
1/2MS 1.0 0 58 46.55 25 +  苗基部先有愈伤组织块形成 ,后生根
1/2MS 0.5 0.05 106 57.55 20 ++ 根萌发快 ,细长
3 讨 论
3.1 在本试验中 ,采自于年初(2月上 、中旬)的越冬芽的萌发率较夏初所采半木质化春梢及夏末所采夏
梢均高 ,且萌发快 ,这可能是越冬芽已完成休眠易萌发的缘故 ,而春 、夏梢正处于旺盛的营养生长阶段 ,要
使已脱分化的组织再进行分化需要一个转变过程 ,若加入适量的 GA是否可加速这个过程 ,使春 、夏梢茎
段芽块萌发及提高萌发率 ,还有待进一步研究 。
试验中 ,切取春 、夏梢上带韧皮部的芽块作外植体进行接种 ,其愈伤组织的诱导率明显高于茎段和叶
切块 ,并观察到愈伤组织的形成并不是由芽开始的 ,而是由嫩茎木质部的外围先形成愈伤组织 ,并随愈伤
组织的生长而掩盖腋芽 ,这主要是因为半木质化嫩枝 ,其束内形成层与束间形成层处于分裂高峰期 [ 7] 。
所以 ,作为诱导愈伤组织的最佳材料也许不是芽 ,直接剥取半木质化嫩茎木质部以外的部分作外植体进行
愈伤组织诱导是否效果更好 ,还需进一步研究 。
3.2 外植体接种时 ,无论是嫩茎 、芽 、叶切块 ,均无褐变现象 ,但在试验中发现有少量玻璃化苗出现 ,导致
玻璃化苗现象与材料差异 、培养基水势 、环境温度 、碳源供应状况 、无机盐和离子浓度等因素有关 [ 8] ,本试
验的玻璃化苗现象可能与温度高 、琼脂量偏低有关 。
3.3 有关无患子试管苗的移栽及其配套栽培技术有待进一步研究 。
3.4 本研究中 ,正交试验设计感染率高 ,有关无患子组织培养正交试验研究需进一步研究 。
(下转第 141页)
123第 2期  张凤龙:无患子组织培养研究
这为牛奶子的活血行气作用提供了依据。
从所了解的牛奶子的药用价值来看 ,这 3种物质应该只是其部分活性成分。而它作为治疗肺虚 、肝炎
和泻痢等作用的活性成分并未分离到 。很有可能是其有效活性成分的生物碱成分也未分离到其单体化合
物 。因此 ,在以后对牛奶子根的化学成分的研究过程中 ,提取分离其中的生物碱成分以及其具有治疗肝炎
作用的活性成分应是今后研究的重点 。
参 考 文 献:
[ 1] 高锦明 , 张鞍灵.沙棘挥发油化学成分研究概况 [ J] .沙棘 , 1995, 8(3):25-28.
[ 2] 高锦明 , 张鞍灵 ,李芸生 , 等.沙棘黄酮的化学研究进展 [ J] .沙棘 , 1998, 11(2):34-40.
[ 3] 中国科学院上海药物研究所编译.黄酮体化合物鉴定手册 [ M] .北京:科学出版社 , 1981.389-404.
[ 4] 姚新生.天然药物化学.第 2版 [ M] .北京:人民卫生出版社 , 1996.222-226.
[ 5] 李文魁 , 李英和 ,杨峻山 , 等.瓜子金化学成分的研究 [ J] .天然产物研究与开发 , 1996, 8(3):42-46.
[ 6] 丛浦珠.质谱学在天然有机化学中的应用 [ M] .北京:科学出版社 , 1987.477-480.
[ 7] 龚运淮.天然有机化合物的 13C核磁共振化学位移 [ M] .昆明:云南科学技术出版社 , 1998.232.
(上接第 123页)
参 考 文 献:
[ 1] 张凤龙 , 谢必武.几种处理方法对无患子种子发芽的影响 [ J] .重庆三峡职业学院学报 , 2005, 3(1):21-22.
[ 2] 范军科 , 伊建平.无患子的引种栽培 [ J] .林业实用技术 , 2002, (9):27.
[ 3] 孙 伟 , 蔡云升.细胞与组织培养技术在食用植物香料中的研究概况 [ J] .食品工业科学与技术 , 2003, 24(6):90-93.
[ 4] 徐振华 , 王学勇 ,李敬川.试管苗瓶外生根的研究进展 [ J] .中国农学通报 , 2002, 18(4):84-86.
[ 5] 赖钟雄 , 陈振光 ,潘良镇 , 等.无患子科果树生物技术研究现状与展望 [ J] .中国南方果树 , 1997, 26(6):37-38.
[ 6] 陈正华.木本植物组织培养及其应用 [ M] .北京:高等教育出版社 , 1986.165-168.
[ 7] 李扬汉.植物学 [ M] .上海:上海科学技术出版社 , 1992.69.
[ 8] 梅家训 , 丁习武.组培快繁技术及其应用 [ M] .北京:中国农业出版社 , 2003.23-25.
141第 2期  徐裕彬 ,等:牛奶子根化学成分的分离与测定