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菌丝原生质体再生研究简报
华中农大应用真菌研究室 阮一骏 陈立国 杨新美
陈国良
(上海市农科院食用菌所 )
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在细胞融合技术中 , 使原生质体高频率地再 生
是其中至关重要的一环 。 然而 , 在食用菌的细胞 融
合研究中 , 诸如已报道的香菇 、 平菇 、 草菇等 ,其原 生
质体的再生率均较低 ,一般在 1 0~ 1终之间 , 有的甚
至在 l多以下 , 这就给进一步工作带来一定困难 。 造
成原生质体再生率低下的原因 , 可能是由原生质体
自身质量所引起的。 已有报道证实 , 平菇原生质体
有36 万的细胞无核 。 我们认为 , 更主要的原因可 能
还在于对原生质体再生的条件研究不够 。 目前还未
见有关再生条件的研究报告。 我们在成功地制备 黑
木耳菌丝原生质体的基础上 , 对其再生的某些条 件
进行了初步的研究。
首先就不同的稳定剂 C甘露醇 、 K C I、 N a cl 、
M g S认 ) 对黑木耳菌丝原生质体再生的影响作了比
较试验 。 结果表明 , 以 O . 6M的M gS O ; 效果最好 , 这
与已报道的在其它真菌上的效果是一致的 .
再生培养基中的碳源成分 , 是影响原生质休胞
壁再生的主要因素 。 在以葡萄糖 、蔗糖 、 麦芽糖和 纤
维二糖分别作为碳源的再生培养中 , 发现纤维二 糖
对黑木耳原生质休的胞壁再生有显著促进作用 , 蔗
糖也有比较理想的效果 。 我们还发现 , 黑木耳菌 丝
体培养物的浸出物作为培养成分 , 对黑木耳原生质
体的再生有明显刺激作用 。 在了解的最适再生培 养
条件下 , 光木耳 (A u r ￡e u Za r i a a “ r末e u 乙a ) 原生质 体
的再生率可提高到 2 1 . 1万 , 毛 木耳 (A ur 化 ul 。 ; 沁
oP 妙 itr c加 )原生质体的再生率可达 17 . 3解.
原生质体在再生过程中经荧光染色剂染色 , 在
灸光显微镜下观察发现 , 培养 6小时后 , 原生质体即
已开始再生胞壁 , 12 小时后胞壁逐渐再生完 整 。 一
般在2 4小时后即开始出芽形成菌丝体 , 3天后可达 到
最高再生率 .
试验表明 , 只要对原生质体的再生条件作深入
研究 , 提高原生质体的再生率的潜力很大。
对黑木耳原生质的再生条件尚需进一步探索 。
同时已掌握的原生质体释放和再生的条件可直接用
于原生质体融合的研究 , 进行黑木耳的种间杂交。
作者于 19 84年 3月 12 日 , 在本院附近的乌柏树例
木上采集到一丛野生菇。 子实体丛生 , 菌盖宽 1 . 2~
1
.
7 只 2 . 2“ :2 7厘米 , 质韧 ,灰白色 , 有密生绒 毛 , 扇
形 , 边缘内卷 ,有裂 口 , 成瓣状 。 菌褶从基部辐 射而
出 , 肉色 。 抱子无色 , 圆柱形 。
(一 ) 菌种的培养 : 采用组织分离法接科在 P D A
斜面培养基丰。 于 2 6℃恒温培养 , 2 天长满斜面 菌
丝白色 , 边缘不整齐 。 栽培种培养基为青冈栋木屑
7 8拓 、 米糠 2 0拓 、 蔗糖 1拓、 石膏粉 1拓 ,含水量 60 拓 .
接斜面菌种后于肠℃下培养 , 26 天长满 7叻毫升的瓶
子 。
(二 ) 最适 p H试验 : 将预先做好的 P D A 培 养基
加热溶解 ,在无菌箱中用 0 . 1~ 0 . bN N a o 】I和 H CI 洛
派调节p H , 分别调到 p H Z 、 2 . 感、 3 、 4 、 6 、 6 、 7 、 8 、 O、 0 . 恳、
10
, 每一种 p H 试验为3皿 , 每一培养皿按斜面菌种 2
块 (即两点接种法 ) , 每一接种块为 0 . 2 x 0 . 3 m m 。 接
种后置 26℃培养 , 8天后测量菌丝生长量 (厘米 ) 结果
如下表 。
p H对菌丝生 长的影响 (单位 : 厘米 )
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(三 ) 子实体的培养 : 培养川配方和培养条 件与
制栽培种相同 。 于 9月 7日制栽培种 , 32 天长满瓶 。 1
月 8日挖瓶铺于塑料盘中 ,稍压实 , 厚 7厘米 , 覆盖 薄
膜 , 先在邓℃下培养 , 15天料表面长满菌蕾后移至栽
培室 , 揭去薄膜 , 控制空气相对湿度在 9 0“ 肠拓 , 室
温 18 ℃左右 , 有微弱散光 。 n 月29 日子实体成熟 , 头
潮菇采收后继续培养 , 子实体仍长满料面 。
(四 ) 结论私讨论 : ①人工培养长出的于实体 ,
共形态行合裂褶菌的特征 , 说明此菌 确 系裂 褶菌
( s c 入,` a p } ;夕乙正u ” ; co m m u 玲 e , 。 ②菌丝生长 的 适 宜
p H井感、 ,6 , p H Z . b以下不长 , pH 10 以上生长较差 。 ⑤
菌丝能在木屑 、 米糠培养基上扭结长出子实体 , 并能
在 13 、 2 6℃及微弱的光照下长大 .