全 文 ：药 物 生 物 技 术
Pharmaceutical Biotechnology 2001 ,8(3):167 ～ 169
菊花脑茎叶中黄酮类化合物的测定
翁德宝1 ,汪海峰2 ,翁佳颖
(1.江苏教育学院生物化学教研室 ,南京 210013;2.南京经济学院粮油检测中心 ,南京 210003)
摘 要 菊花脑是南京地区一种传统的栽培利用野生蔬菜。 其茎叶乙醇提取物用 Mg+HCl , Zn+HCl ,
1%FeCl3-乙醇液 , 2%AlCl3-乙醇液 , 1%NaOH 进行显色反应 , 呈现黄酮类化合物性质特征颜色。 又以槲皮素 ,
山柰酚 ,异鼠李素为对照品 , 采用 HPLC法分析测定了其茎叶中黄酮醇的含量。结果表明 ,干品中总黄酮含量
(以甙元计)为 0.203%。
关键词 菊花脑茎叶;黄酮类化合物;定性预试验;含量测定
中图分类号:Q949.783.5 文献标识码:A 文章编号:1005-8915(2001)03-0167-03
菊花脑(Chrysanthemum nankingense Hand.-
Mazz)为菊科菊属多年生草本植物 ,南京市郊县现
栽培或野生 ,安徽黄山等地也有分布 ,是具有南京
地方特色的传统蔬菜 ,食用部位主要是嫩稍茎叶 ,
具浓郁的菊香味 ,炒食 、做汤清香爽口 ,能清凉 、明
目 ,调中开胃 ,也有解毒 、降血压之功效[ 1] 。该种
植物是野菊(Chrysanthemum indicum L.)的一个变
种[ 2] 。野菊的花 、叶入药消炎 、杀菌 ,含黄酮甙 ,如
木樨草素-7-葡萄糖甙 、大波斯菊甙 、刺槐素-7-鼠
李糖葡萄糖甙二水合物[ 2 ,3] 。目前有关菊花脑的
有效活性化学成分的研究尚未见报告。为探讨菊
花脑中药用活性成分 ,以其嫩茎叶为材料 ,测定其
中黄酮类化合物含量 ,为证明其保健价值提供科
学依据。
1 材料 、试剂和仪器
1.1 材料 菊花脑茎叶购自南京市场 ,将其洗净
后烘干备用。
1.2 试剂 槲皮素 、山柰酚 、异鼠李素对照品均
为生化试剂(美国 Indofine 公司产品);甲醇(色谱
纯);高纯水(自制 ,二次重蒸)。
1.3 仪器 Waters-HPLC(配置:515 高效液相色
谱仪 ,Waters 2487双通道紫外可见光检测器 ,HSV
+4.0色谱数据工作站)。
2 方 法
2.1 样品水分含量测定
菊花脑茎叶水分含量测定采用常压干燥
法[ 4] 。
2.2 样品处理
将菊花脑茎叶干品研细成粉末 , 称取 4g ,置
于索氏抽提器内用乙醚回流抽提 7h ,除脂 。再用
95%乙醇于水浴(95℃)上提取6h ,得乙醇提取液 ,
挥干乙醇 ,用无水甲醇溶解残留物 ,过滤后滤液转
移至 50ml容量瓶 ,定容后待用 ,此为待测液Ⅰ 。
精确称取样品粉末 2.0g 于水解瓶中 ,加无水
甲醇 30ml ,25%HCl 5ml ,充分摇匀 ,水浴(85℃)上
精确回流 1h ,冷却 ,过滤 ,取滤液转移至50ml容量
瓶内 , 用无水甲醇定容。取上述甲醇提取液
2.5ml ,再用乙醚萃取水解后的黄酮甙元 5 次 ,每
次加乙醚 5ml ,合并醚层 ,回收乙醚。后用甲醇溶
解残留物 ,定容至 2.5ml ,此为待测液 Ⅱ。
2.3 黄酮类化合物定性试验(显色反应)[ 5～ 7]
取适量待测液 Ⅰ加入 2支试管中 ,分别在每
支试管中加入少许 HCl-镁粉 ,HCl-锌粉后在热水
浴上观察颜色变化。取适量待测液 Ⅰ分别点于 3
张滤纸上风干 ,日光下观察斑点颜色 ,再取少许
2%AlCl3-乙醇液 ,1%NaOH 溶液和 1%FeCl3-乙醇
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中国药科大学中药学院 98级学生
收稿日期:2000-06-24
基因项目:本项研究为江苏省农业资源区划办公室《江苏省野生蔬菜资源调查及开发利用研究》项目内容 ,并获得江苏省资源生物
技术重点实验室(江苏高校省级重点实验室)开放研究课题经费资助。
作者简介:翁德宝 , 1947年生 ,江苏南京人 ,理学士 ,副教授 ,主要从事营养生化及植物资源的开发利用等研究工作。
液分别喷于 3纸滤纸待测液斑点上 ,干燥后在紫
外灯下观察颜色 。
2.4 HPLC法测定
(1)色谱条件 色谱柱:Lichromosorb C18
4mm×250mm;流动相:甲醇-0.4%磷酸溶液(50∶
50);流速:1.0ml/min;检测器波长 370nm;进样量:
10μl。
(2)标准溶液 准确称取对照品槲皮素
5.0mg ,山柰酚 5.0mg ,异鼠李素 4.0mg ,分别用甲
醇定容至25 ,25 ,50ml ,为标准A使用液;依次移取
上述溶液 4 ,4 ,2ml于 10ml容量瓶中 ,充分摇匀 ,
为标准 B使用液 。
(3)线性关系及线性范围测定 吸取标准 A
使用液 10 ,5μl及标准 B使用液 10 , 5 , 1μl分别进
样 ,以峰面积(Y)与溶液浓度(X)进行线性回归分
析 ,回归方程分别为:槲皮素
Y=4.7500×104x-2106 , r=0.9999;山柰酚 Y
=4.5303×104x-563 , r =0.9999;异鼠李素 Y=
4.8219×104x -1182 , r=0.9998;线性范围 7.712
～ 192μg/ml ,8.256 ～ 206.4μg/ml ,1.674 ～ 83.68μg/
ml。
(4)样品测定 取待测液 Ⅱ ,进样 10μl ,按上
述色谱条件测定。测得峰面积 ,代入回归方程 ,计
算各黄酮甙元的含量 。
(5)回收率试验 在菊花脑茎叶干品中分别
精密添加对照品槲皮素 、山柰酚 、异鼠李素 ,按上
述“样品处理”项内水解提取及“样品测定”步骤测
定 ,计算平均回收率 。其结果是 ,槲皮素 、山柰酚 、
异鼠李素的平均回收率分别为 99.1%, 99.5%,
100.1%(n =5);其 RSD 分别为 1.3%, 2.2%,
1.7%。
3 结 果
3.1 水分含量
菊花脑茎叶鲜品含水量为 88.9%。
3.2 黄酮类化合物定性试验结果
菊花脑样品提取液(待测液Ⅰ)经过化学试剂
显色反应实验 ,获得相关结果(表 1)。与多种显
色试剂阳性反应结果表明 ,菊花脑茎叶样品乙醇
提取液中含有黄酮类化合物。
Tab 1 Qualitative preliminary test of flavonoids in leaves and stalks of Chrysanthemum nankingense
Developer-condition Developing result Possible components[ 5 ～ 7]
Sun-light(Natural light)
UV366nm
Mg powder and HCl(Hot bath)
Zn powder and HCl(Hot bath)
1%FeCl3 ethanol(Sun-light)
2%AlCl3 ethanol(Sun-light)
2%AlCl3 ethanol(UV)
1%NaOH(Sun-light)
1%NaOH(UV)
Yellow
Blue green fluorescence
Purple
Purple
Green
Yellow
Yellow green fluorescence
Yellow
Yellow green fluorescence
Flavonoid , Flavonol
Flavonoid , Flavonol , Dihydroflavonoid
Flavonoid , Flavonol , Dihydroflavonol
Flavonoid , Flavonol , Dihydroflavonol
Flavonoid , Flavonol(3 , 5-dihydroxyderivative)
3 , 5-dihydroxyflavonoid
3 , 5-dihydroxyflavonoid
Flavonoid , Flavonol
Flavone , Flavonol , Dihydroflavonoid , Isoflavone , Chalcone
2.3 HPLC法测定样品结果
本法测定的菊花脑样品系材料经HCl水解后
而得到的提取物 ,其中黄酮类化合物种类数量减
少 ,利于检测。经测定主要为 3种甙元(图 1)。
测定结果表明 ,菊花脑茎叶水解提取物含有 3
种黄酮醇甙元:槲皮素 ,山柰酚 ,异鼠李素 ,其含量
(以甙元计)分别为:0.113%,0.042%, 0.048%,总黄
酮甙元为0.203%。此为干品中总黄酮甙元的含量。
根据含水量测定 ,已知鲜品含水量为88.9%,则推算
鲜品中总黄酮甙元含量为0.023%。
4 结束语
从已完成的研究分析证明 ,菊花脑鲜品蛋白
质含量 2.6%(干品为 23.6%);根据氨基酸分析
测定数据 ,利用数学模糊识别法和氨基酸比值系
数法进行评价 ,其蛋白质营养价值高于常见蔬菜
(研究报告待发表)。可见菊花脑是一种优良的蔬
菜品种。本项研究又证实菊花脑茎叶中含有黄酮
168 药 物 生 物 技 术 第 8卷第 3 期
1.Quercetin 2.Kaempferol 3.Isorhamnetin
Fig 1 Chromatogram of Chrysanthemum nankingense
类化合物 ,含量(以甙元计)适中。黄酮类化合物
具有多方面的药用疗效 ,能维持毛细血管的正常
功能 ,预防病菌感染 ,抑制肿瘤 ,清除自由基 ,并对
高血压 、高脂血症等心血管系统疾病有较好的防
治作用[ 8 ～ 9] 。
由此证明 ,菊花脑茎叶能有“清凉 ,明目 ,调中开
胃 ,解毒 、降血压”诸种功效 ,是有相应的活性成分
物质基础的。
参 考 文 献
〔1〕 汤庚国 ,李湘萍.江苏野菜资源的利用与开发[ J] .植物资
源与环境 ,1995 , 4(3):35.
〔2〕 江苏省植物研究所编.江苏植物志(下册)[ M] .南京:江苏
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〔4〕 黄伟坤等编著.食品检验与分析 [ M] .北京:中国轻工业
出版社 ,1989.8.
〔5〕 中国科学院上海药物研究所编著.中草药有效成分提取与
分离(第二版)[ M] .上海:上海科学技术出版社 , 1983.15 ,
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中国轻工业出版社, 1997.397.
〔9〕 于守洋 ,王雅凌, 余永龙主编.营养科学与保健食品[ M] .
哈尔滨:黑龙江人民出版社 , 1996.67.
Studies on Flavonoidsin Leaves and Stalks of Chrysanthemum Nankin-
gense Hand.-Mazz
WENG De-bao1 ,WANG Hai-feng2 , WENG Jia-ying3
(1.Deparment of Biochemistry , Jiangsu Education College , Nanjing 210013;2.Testing Centre of
Grain and Oil , Nanjing Economics College , Nanjing 210003;3.School of Traditional Chinese
Medicine ,China Pharmaceutical University , Nanjing 210038)
Abstract Chrysanthemun nankingense Hand.-Mazz , a wild vegetable , has been a traditional species from cultiva-
tion and utilization in Nanjing.Ethanol extractions of leaves and stalks of this plant were allowed to react with color
developer such as Mg(Zn)powder and HCl , 1%FeCl3 ethanol , 2%AlCl3 ethanol and 1%NaOH.Characteristic
color of favonoids was then observed.Flavonoids was then observed.Putting quercetin , kaempferol and isohamnetin
as reference , flavonol in dried sample was analyzed and determined by HPLC method.Results showed that total con-
tent of flavonol was 0.203%。
Key words Chrysanthemum nankingense Hand.-Mazz , Leaves and stalks , Flavonoid , Qualitative preliminary
test , Quantitative analysis
169翁德宝等:菊花脑茎叶中黄酮类化合物的测定