全 文 ：70%、50%、30%)、70% 乙醇为溶剂，用索氏、
回流和超声法进行提取，并考察了提取时间。结果
发现，50%甲醇回流提取 1 h时效率最高。
3. 2 检测波长的选择 本实验采用 DAD检测器对
待测成分在 190 ～ 400 nm波长范围之内进行紫外扫
描，发现 3 个化合物在 210 nm 处均有较大吸收，
而且峰形好、干扰少、色谱图较理想，故选择 210
nm作为检测波长。
3. 3 流动相的选择 本实验考察了不同流动相
(甲醇-0. 1%磷酸水溶液、甲醇-水、乙腈-0. 1%磷
酸水溶液、乙腈-水)对各成分峰型及分离度的影
响，发现含甲醇的流动相对 S3 不能有效分离，并
且加入含磷酸的流动相时，基线更平稳。最终选择
乙腈-0. 1%磷酸水溶液作为流动相。
参考文献:
［1］ 贵州省药品监督管理局． 贵州省中药材民族药材质量标
准:2003 年版［S］． 贵阳:贵州科技出版社，2003:48．
［2］ 中药辞海编辑委员会． 中药辞海［M］． 北京:中国医药科
技出版社，1993:489．
［3］ 《全国中草药汇编》编写组． 全国中草药汇编［M］． 北
京:人民卫生出版社，1996．
［4］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会． 中华本草:第 4
卷［M］． 上海:上海科学技术出版社，1999:61．
［5］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会． 中华本草:苗药
卷［M］． 上海:上海科学技术出版社，2004:261．
［6］ 江苏新医学院． 中药大辞典［M］． 上海:上海科学技术出
版社，2001，184．
［7］ 中国科学院《中国植物志》编辑委员会． 中国植物志:第
35 卷［M］． 北京:科学出版社，1979:11．
［8］ 聂田田，赵焕新，白 虹，等． 光叶海桐根的化学成分
［J］． 中国天然药物，2011，9(3) :180-184．
［9］ 赵焕新，聂田田，郭焕杰，等． 光叶海桐根中的一个新三
萜类化合物［J］． 药学学报，2013，48(6):887 -890．
［10］ Zhao H X，Nie T T，Guo H J，et al． Two new neolignan glyco-
sides from Pittosporum glabratum Lindl． ［J］． Phytochem Lett，
2012，5(2) :240-243．
［11］ 杨华中，周玉英，肖永新，等． 光叶海桐茎叶镇痛作用实
验研究［J］． 中国现代医学杂志，1996，6(3):14-15．
［12］ 肖永新，杨华中，周玉英，等． 光叶海桐茎叶总皂甙
(SPGL)对心肌收缩力及血压的影响［J］． 中药药理与临
床，1992，8(5) :29-30．
腺梗豨莶草乙酸乙酯部位化学成分的研究
许凤清， 刘金旗， 刘丛彬， 周 娟， 徐 冉
(安徽中医药大学药学院，安徽 合肥 230012)
收稿日期:2015-01-13
基金项目:高校省级优秀青年人才基金重点项目 (2013SQＲL041ZD);安徽中医药大学自然科学基金重点项目 (azy016)
作者简介:许凤清 (1979—) ，女，博士，副教授，从事天然药物化学成分研究。Tel:18949806078;E-mail:qingfx@ eyou． com
摘要:目的 研究腺梗豨莶草 Siegesbeckia pubescens Makino乙酸乙酯部位的化学成分。方法 该部位采用硅胶、Sepha-
dex LH-20、MCI、ＲP-18 以及 HPLC色谱柱进行分离纯化，1H-NMＲ、13C-NMＲ结合报道文献进行结构鉴定。结果 从中
分离鉴定出 7 个化合物，分别为 16βH-17-羟基-贝壳杉烷-19-羧酸 (1)、对映-16βH，17，18-二羟基-贝壳杉烷-19-羧酸
(2)、对映-16β，17-二羟基-贝壳杉烷-19-羧酸 (3)、18-乙酰基-豨莶酸 (4)、3，7-二甲氧基槲皮素 (5)、3-甲氧基槲
皮素 (6)和奇壬醇 (7)。结论 化合物 1 和 6 为首次从该植物里分离得到。
关键词:腺梗豨莶草;乙酸乙酯部位;化学成分;分离鉴定
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2015)11-2451-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2015. 11. 025
Chemical constituents from the ethyl acetate fraction of Siegesbeckia pubescens
XU Feng-qing， LIU Jin-qi， LIU Cong-bin， ZHOU Juan， XU Ｒan
(School of Pharmacy，Anhui University of Chinese Medicine，Hefei 230012，China)
ABSTＲACT:AIM To investigate the chemical constituents from the ethyl acetate fraction of Siegesbeckia pu-
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bescens． METHODS The isolation and purification of this fraction were performed on silica，Sephadex LH-20，
MCI，ＲP-18 and HPLC column． The structures of isolated compounds were then identified on the basis of 1H-
NMＲ，13C-NMＲ and reported literatures． ＲESULTS Seven compounds were isolated and elucidated as ent-17-
hydroxy-16βH-kauran-19-oic acid (1)，siegesbeckic acid (2) ，ent-16α，17-dihydroxykauran-19-oic acid (3) ，
18-acetoxy-ent-17-hydroxy-16βH-kauran-19-oic acid (4) ，3，7-dimethoxyquercetin (5) ，3-methoxyquercetin
(6) ，kirenol (7)． CONCLUSION Compounds 1 and 6 are obtained from S． pubescens for the first time．
KEY WOＲDS:Siegesbeckia pubescens Makino;ethyl acetate fraction;chemical constituents;isolation and identi-
fication
豨莶草为常用中药，始载于唐代 《新修本
草》，具有祛风湿、利关节、解毒之功效，用于风
湿痹痛、筋骨无力、腰膝酸软、四肢酸软、半身不
遂、风疹湿疮等症［1］，其性味苦寒，入肝、肾经，
早期主要用于治疗急慢性风湿性关节炎和腰腿痛，
疗效较好。后来，其用途被逐渐扩大，目前临床上
常用豨莶草治疗冠心病［2-3］、高血压［4-5］、脑血管
意外后遗症［6］等病症，并取得了理想的效果。另
外，它还有较好的抗血栓作用［7-8］。本实验在前期
工作［9-11］的基础上，为寻找腺梗豨莶草的抗血栓活
性成分，对该植物进行化学成分研究，结果从其乙
酸乙酯部位中分离出 4 个对映-贝壳杉烷型二萜
(1 ～ 4)、2 个黄酮类化合物 (5 ～ 6)和 1 个对映-
海松烯型 (7)，结构见图 1。
图 1 化合物 1 ～ 7 的化学结构
Fig. 1 Chemical structures of compounds 1 －7
1 实验仪器与材料
AV-400 核磁共振仪，TMS 为内标 (德国
Bruker公司) ;API QSTAＲ Pulsari 液相四级杆飞行
时间质谱仪 (加拿大 MDS公司) ;Waters Auto Pur-
ification HPLC 2545-2489 制备色谱仪 (美国 Waters
公司)。Sephadex LH-20 (瑞典 Amersham Biosci-
ences公司);MCI-gel CHP-20P (75 ～ 150 μm，日
本 Mitsubishi Chemical公司) ;ＲP-18 ODS (40 ～ 63
μm，德国 Merck 公司) ;柱层析硅胶 (200 ～ 300
目，青岛海洋化工有限公司)。所用试剂为化学纯
或分析纯。显色方法为紫外灯下波长 254 nm 处观
察荧光，或喷洒 10%硫酸乙醇溶液，105 °C 下加
热显色。
药材于 2013 年 10 月采自安徽省岳西县石关
乡，由安徽中医药大学中药资源教研室杨青山老师
鉴定为菊科植物腺梗豨莶 Siegesbeckia pubescens
Makino的地上部分，标本 (编号 XF201301)保存
于安徽中医药大学天然药化研究室。
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2 提取分离
取腺梗豨莶草干燥地上部分 10. 7 kg，粉碎成
粗粉，95%乙醇润湿，装入渗漉筒，依次用 95%
和 70%乙醇渗漉，合并渗漉液，减压浓缩至浸膏
状，回收溶剂。浸膏加水混悬，依次以石油醚、乙
酸乙酯进行萃取，合并萃取液，减压回收溶剂，分
别得到石油醚、乙酸乙酯 (220. 8 g)和水部位浸
膏。取乙酸乙酯部位 213. 2 g，乙醇溶解后吸附于
400 g 硅胶 (200 ～ 300 目)上，经硅胶柱色谱
(2. 0 kg，9. 0 cm × 60 cm)，二氯甲烷-甲醇
(95 ∶ 5、9 ∶ 1、85 ∶ 15、4 ∶ 1，V /V，各 20 L)系统
梯度洗脱，TLC检测后合并相同流份，得到Fr． 1 ～
Fr． 5。
Fr． 2 (7. 2 g)经 MCI柱 (0. 8 L，4. 0 cm × 80
cm)，80%、100% 甲醇洗脱后，Fr． 2-1 (80% 甲
醇)再经 Sephadex LH-20 柱 (75 g，2. 0 cm × 150
cm)，得到化合物 3 (12. 48 mg) ;Fr． 2-2 (100%
甲醇)经 Sephadex LH-20 柱 (75 g，2. 0 cm × 150
cm) ，二氯甲烷-甲醇 (1 ∶ 1)洗脱，得到化合物 5
(12. 35 mg)、3 (21. 18 mg) ;Fr． 2-2-1 (36. 8 mg)
用甲醇溶解，经制备液相，甲醇-水 (90 ∶ 10)洗
脱，215 nm波长检测，得到化合物 1 (21. 56 mg)。
Fr． 3 (20. 5 g)经 MCI 柱 (0. 8 L，4. 0 cm ×
80 cm) ，80%、100%甲醇洗脱后，80%甲醇部位
经 ＲP-18 色谱柱 (100 g，3. 5 cm × 40 cm) ，甲醇-
水 (50%、80%、100%，各 200 mL)梯度洗脱，
合并后得到 Fr． 3-1 ～ Fr． 3-3。Fr． 3-1 经硅胶柱色谱
(50 g，3. 5 cm ×50 cm)，氯仿-甲醇 (9 ∶ 1)洗脱，
得到化合物 6 (11. 36 mg)和 7 (1. 58 g) ;Fr． 3-2
经硅胶柱色谱 (15 g，2. 0 cm × 30 cm) ，Pet-
Me2CO (95 ∶ 5)洗脱，得到白色针晶化合物 4
(3. 52 mg) ;Fr． 3-3 (315 mg)经凝胶 Sephadex
LH-20 柱 (75 g，2. 0 cm × 150 cm) ，二氯甲烷-甲
醇 (1 ∶ 1)洗脱，再进一步经硅胶柱和 HPLC制备
色谱，甲醇-水 (85 ∶ 15)洗脱，215 nm 波长检
测，得到化合物 2 (11. 78 mg)。
3 结构鉴定
化合物 1:白色针状结晶 (甲醇)，分子式 C20
H32O3，ESI-MS m/z:321［M + H］
+。1H-NMＲ (400
MHz，CDCl3) δ:3. 48 (1H，brs，H-17a) ，3. 39
(1H，dd，J = 8. 4，2. 9 Hz，H-17b) ，1. 22 (3H，s，
H-18) ，0. 92 (3H，s，H-20)。13 C-NMＲ (100 MHz，
CDCl3)δ:183. 5 (C-19) ，67. 4 (C-17) ，56. 9 (C-
5) ，55. 2 (C-9) ，44. 9 (C-15) ，44. 7 (C-4) ，43. 6
(C-8) ，43. 3 (C-16) ，41. 6 (C-7) ，40. 7 (C-1) ，
39. 5 (C-10) ，38. 1 (C-13) ，37. 8 (C-3) ，37. 1 (C-
14) ，31. 3 (C-12) ，28. 9 (C-18) ，22. 3 (C-6) ，
19. 0 (C-2) ，18. 8 (C-11) ，15. 5 (C-20)。以上核
磁数据与文献 ［12］一致，确定化合物 1 为对映-
17-羟基-16βH-贝壳杉烷-19-羧酸 (ent-17-hydroxy-
16βH-kauran-19-oic acid)。
化合物 2:白色针状结晶 (甲醇) ，分子式 C20
H32 O4，ESI-MS m/z:359 ［M + Na］
+。1H-NMＲ
(400 MHz，CD3OD)δ:3. 75 (1H，d，J = 10. 4 Hz，
H-18b)，3. 43 (1H，d，J = 10. 4 Hz，H-18b) ，3. 28
(2H，overlapped，H-17) ，1. 01 (3H，s，H-20)。13C-
NMＲ (100 MHz，CD3OD)δ:179. 8 (C-19) ，70. 8
(C-18) ，67. 6 (C-17) ，56. 8 (C-9) ，52. 3 (C-5) ，
50. 8 (C-4) ，46. 3 (C-15) ，45. 7 (C-8) ，44. 3 (C-
16) ，42. 5 (C-7) ，41. 7 (C-1) ，40. 5 (C-10) ，39. 5
(C-13) ，37. 9 (C-14) ，33. 3 (C-3) ，32. 5 (C-12) ，
23. 3 (C-6) ，19. 9 (C-2) ，19. 8 (C-11) ，16. 4 (C-
20)。以上核磁数据与文献 ［13］一致，确定化合
物 2 为对映-16βH，17，18-二羟基-贝壳杉烷-19-羧
酸 (Siegesbeckic acid)。
化合物 3:白色固体 (甲醇)，分子式 C20 H32
O4，ESI-MS m/z:359 ［M + Na］
+。1H-NMＲ (400
MHz，CD3OD) δ:3. 68 (1H，d，J = 11. 3 Hz，H-
17a) ，3. 57 (1H，d，J = 11. 3 Hz，H-17b) ，1. 17
(3H，s，H-18) ，0. 97 (3H，s，H-20)。13 C-NMＲ
(100 MHz，CD3OD) δ:181. 6 (C-19) ，82. 8 (C-
16) ，66. 8 (C-17) ，58. 0 (C-5) ，57. 3 (C-9) ，53. 7
(C-15) ，46. 1 (C-8) ，45. 7 (C-13) ，44. 6 (C-4) ，
43. 3 (C-3) ，41. 9 (C-1) ，40. 8 (C-10) ，39. 1 (C-
7) ，38. 1 (C-14) ，29. 4 (C-18) ，27. 2 (C-12) ，
23. 3 (C-6) ，20. 2 (C-11) ，19. 5 (C-2) ，16. 2 (C-
20)。以上核磁数据与文献 ［14-15］ 一致，确定
化合物 3 为对映-16β，17-二羟基-贝壳杉烷-19-羧
酸 (ent-16β，17-dihydroxykauran-19-oic acid)。
化合物 4:白色针状结晶 (甲醇) ，分子式
C22H34O5，ESI-MS m/z:401 ［M + Na］
+。1H-NMＲ
(400 MHz，CD3OD)δ:4. 35，3. 92 (each 1H，d，
J = 10. 4 Hz，H-18a，18b) ，3. 28 (2H，overlapped，
H-17) ，2. 01 (3H，s，H-2) ，1. 03 (3H，s，H-
20)。13 C-NMＲ (100 MHz，CD3OD)δ:178. 5 (C-
19) ，172. 5 (C-1) ，73. 2 (C-18) ，67. 6 (C-17) ，
56. 8 (C-9) ，53. 1 (C-5) ，49. 6 (C-4) ，46. 2 (C-
15) ，45. 6 (C-8) ，44. 3 (C-16) ，42. 4 (C-7) ，41. 5
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(C-1) ，40. 5 (C-10) ，39. 5 (C-13) ，37. 9 (C-14) ，
33. 6 (C-3) ，32. 5 (C-12) ，23. 6 (C-6) ，20. 6 (C-
2) ，19. 8 (C-2) ，19. 6 (C-11) ，16. 1 (C-20)。以
上核磁数据与文献 ［16］ 一致，确定化合物 4 为
18-乙 酰 基-豨 莶 酸 (ent-18-acetoxy-17-hydroxy-
16βH-kauran-19-oic acid)。
化合 物 5:黄 色 粉 末 (甲 醇)，分 子 式
C17H14O7，分子量 330。
1H-NMＲ (400 MHz，Ace-
tone-d6)δ:12. 77 (1H，s，5-OH) ，7. 67 (1H，d，
J = 1. 8 Hz，H-2) ，7. 52 (1H，dd，J = 8. 4，1. 8
Hz，H-6) ，6. 93 (1H，d，J = 8. 4 Hz，H-5) ，6. 65
(1H，d，J = 2. 1 Hz，H-8) ，6. 30 (1H，d，J = 2. 1
Hz，H-6) ，3. 91 (3H，s，7-OCH3)，3. 85 (3H，s，
3-OCH3)。
13C-NMＲ (100 MHz，Acetone-d6)δ:179. 4
(C-4)，166. 4 (C-7) ，162. 6 (C-5) ，157. 6 (C-9) ，
157. 2 (C-2) ，149. 9 (C-4) ，146. 4 (C-3) ，139. 2
(C-3) ，121. 1 (C-1) ，121. 7 (C-6) ，116. 5 (C-
2) ，116. 4 (C-5) ，106. 4 (C-10) ，98. 4 (C-6) ，
92. 8 (C-8) ，60. 2 (3-OCH3) ，56. 5 (7-OCH3)。以
上核磁数据与文献 ［17］ 一致，确定化合物 5 为
3，7-二甲氧基槲皮素 (3，7-dimethoxyquercetin)。
化合物 6:黄色针状结晶 (甲醇)，分子式
C16H12O7，分子量 316。
1H-NMＲ (400 MHz，Acetone-
d6)δ:12. 80 (1H，s，5-OH) ，7. 68 (1H，d，J =
2. 1 Hz，H-2) ，7. 52 (1H，dd，J = 8. 4，2. 1 Hz，H-
6) ，6. 97 (1H，d，J = 8. 4 Hz，H-5) ，6. 47 (1H，
d，J = 1. 8 Hz，H-8) ，6. 23 (1H，d，J = 1. 8 Hz，H-
6) ，3. 84 (3H，s，3-OMe)。13 C-NMＲ (100 MHz，
Acetone-d6)δ:179. 4 (C-4) ，164. 7 (C-7) ，163. 1
(C-5) ，157. 7 (C-9) ，156. 6 (C-2) ，148. 9 (C-4) ，
145. 7 (C-3) ，139. 1 (C-3) ，122. 9 (C-1) ，122. 0
(C-6) ，116. 2 (C-2) ，116. 1 (C-5) ，105. 7 (C-
10) ，99. 2 (C-6) ，94. 3 (C-8) ，60. 0 (3-OCH3)。
以上核磁数据与文献 ［17］ 一致，确定化合物 6
为 3-甲氧基槲皮素 (3-methoxyquercetin)。
化合物 7:白色方晶 (乙醇)，mp 194 ～ 196
℃，10%硫酸乙醇溶液显紫红色，与奇壬醇对照品
在 CHCl3-MeOH (9 ∶ 1)及 Pet-Me2CO (3 ∶ 2)条
件下展开，发现两者 Ｒf 值及显色行为均相同，混
合后熔点不下降。因此，确定化合物 7 为奇壬醇
(kirenol)。
参考文献:
［1］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典:2010 年版一部
［S］． 北京:中国医药科技出版社，2010:345．
［2］ 张喜奎． 大剂量豨莶草为主治疗胸痹［J］． 中医杂志，
2001，42(4):201．
［3］ 徐首航． 大剂量豨莶草为主治疗冠心病体会［J］． 中国中
医急症，2009，18(6):999-1000．
［4］ 陈 丽． 豨莶草汤治疗高血压病 28 例［J］． 中国中医药科
技，1999，6(6) :420．
［5］ 许凤珍． 茺蔚子、豨莶治疗高血压病 255 例［J］． 中国社区
医生，2002，18(17):41-42．
［6］ 王达一． 九制豨莶丸治疗中风后遗症的临床观察［J］． 江
苏中医，1988，4(12):21．
［7］ 侴桂新，金若敏，王峥涛，等． 豨莶草抗血栓有效组份成分
分析［J］． 中药材，2006，29(3) :235-237．
［8］ 王发辉，冯起校，于 斌，等． 腺梗豨莶 IIA对深静脉血栓
形成大鼠 vWF及 ICAM-1 水平的影响［J］． 辽宁中医药大学
学报，2012，14(2) :69-71．
［9］ 许凤清，刘金旗，王举涛，等． 高效液相色谱法同时测定
豨莶草中豨莶苷和奇壬醇的含量［J］． 中成药，2011，33
(8) :1444-1446．
［10］ 刘金旗，汪路明，钟 昼． 豨莶草化学成分的研究［J］． 安
徽中医学院学报，2004，23(增刊) :25-26．
［11］ 杨满琴，许凤清，刘金旗． 紫外分光光度法测定豨莶草中
总萜类成分含量［J］． 安徽中医学院学报，2008，27(2) :
46-47．
［12］ Hiroyuki M，Makiko N，Masafumi O，et al． Four new ent-kau-
rane diterpenoids from the fruits of Annona cherimola［J］． Chem
Pharm Bull，2010，58(5) :765-768．
［13］ Xiong J，Ma Y，Xu Y． Diterpenoids from Siegesbeckia pubescens
［J］． Phytochemistry，1992，31(3) :917-921．
［14］ Tanaka N，Murakami T，Saiki Y，et al． Chemical and chemot-
axonomical studies of Filices LIII． Chemical studies on the con-
stituents of Dipteris Conjugata Ｒeinw［J］． Chem Pharm Bull，
1985，33:152-157．
［15］ 傅宏征，楼之岑，蔡少青，等． 毛梗豨莶化学成分的研究
(Ⅰ) ［J］． 中国药学杂志，1998，33(3) :140-142．
［16］ Wang Ｒ，Chen W H，Shi Y P． Ent-kaurane and ent-pimarane
diterpenoids from Siegesbeckia pubescens［J］． J Nat Prod，
2010，73(1) :17-21．
［17］ 陈柳生，周伟明，王如意，等． 五色梅黄酮类化学成分研
究［J］． 中国实验方剂学杂志，2013，19(22) :100-102．
4542
2015 年 11 月
第 37 卷 第 11 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
November 2015
Vol． 37 No． 11