全 文 ：［收稿日期］ 20140117(010)
［基金项目］ 广西高校科学技术资助项目(LX2014668)
［第一作者］ 黄红泓，硕士，讲师，从事药学和中药学的教学和科研工作，Tel:0771-4736399，E-mail:929762704@ qq． com
［通讯作者］ * 柳贤福，硕士，助教，从事药学和中药学的教学和科研工作，Tel:0771-4736066，E-mail:176336350@ qq． com
广西产毛果算盘子的 HPLC指纹图谱
黄红泓1，甄汉深2，柳贤福1*
( 1. 广西中医药大学 赛恩斯新医药学院，南宁 530001; 2. 广西中医药大学，南宁 530001)
［摘要］ 目的:采用 HPLC研究广西不同产地毛果算盘子的指纹图谱。方法:采用 Hypersil C18柱(4. 6 mm × 250 mm，
5 μm) ，流动相甲醇(A)-0. 2%磷酸(B)梯度洗脱(0 ～ 7 min，10%A;7 ～ 15 min，10% ～ 22% A;15 ～ 20 min，22% ～ 30% A;20 ～
30 min，30% ～40%A;30 ～ 45 min，40%A) ，检测波长 270 nm，柱温 20 ℃，流速 1. 0 mL·min －1，分析时间 45 min。分析了 10 批
毛果算盘子药材的 HPLC指纹图谱。应用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)计算相似度。结果:建立了广西产毛
果算盘子的指纹图谱，且相似度较好，根据相似度分析确定了 9 个构成毛果算盘子药材指纹图谱的特征峰。结论:该方法简
单、稳定、重复性好，可用于毛果算盘子药材的质量控制。
［关键词］ 毛果算盘子;高效液相色谱;指纹图谱
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2014)23-0060-03
［doi］ 10． 13422 / j． cnki． syfjx． 2014230060
HPLC Fingerprints of Glochidion eriocarpum in Guangxi
HUANG Hong-hong1，ZHEN Han-shen2，LIU Xian-fu1*
(1. Faculty of Chinese Medical Science，Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530001，China;
2. Faculty of Pharmacy，Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530001，China)
［Abstract］ Objective:The study aimed to establish the chromatographic fingerprint of Glochidion
eriocarpum by HPLC． Method:The fingerprint was investigated using Hypersil C18 (4. 6 mm × 250 mm，5μm)
column． The mobile phase was consisted of methanol (A)and 0. 2% phosphoric acid (B) ，in gradient elution for
0-7 min，10% A;7-15 min，10% -22% A;15-20 min，22% -30% A;20-30 min，30% -40% A;30-45 min，
40%A． The detection wavelength was set at 270 nm，and column temperature was set at 30 ℃，The flow rate was
1 mL·min －1 ． The fingerprints of 10 batches of G． eriocarpum were analyzed in 45 min． The similarity was analyzed
by similarity evaluation system for chromatographic fingerprint of TCM (version 2004 A)． Ｒesult:The HPLC
fingerprint of Guangxi G． eriocarpum was obtained with good similarity． Conclusion:The method was simple，
reproducible and can be used in quality control for G． eriocarpum．
［Key words］ Glochidion eriocarpum;HPLC;fingerprint
毛果算盘子别名毛七公、漆大伯、两面毛、漆大
姑。具有驱风利湿、散瘀、止血、消肿的功效，用于治
急性胃肠炎、痢疾、风湿关节痛、跌打损伤、创伤出
血、湿疹、漆疮、皮炎［1］。其含有酚类、鞣质类［1-3］、
三萜类化合物以及微量元素［1-3］。近年来随着研究
工作的不断深入，在生药学、有效成分等方面已获得
了新的研究成果。韦松基等［4］对毛果算盘子和算
盘子的显微特征进行了深入的研究和比较。刘布鸣
等［5］对广西漆大姑进行薄层色谱研究，表明漆大姑
药材样品色谱中在与没食子酸对照品色谱相应的位
置上显相同颜色斑点。刘布鸣等［6］从漆大姑中分
离出没食子酸类化合物，亦有学者从中分离得三萜
类化合物和挥发油类。目前尚未发现有文献报道毛
果算盘子指纹图谱研究，本课题参照《中药注射剂
图谱研究的技术要求》，研究并建立毛果算盘子药
材指纹图谱的测定条件及方法，得到对照图谱。本
·06·
第 20 卷第 23 期
2014 年 12 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 23
Dec．，2014
实验采用 HPLC研究广西产毛果算盘子药材的指纹
图谱，可为该药材的质量评价和控制提供科学依据。
1 仪器与试药
1200 系列高效液相色谱仪(美国安捷伦公司) ，
LG16-W型高速微量离心机(北京医用离心机厂) ，
Millipore Simplicity-185 型超纯水仪(美国密里博公
司) ，BP211D型电子分析天平(德国赛多利斯)。没
食子酸(中国食品药品检定研究院，批号 110831-
200803)。甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂为分析
纯。毛果算盘子药材于 2012 年春季采自广西 10 个
地区，采集药材地上部分 3 ～ 5 kg，晒干，分别经广西
中医药大学宁小清副教授及广西中医药大学赛恩斯
新医药学院生药教研室苑敏副教授鉴定均为大戟科
植物毛果算盘子 Glochidion eriocarpum 的干燥地上
部分，见表 1。
表 1 毛果算盘子药材的来源
No． 产地(采集时间) No． 产地(采集时间)
1 广西藤县太平镇(2012年4月) 6 广西蒙山县(2012年 4月)
2 广西横县(2012年4月) 7 广西藤县濛江镇(2012年4月)
3 广西南宁市(2012年4月) 8 广西梧州市(2012年 4月)
4 广西钦州市(2012年4月) 9 广西柳州市(2012年 4月)
5 广西桂林市(2012年4月) 10 广西河池市(2012年 4月)
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Hypersil C18色谱柱(4. 6 mm × 250
mm，5 μm) ，流动相甲醇(A)-0. 2%磷酸(B)梯度洗
脱(0 ～ 7 min，10%A;7 ～ 15 min，10% ～22%A;15 ～
20 min，22% ～ 30% A;20 ～ 30 min，30% ～ 40% A;
30 ～ 45 min，40% A) ，流速 1 mL·min －1，检测波长
270 nm，柱温 20 ℃，进样量 5 μL。
2. 2 溶液的制备 取没食子酸对照品 1 mg，精密
称定，置 25 mL量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得
对照品溶液。取毛果算盘子1 g，精密称定，准确加
入甲醇 40 mL，称重，静置12 h，超声提取 40 min，放
冷，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，滤液用乙酸
乙酯萃取 2 次，每次20 mL，合并乙酸乙酯萃取液，
挥干，用甲醇 20 mL溶解，滤过，取续滤液于离心管，
12 000 r·min －1离心 10 min，即得供试品溶液。
2. 3 精密度试验 取 S1 供试品溶液，按 2. 1 项条
件连续进样 6 次，记录色谱图，分别对共有峰的相
对保留时间和相对峰面积进行考察。结果表明，
各共有峰的相对保留时间 ＲSD 0. 2% ～ 0. 5%，相
对峰面积 ＲSD 1. 5% ～ 2. 0%。符合指纹图谱分析
要求。
2. 4 重复性试验 取 S1 供试品，分别制备 6 份供
试品溶液，记录色谱图，对共有峰的相对保留时间和
相对峰面积进行考察。结果表明，各共有峰相对保
留时间 ＲSD 0. 5% ～ 0. 8%，相对峰面积 ＲSD
1. 1% ～2. 7%，符合指纹图谱分析要求。
2. 5 稳定性试验 取 S1 供试品制备供试品溶液，
按 2. 1 项色谱条件分别于 0，2，4，6，12，24 h 时进
样，记录色谱图，考察其共有峰的相对保留时间和相
对峰面积。结果表明，各共有峰相对保留时间 ＲSD
0. 6% ～ 0. 9%，相对峰面积 ＲSD 1. 4% ～ 1. 9%，表
明供试品溶液在 24 h内稳定性良好。
2. 6 指纹图谱与共有峰的确定 采用国家药典委
员会颁布的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》
2004A版对指纹图谱的相关参数进行自动匹配，标
定药材的共有指纹峰 9 个，生成毛果算盘子药材的
对照指纹图谱(图 1)。经与对照品比对，指认其中
的 1 号峰为没食子酸。结果表明，其中有 9 个主要
色谱峰(占总峰面积 90%以上)是 10 批毛果算盘子
药材所共有的。没食子酸是毛果算盘子的活性成
分，指纹图谱中 1 号为没食子酸吸收峰，在各个不同
来源的毛果算盘子药材样品中均含有此峰且较稳
定，故选择为参照峰 S，各共有指纹峰的 tＲ 和相对峰
面积统计结果见表 2，3。10 批样品的 HPLC 指纹图
谱叠加图(图 2) ，S1 ～ S9 相似度分别为 0. 912，
0. 906，0. 948，0. 925，0. 903，0. 970，0. 970，0. 921，
0. 950，均 ＞ 0. 9，表明相似度良好。
1. 没食子酸
图 1 毛果算盘子药材的共有模式
图 2 10 批毛果算盘子样品 HPLC指纹谱
·16·
黄红泓，等:广西产毛果算盘子的 HPLC指纹图谱
表 2 10 批毛果算盘子药材指纹图谱共有峰的相对保留时间
峰号
药材批号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
平均值 ＲSD /%
1 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 0. 0
2 2. 68 2. 65 2. 64 2. 67 2. 65 2. 68 2. 66 2. 68 2. 65 2. 69 2. 66 0. 6
3 3. 04 3. 02 3. 02 3. 03 3. 02 3. 04 3. 03 3. 06 3. 02 3. 05 3. 03 0. 5
4 3. 83 3. 80 3. 78 3. 82 3. 80 3. 83 3. 80 3. 82 3. 78 3. 85 3. 81 0. 6
5 4. 09 4. 06 4. 04 4. 08 4. 05 4. 09 4. 08 4. 10 4. 04 4. 08 4. 07 0. 5
6 4. 35 4. 32 4. 30 4. 33 4. 29 4. 35 4. 31 4. 35 4. 30 4. 35 4. 32 0. 6
7 5. 26 5. 21 5. 19 5. 23 5. 20 5. 26 5. 23 5. 32 5. 19 5. 28 5. 24 0. 8
8 5. 81 5. 77 5. 73 5. 79 5. 75 5. 81 5. 79 5. 80 5. 74 5. 82 5. 78 0. 6
9 6. 87 6. 82 6. 79 6. 85 6. 81 6. 88 6. 84 6. 88 6. 79 6. 89 6. 84 0. 5
表 3 10 批毛果算盘子药材指纹图谱共有峰的相对峰面积
峰号
药材批号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
平均值 ＲSD /%
1 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 1. 00 0. 0
2 0. 50 0. 52 0. 55 0. 62 0. 51 0. 52 0. 43 0. 61 0. 54 0. 50 0. 53 11. 5
3 0. 25 0. 26 0. 22 0. 45 0. 31 0. 29 0. 29 0. 37 0. 30 0. 28 0. 30 10. 2
4 1. 28 1. 31 1. 30 2. 03 1. 31 1. 37 1. 24 1. 24 1. 57 1. 33 1. 40 9. 2
5 0. 69 0. 67 0. 68 1. 33 0. 67 0. 79 0. 57 0. 91 0. 74 0. 59 0. 77 17. 8
6 1. 35 1. 34 1. 37 2. 36 1. 16 1. 47 1. 44 1. 94 1. 23 1. 63 1. 53 19. 1
7 0. 42 0. 38 0. 40 0. 64 4. 30 2. 74 3. 88 6. 26 5. 71 3. 80 2. 85 29. 4
8 0. 58 0. 58 0. 58 0. 99 0. 58 0. 63 0. 59 0. 79 0. 62 0. 64 0. 66 12. 0
9 0. 64 0. 66 0. 60 1. 13 0. 71 0. 48 0. 57 0. 64 0. 56 0. 91 0. 69 23. 5
3 讨论
本文用二极管阵列检测器获得了三维全波长指
纹图谱。对比 230，254，270，320 nm 等波长下的指
纹图谱，结果在 270 nm处各色谱峰均有较好的紫外
吸收，色谱信息丰富，基线较平，且没食子酸峰面积
较大，故选择 270 nm作为测定波长。本文还曾考察
了甲醇-水，乙腈-水，甲醇-水-磷酸，乙腈-水-磷酸等
不同溶剂，采用等度洗脱的方法进行检测，结果表明
等度洗脱时图谱中色谱峰较少，各色谱峰严重重叠
且不分开，分离效果差。甲醇-水系统，甲醇-0. 2%
磷酸系统梯度洗脱色谱图谱峰形较好，出峰信号较
多，分离较好，基线较平稳。但考虑到甲醇-水系统
色谱峰出现拖尾现象，故采用甲醇-0. 2%磷酸系统
进行梯度洗脱。比较 20，25，30 ℃，不同的柱温条
件，在其他色谱条件相同情况下，20 ℃柱温下，各峰
分离效果最好，考察 0. 8，1. 0，1. 2 mL·min －1不同流
速，结果表明采用 1. 0 mL·min －1为好。综上所述，
10 批毛果算盘子的 HPLC 指纹图谱相似度大于
0. 9，找到 9 个特征峰，表明所建立的毛果算盘子指
纹图谱具有专属性，可为毛果算盘子药材的质量控
制提供可靠的科学依据。
［参考文献］
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术出版社，2006:257．
［2］ 广州市药品检验所．农村中草药制剂技术［M］．北京:
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［5］ 刘布鸣，陈荣光，韦汝武，等． 漆大姑中没食子酸的分
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［6］ 刘布鸣，陈荣光，蔡全玲． 漆大姑化学成分的初步研究
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［责任编辑 顾雪竹］
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第 20 卷第 23 期
2014 年 12 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 23
Dec．，2014