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覆盆子糖蛋白粗提物体内抗氧化作用研究



全 文 :!#$
牛付阁!,王纪平,王# 芳!,戴成国!,段玉峰!,!
(!陕西师范大学食品工程与营养科学学院,陕西西安 #!$$%&;
&国药集团西北医药有限公司,陕西西安 #!$$$!)
摘’ 要:研究覆盆子糖蛋白粗提物对小鼠体内抗氧化作用。采用试剂盒测定小鼠血清、肝脏、脑中的丙二醛(()*)含
量、超氧化物歧化酶(+,))、谷胱甘肽过氧化物酶(-+./01)和过氧化氢酶(2*3)的活性。实验结果表明:覆盆子糖蛋
白粗提物可以提高受试小鼠血清、肝脏、脑中 +,)、2*3及 -+./01的活性,而降低这些组织中 ()* 的含量。说明覆
盆子糖蛋白具有一定的抗氧化活性。
关键词:覆盆子,糖蛋白,体内抗氧化,动物实验
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中图分类号:3+&$!!’ ’ ’ ’ 文献标识码:*’ ’ ’ ’ 文 章 编 号:!$$&/$N$%(&$!$)!&/$!NO/$N
收稿日期:&$$P/!&/$#’ !通讯联系人
作者简介:牛付阁(!PQN/),男,硕士研究生,研究方向:植物有效成分
开发与利用。
’ ’ 覆盆子为蔷薇科(!#$%&$&)悬钩子属(!’(’# ))
植物华东覆盆子(!’(’# %*+,-++ .’)的果实,含有柠
檬酸、苹果酸、黄酮类、生物碱、多糖和多种微量元
素。有益肾,固精缩尿之功效,用于肾虚遗尿、小便
频数、阳萎早泄、遗精、滑精等症[!/O]。近年来,国内
有关覆盆子的文献报道绝大多数集中在风湿性关节
炎、抗诱变、肾虚遗尿,此外还用于治疗糖尿病和心
血管系统疾病等方面[R/#]。国外文献中大多数为覆
盆子食品方面的研究。有关药理学、化学方面的研
究较少[Q/!!]。本文主要以正常小鼠作对照,用不同剂
量的覆盆子糖蛋白粗提物喂养小鼠,各组自由饮水,
自由摄食,饲喂 O 周后,禁食 !&C,摘除眼球进行眼眶
采血,并解剖取肝、脑组织测定丙二醛(()*)含量,
超氧化物歧化酶( +,))、谷胱甘肽过氧化物酶
(-+./01)和过氧化氢酶(2*3)的活性来研究覆盆
子糖蛋白的体内抗氧化作用。以期为开发覆盆子新
药和活性成分提供理论依据。
!# 材料与方法
!=!# 材料与仪器
覆盆子’ 购于西安市药材市场,经生药学鉴定
为蔷薇科悬钩子属植物华东覆盆子(!’(’# %*+,-++
.@)的果实;S2T小鼠’ 购于西安第四军医大实验动
物中心;丙二醛(()*)试剂盒、谷胱甘肽/过氧化物
酶(-+./ 01)试剂盒、超氧化物歧化酶( +,))试剂
盒、过氧化氢酶(2*3)试剂盒 ’ 均为南京建成生物
工程研究所生产;其余试剂’ 均为国产分析纯。
..U/&!2F/%$$ 型电热恒温水槽、)-J/P$#NV/!
电热鼓风干燥箱 ’ 上海福玛实验设备有限公司;
T;/R&**型旋转蒸发仪’ 上海亚荣生化仪器厂;+.W
/)(SSS)型循环水式真空泵’ 上海博讯实业有限公司医
疗设备厂;Q$$V型离心机’ 上海安亭科学仪器厂;微量
移液器’ 日本 DS2.STX,公司;LJY/SSV型低速大容量
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2010.12.106
!#$
多管离心机! 上海安亭科学医学仪器厂;# 新世纪紫
外可见分光光度计 ! 北京普析通用仪器有限公司;
$%&’(型高速粉碎机 ! 河北省黄骅市新兴电器厂;
)*+,(-型电子分析天平! 上海精密科学天平厂。
!#$ 实验方法
+.,.+! 覆盆子糖蛋白粗提物的制备[+,&+-]! 将烘干的
覆盆子,粉碎过 ’( 目筛,用石油醚 ’(/回流至无色,
0(/水浴浸提 12,以1(((3 4 567离心 ,(567,滤去固体
残渣,滤液真空浓缩至一定体积后加 1 倍体积的 809
乙醇沉淀,低温静置过夜,离心,取沉淀物。将沉淀物
溶于少量蒸馏水重复 ,次沉淀步骤。然后再加入沉淀
物 , : 1 倍体积的无水乙醇,搅拌均匀,离心
(-(((3 4 567)0567,倾弃上清液,再依次加入丙酮、无水
乙醚,按此操作洗涤脱水各一次。然后放置 1(/真空
干燥箱中让溶剂挥发,即得干燥的覆盆子糖蛋白粗品。
+.,.,! 动物的分组及饲喂[+1&+0]! 选取健康 ;<= 小鼠
1( 只,随机分为对照组和低、中、高剂量组,每组 +(
只,雌雄各半。正常对照组小鼠每天灌服生理盐水,
低、中、高剂量组每日给予覆盆子糖蛋白粗提物分别为
,((、1((、’((5> 4 ?>·@。各组自由饮水,自由摄食,饲
喂 1周后,禁食 +,2,摘除眼球进行眼眶采血,并解剖
取肝、脑、肾、胸腺、脾、心脏等器官组织,冷冻备用。
+.,.-! 血清及组织匀浆的制备 ! 血清的制备:取血
试管预先加入肝素抗凝剂,并低温烘干。取血后,摇
匀,即刻再放回冰浴中冷却,并于 -(((3 4 567 离心
0567,分离血清,然后将血清倾入另一洁净试管低温
保存备用。
组织匀浆的制备:取适量湿组织加生理盐水按
%AB C +A0 在冰浴条件下用组织匀浆机制成匀浆,并
于 ’(((:+((((3 4 567 离心 +(567,将上清液倾入另一
洁净试管低温保存备用。
+.,.1! 指标测定! 按照试剂盒指定的方法测定丙二醛
(DE*)含量,超氧化物歧化酶(FGE)活力,谷胱甘
肽&过氧化物酶(HFI&JK)活力和过氧化氢酶(<*)
活力。
+.,.0 ! 数据统计 ! 实验结果以 L FE 形式表示,
FJFF+-.( 统计软件进行统计比较。
#$ 结果与分析
#!$ 小鼠器官重量变化
由表 + 可以看出,经过低、中、高剂量组饲喂四
周的小鼠,胸腺、脾、心、肾、肝脏、脑组织等器官或组
织的重量和正常对照组的对应器官相比,有所增加,
但量效关系不显著。初步可以证明,饲喂覆盆子糖
蛋白对小鼠身体没有损伤。但深入的毒理实验有待
于进一步研究。
表 +! 小鼠各器官重量变化(+M L FE,7 C +()
器官 对照组 低剂量组 中剂量组 高剂量组
胸腺(5>) 8,.#- L#( 80.N, L#N 8N.+1 L0, +(-.(8 L0+
脾(5>) ++-.8# L’( +,1.1’ L00 +,1.01 L8( +,-.8N L-8
心(5>) ,N1.-+ L-8 ,’0.0( L-# ,’1.#, L-- ,8N.10 L+N
肾(5>) 0+,.-- L#, 0-,.+N L-( 01,.1’ LN- 00,.-1 L’-
肝脏(5>) +-0(.++ L-8 +-18.-# L8( +-0+.(’ LN1 +-1N.+N L+0
脑组织(5>) 81(.0, L’+ 81#.8+ L8+ 8N-.#N L-( 80-.-- L10
##$ 丙二醛(%&’)含量的测定
从图 + 可以看出,三个剂量组的小鼠血清、肝脏
和脑组织中的丙二醛(DE*)的含量均低于对照组小
鼠对应的含量。其中低、中、高三个剂量组血清 DE*
含量均显著低于正常组含量(J O (.(0);高剂量组肝
脏 DE*含量极显著低于正常组含量(J O (.(+);中、
高剂量组脑组织 DE* 含量极显著低于正常组含量
(J O (.(+)。说明覆盆子糖蛋白粗提物具有明显的
抗氧化作用,并且呈一定的量效关系。
图 +! 覆盆子糖蛋白粗提物对小鼠体内
相关组织中 DE*活性的影响
注:与对照组比较,!表示 P O (.(0,差异显著;
!!表示 P O (.(+,差异极显著;图 ,:图 1 同。
#($ 超氧化物歧化酶()*&)活力的测定
从图 , 可以看出,随着剂量的增大,血清、肝组
织和脑组织中总超氧化物歧化酶(&FGE)活力与正
常对照组比较均增大。其中低剂量组与正常对照组
无显著差异。中、高剂量组与正常对照组比较均有
极显著差异(J O (.(+)。说明服用覆盆子糖蛋白粗
提物具有提高 FGE活性的作用。
图 ,! 覆盆子糖蛋白粗提物对小鼠体内
总超氧化物歧化酶(&FGE)活力的影响
#+$ 谷胱甘肽,过氧化物酶(-).,/0)活力的测定
由图 - 可以看出,随着剂量的增大,小鼠血清、
肝组织和脑组织中 HFI& JK 活力越来越高。其中
中、高剂量组血清 HFI&JK活力和脑组织 HFI&JK活
力均极显著高于正常组(J O (.(+),低剂量组显著高
于正常组(J O (.(0);高剂量组肝组织中 HFI&JK 活
力极显著高于正常组(J O (.(+),中剂量组肝组织中
HFI&JK活力显著高于正常组(J O (.(0)。这说明服
用一定剂量的覆盆子糖蛋白粗提物能提高小鼠体内
的 HFI&JK活性,并且 HFI&JK的活性增强的趋势与
测定范围内服用的剂量成正比的关系,因此覆盆子
糖蛋白具有明显的抗氧化功能。
#1$ 过氧化氢酶(2’3)活力的测定
由图 1 可以看出,三个剂量组血清中 <* 的活
性都比对照组要大,高剂量组具有极显著的差异
!#$
图 ! 覆盆子糖蛋白粗提物对小鼠体内
谷胱甘肽#过氧化物酶($%&#’()活力的影响
(’ ) *+*,),中低剂量组与对照组没有显著差异;随
着剂量的增大,肝脏组织中 -./ 活力与正常对照组
比较有所增大,低剂量组与正常组的差异性不是很
明显;中、高剂量组与正常组比较均有极显著的差异
(’ ) *+*,)。这说明服用一定剂量的覆盆子糖蛋白
粗提物能提高 -./的活性。
图 0 覆盆子糖蛋白粗提物对小鼠体内
过氧化氢酶(-./)活力的影响
! 结论
覆盆子糖蛋白粗提物可以有效地降低小鼠血
清、肝组织、脑组织中 12. 的含量,特别是高剂量组
都达到了极显著差异性;小鼠血清、肝组织、脑组织
中的 $%&#’(的活力和 %32活力都比对照组有所提
高,中、高剂量组几乎全部与对照组相比有极显著差
异;中、高剂量组小鼠的肝组织中 -./活力与对照组
相比有极显著差异。说明覆盆子糖蛋白具有一定的
抗氧化性。
参考文献
[,]中国植物志编委会 +中国植物志[1]+北京:科学出版社,
,456,!7 卷:,*#8,5+
[8]顾利红,徐国均,徐珞珊 +中药覆盆子类的生药学研究
[9]+中国药科大学学报,,440,86(0):,4!#,45+
[!]游孟涛 +覆盆子补肾活性成分研究[2]+陕西:第二军医大
学,8**4+
[0]陈明来,李丽平 +补肾益精覆盆子[ 9]+药膳食疗,8**6
(0):0,+
[6]付德润,钟承民,郭伟,等 +覆盆子抗诱变作用的实验研究
[9]+中国全科医学杂志,,445,,(,):!6+
[:]刘杰 +覆盆子果实化学成分及对肾阳虚小白鼠药理作用
的研究[2]+辽宁:沈阳药科大学,8**6+
[7]皮慧芳,吴继洲 +覆盆子的化学成分与药理作用研究述要
[9]+中医药学刊,8**!(,8):8,:4#8,:4,8,70+
[5]/;<;=; /;=;>?@,A;B;CDE; AF@=G,A@H;?;E;,FH ;I+ JK;LM;@MF> REGC IF;SF> GR !#$ %&’()’’
[9]+’?NHG#Q?FC@>HEN,,450,8!(!)::,6#:8,+
[4]徐振文,赵娟娟 +覆盆子的化学成分[9]+中草药,,45,,,8
(:):,4+
[,*]/;<;=; /;=;>?@,AG?M; &@EG>?@+TDLD>G>@MF(!#2#PIDQG>NI
F>HFE GR ,! # 3# !# 2# PIDQG>NI # >HFS@GI),; >BFFH OE@TDLD> Q?@;QF;F)[ 9]+.PE@Q U@GI -?FC,,45,,06
(4):8,:6#8,::+
[,,]1NE; ’;E>G<>,1@Q?FIF %@CO>G<,/FEE@ ’GOLFEEN IF;R
; FRRFQH G< I;LGDE:%;RFHN ;HE;I@;< -GIIFPF
GR 1@MB@SF> V[,8]王芳,杨航娟,段玉峰 +覆盆子糖蛋白提取工艺的研究
[9]+安徽农业科学,8**4(5):!76:#!765+
[,!]梁婧婧 +甘薯水溶性糖蛋白的提取纯化及降血脂机理的
研究[2]+中国博士学位论文全文数据库,8**4+
[,0]金玲,陈婉如 +动物饲养实验方案设计原则及实验数据
分析方法[9]+江西饲料,8**7(:):,*#,8+
[,6]徐淑云 +药理实验方法学[1]+北京:人民卫生出版社,
,44,:
$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$
,,#8*!+
(上接第 ,!! 页)
进行 /’.测试,发现从人的咀嚼并不能识别出微量
成分对其质构的差异,但通过感官评定可以看出,不
同含量的微量成分的葛根淀粉在口感上具有较大不
同,微量成分含量越高,凝胶所具有的葛根特殊香味
越大,色泽越接近葛根汁的颜色。因此,在以后的葛
根淀粉新产品的研发过程中可以采用不同纯度或不
同用途的葛根淀粉,一方面可以降低生产成本,原料
成本;另一方面也可以防止过多葛根有效功能性成
分的流失,保证产品品质更营养健康。
另外,,+*W以下的葛根素添加量对葛根淀粉凝
胶质构的硬度和黏性有一定影响,因此,对硬度和黏
性有较高要求的产品需注意葛根素含量。但纯葛根
素无色无味,又是葛根中的功能成分,对利用葛根淀
粉作为原料加工而成的产品可以考虑其为特征性物
质存在,成为产品开发的一大特色和亮点。
参考文献
[,]KNG< U $,-?;CO;PGEN ;@<>HEDCF?@O> GR HF(HDEF GR QGG=FM E@QF REGC >FIFQHFM
QDIH@S;E> ;H?;ESF>H ?;[9]+-FEF;I -?FC@>HEN,
8***,77::0#:4+
[8]张力田 +变性淀粉[1]+广州:华南理工大学出版社,,448:
8#,!+
[!]T -D@ - $ 3;HF>+ /?F FRRFQH GR ;CNI;>F # I@O@M QGCOFI>
RGEC;H@G< G< FD>QFOH@L@I@HN GR >;PG >H;EQ?[ 9]+ ZGGM
-?FC@>HEN,,444(:6):0,7#086+
[0]满晨,于小英 +高效液相色谱法测定葛根中葛根素的含量
[9]+中国饲料,8**5(,*):!:#!7+
[6]1;QT@HQ?@F Z+’?N>@QGQ?FC@Q;I OEGOFEH@F> GR B?F;H OEGHF@<> @<
EFI;H@G< HG RD,,448,!::,#57+
[:]李里特 +食品物性学[1]+北京:中国农业出版社,8**,:
4:#,**+
[7]\>FE 1;HFC>,%DEEFN,
J[5 ]%YQYF><@;= . %+-I;>>@R@Q;H@G< GR HF(HDE;I Q?;E;QHFE@>H@Q>[ 9]+9
ZGGM %@Q,,4:!,85(0):!55+