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[ 基金项目] 国家自然科学基金项目(编号:30960495)江西省卫生厅中医药科研计划项目(编号:2008B007)　[ 作者简介] 刘建群 ,男 ,博士 ,副
教授 ,电话:0791-7118657 , E-m ail:liu5308@sina.com
凤尾草对雷公藤甲素的减毒作用
刘建群1 ,洪沁1 ,张维1 ,施旻2 ,张锐1 ,顾兵3 　(1.江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室 ,江西 南昌 330004;2.
江西中医学院基础医学院 ,江西 南昌 330004;3.江西科技师范学院药学院 ,江西 南昌 330013)
[ 摘要] 　目的:研究凤尾草对雷公藤甲素的减毒作用以及免疫抑制和抗炎镇痛活性的影响。方法:通过比较雷公藤甲素单用
及与凤尾草联用对小鼠急性毒性 、肝组织形态和大鼠肝功能的影响来评价凤尾草对雷公藤甲素的减毒作用;采用噻唑兰
(M TT)法测定雷公藤甲素单用及与凤尾草联用对小鼠 T 、B淋巴细胞增殖的影响;采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验研究凤尾
草对雷公藤甲素抗炎作用的影响;采用热板法和扭体法研究凤尾草对雷公藤甲素镇痛作用的影响。结果:雷公藤甲素联用凤
尾草后 LD50增大了约 1 倍 , 肝细胞损伤明显减轻 , A LT 和 AST 明显降低;雷公藤甲素单用及与凤尾草联用均能显著抑制小鼠
T 、B 淋巴细胞的增殖和二甲苯致小鼠耳廓肿胀 , 并均有明显的镇痛作用 , 但两者作用效果差异无显著性。结论:联合运用凤
尾草可降低雷公藤甲素毒性并基本保持其免疫抑制和抗炎镇痛活性。
[ 关键词] 　凤尾草;雷公藤甲素;减毒作用;免疫抑制;抗炎;镇痛
[中图分类号] R285.5　　[ 文献标识码] A　　[文章编号] 1001-5213(2010)06-0443-04
Studies on the toxicity-reducing and activity-maintaining effects of triptolide combined with
Pteris multi f ida
LIU Jian-qun1 , HONG Qin1 , ZHANG Wei1 , SHI M in2 , ZHANG Rui1 , GU Bing3(1.Key Labo rato ry of Mod-
ern P repa ration o f TCM , Ministry o f Education , Jiangxi Univer sity of T raditiona l Chinese Medicine , Jiangx i Nanchang
330004 , China;2.Depa rtment of P reclinical medicine , Jiangxi Unive rsity of T raditional Chinese M edicine , Jiangxi Nanchang
330004 , China;3.Depa rtment of Pharmacy , Jiangxi Science and Techno lo gy No rmal Univer sity , Jiangx i Nanchang 330013 ,
China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To investig ate the to xicities and activities of triptolide combined with P teris multifida Po ir..METH-
ODS　Toxicity of tripto lide combined with Pteris multi f ida w ere eva luated w ith LD50 , morpholog y o f hepatic tissue and liver
function.Activities of triptolide combined with Pteris multi f ida w ere evalua ted with g row th inhibiting effects o f bo th T and B
lymphocy tes detected by M TT assay , swelling o f mouse auricle caused by dimethy l benzene and analge sic effect detected by ho t
plate test and w rithing method.RESULTS　The LD50 o f triptolide was significantly increa sed meanwhile ALT and AST were
significantly decreased w hile combined w ith Pteris multi f ida.Bo th triptolide and t riptolide combined w ith P te ris multifida can
significantly inhibit the g rowth of T and B lymphocy tes , swelling of mouse auricle caused by dimethyl benzene and allevia te pain
inho t plate test of mouse.CONCLUSION　Pteris multi f ida can reduce the to xicity o f triptolide and maintain its immune sup-
pre ssion , antiinflamma to ry and analge sic activities.
KEY WORDS:Pteris multi f ida;tripto lide;attenuation;immune suppression;anti-inflamma tory;analg esia
　　雷公藤甲素(T riptolide , TP)是从雷公藤中分
离出的环氧二萜内酯化合物 ,是雷公藤的主要有效
成分之一 ,具有显著的免疫抑制和抗炎镇痛等作用 ,
在临床上主要用于治疗类风湿性关节炎 、红斑狼疮 、
皮肤病 、肾炎和器官排斥反应等 50多种疾病[ 1] 。但
它的毒性很强 ,小鼠口服 LD50约为0.8 mg·kg-1 ,急
性中毒主要表现为肝损伤和胃肠道毒性 ,长期毒性
表现为抑制骨髓 、损害心脏和肾脏等器官[ 2-3] 。雷公
藤甲素的有效剂量与中毒剂量极为相近 ,大大限制
了它的临床应用。因此 ,研究开发雷公藤甲素的减
毒持效方法对于提高雷公藤甲素的临床应用安全性
具有重要的实际意义。民间有用凤尾草(P teris
mut i f ida)解误食雷公藤中毒的报道[ 4-6] ,雷公藤甲
素是雷公藤的主要毒性成分之一 ,因此我们推测凤
尾草可能通过拮抗雷公藤甲素毒性而发挥解毒作用 。
本实验首次研究了凤尾草对雷公藤甲素的急性毒性 、
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免疫抑制和抗炎镇痛活性的影响 ,现报道如下。
1　材料
SABA PM4000 全自动生化分析仪(意大利
AMS 公司);Multiskan M k3自动酶标仪(上海热电
仪器公司);雷公藤甲素(中国药品生物制品检定所 ,
含量≥99%);地塞米松片剂(浙江仙琚制药股份有
限公司);RPM I-1640 培养基及胎牛血清 、双抗
(Gibco公司);LPS 、ConA 及 MT T(Sigma 公司);
药材凤尾草全草于 2007年 9月采自江西省南昌市 ,
由江西中医学院药用植物研究室赖学文教授鉴定为
凤尾草(Pteris mult i f ida Poir .),凭证标本(编号:
070901)保存于江西中医学院现代中药制剂教育部
重点实验室;昆明种小鼠 , ♀♂各半 ,体质量为 18 ～
22 g;SD大鼠 , ♀♂各半 ,体质量为 180 ～ 220 g ,均
由江西医学院实验动物中心提供。
2　方法
2.1　凤尾草水提物(PM)和雷公藤甲素溶液的制
备　取凤尾草药材 ,加 6 ～ 8倍量的水煎煮 ,减压浓
缩得凤尾草水提物。雷公藤甲素溶液用 2%丙二醇
纯化水溶液配制 。
2.2　雷公藤甲素单用及与凤尾草联用对小鼠急性
毒性及肝组织形态的影响　采用改进寇氏法 ,取小
鼠 100只随机分成 10组 ,每组 10 只 , ♀♂各半 ,灌
胃给药 ,给药容量为 20 mL·kg -1 ,单独给药组 TP
剂量分别为0.64 , 0.8 , 1.0 , 1.25 , 1.6 mg·kg-1 , 联
合给药组 TP 剂量分别为 1.25 , 1.6 , 2.0 , 2.5 , 3.1
mg·kg -1 ,并分别加上固定剂量 PM 7 g·kg-1(注:
有关 PM 剂量均以生药量计)。组间剂量之比为 10
∶8 ,给药后观察动物中毒症状 ,记录给药后各组的死
亡率 ,计算 LD50 ,空白组给予等量 2%丙二醇纯化水
溶液 。取上述 3组小鼠肝脏制成常规石蜡切片 ,显
微镜观察肝细胞受损情况 。
2.3　雷公藤甲素单用及与凤尾草联用对大鼠肝功
能的影响　取 SD大鼠 30只 , ♀♂各半 ,随机均分
成 3组:空白组 、TP 单独用药组 、TP +PM 联合给
药组 。给药容量为 10 mL·kg -1 ,单独给药组按 TP
0.7 mg·kg-1剂量给药 ,联合给药组按 TP 0.7 mg·
kg -1 +PM 5 g·kg-1剂量给药 ,空白组给予等量
2%丙二醇纯化水溶液 ,连续 3 d给药 ,每天 2次 ,最
后一次给药后禁食 ,正常饮水 , 1 h 后 ,股动脉取血 ,
3 500 r·min-1 ,5 min ,取血清 ,全自动生化分析仪测
定 ALT 和 AST 。
2.4　雷公藤甲素单用及与凤尾草联用对小鼠 T 、B
淋巴细胞增殖影响　取昆明种小鼠 50 只 , ♀♂各
半 ,随机均分成 5组:空白组 、阳性对照组 、TP 单独
给药组 、TP +PM 联合给药组。单独给药组按 TP
20 mg·kg-1剂量灌胃给药 ,联合给药组按 TP 0.2
mg·kg-1 +PM 7 g·kg-1剂量灌胃给药 ,阳性对照
组按7.5 mg·kg-1剂量给予地塞米松 ,空白组给予
等量 2%丙二醇纯化水溶液 ,给药容量为 20 mL·
kg
-1 ,连续 7 d给药 。采用 MT T 法测定脾淋巴细
胞增殖:小鼠给药 7 d后脱颈处死 ,无菌条件下摘取
脾脏 ,制备成 2×106 mL-1浓度的脾细胞悬液 ,在 96
孔板上每孔加 100 μL 细胞悬液 , 分别加入 ConA
(10 mg·L-1)和 LPS(20 mg·L -1)各 100 μL 。每个
样品设 3 个重复孔 。置 37℃、5% CO2培养箱培养
48 h后 ,每孔加入 10μL MT T(5 g·L-1), 37℃孵育
4h ,离心 , 1 000 r·min-1 , 10 min ,弃上清 ,再每孔加
入 150 μL 二甲基亚砜振荡。在自动酶标仪测 OD
值(λ=492 nm)。
2.5　雷公藤甲素单用及与凤尾草联用的抗炎镇痛
作用比较
2.5.1　抗炎作用比较　小鼠耳郭肿胀实验:取小鼠
30只 , ♀♂各半 ,分为模型组 , TP 单独给药组 , TP
+PM 联合给药组 。模型组灌胃给予等量 2%丙二
醇纯化水溶液 ,单独给药组每日按 TP 0.1 mg·kg-1
剂量灌胃 ,联合给药组每日按 TP 0.1 mg·kg-1 +
PM 7 g·kg-1剂量灌胃给药 ,连续给药 3 d ,给药容
量为 10 mL·kg-1 。末次给药后 1 h ,将 20 μL 二甲
苯涂于小鼠右耳郭两面致炎 ,左耳不涂为对照 ,1 h
后将小鼠处死 ,剪下双耳 ,用直径 6 mm 的打孔器分
别在同一部位打下圆耳片 ,称重 ,以左右耳片质量差
作为肿胀度 ,计算肿胀率。
2.5.2　镇痛作用比较　小鼠热板法致痛实验:调恒
温水浴温度至 55 ～ 56℃,将铁板置于恒温水浴上 ,
预热 10 min。对小鼠进行痛阀值筛选(以 5 ～ 30 s
内舔后足者为及格 , 跳跃者弃之不用), 挑选表现
合格的 30 只小鼠 , 分组 、给药方法及剂量同实验
“2.5.1”项 , 分别在给药前 30 min及给药后 30 ,75 ,
150 min测定各组小鼠的痛阈值(痛阈值为小鼠从
被放到铁板上到其第 1 次舔其后足的时间)。醋酸
扭体法:取小鼠 30 只 , ♀♂各半 , 分组 、给药方法
及剂量同实验“2.5.1”项。末次给药 40 min 后 ,腹
腔注射0.6 %醋酸溶液 0.2 mL/只。记录小鼠 30
min内的扭体次数 ,计算扭体抑制率 。
2.6　统计学处理 　以上实验结果数据以 x ±s表
示 ,采用 SPSS 11.5独立样本 t检验比较组间差异。
3　结果
3.1　雷公藤甲素单用及与凤尾草联用对小鼠急性
毒性及肝组织形态的影响 。单独给药组 LD50为
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1.05 mg ·kg -1(95%置信区间 0.89 ～ 1.19 mg·
kg -1),联合给药组 LD50为2.00 mg·kg -1(95%置信
区间1.83 ～ 2.13 mg·kg -1),联合给药组 LD50增大
约 1倍。单独给药组(TP 1.6 mg·kg-1)出现肝细
胞融解坏死 ,可见核固缩 、核碎裂 ,胞浆空泡变性 ,有
嗜酸小体形成;联合给药组(TP 1.6 mg·kg -1 +PM
7g·kg -1)部分肝细胞浊肿 ,核质轻度浓缩 ,肝细胞
损害较轻 ,见图 1 和图 2;空白组肝细胞正常 ,无变
性 、坏死 ,肝窦无扩张充血 ,肝细胞索围绕中央静脉
呈放射状排列 ,见图 3 。
图 1　雷公藤甲素单独给药组小鼠肝组织切片(HE×200)
Fig 1　H epatic section of mice given w ith t riptolide(HE×200)
图 2　雷公藤甲素与凤尾草联合给药组小鼠肝组织切片(HE×200)
Fig 2　H epatic sect ion of mice given wi th t riptolide com bined ex tract
of Pter is mu lt i f ida(HE×200)
图 3　空白组小鼠肝组织切片(HE×200)
Fig 3　H epatic section of b lan k cont rol g rou p of mice(HE×200)
3.2　雷公藤甲素单用及与凤尾草联用对大鼠肝功
能的影响　单独给药组的 A LT 及 AST 明显高于
联合给药组和空白组 ,差异有显著性(P <0.01),见
表 1。
表 1　雷公藤甲素单用及与凤尾草联用对大鼠肝功能的影
响( x±s , n=10)
Tab 1　Effect o f tripto lide combined w ith ex tract of Pteris
multi f ida on ALT and AS T in rats( x±s , n=10)
组 别 ALT AST
空白组 35±2 165±3
单独给药组 59±3a 305±3a
联合给药组 32±2 151±4
注:与联合组和空白组比, aP <0.01
3.3　雷公藤甲素单用及与凤尾草联用对小鼠 T 、B
淋巴细胞增殖影响　单独给药组和联合给药组均能
抑制 T 、B 淋巴细胞增殖 ,与空白组比较均差异有显
著性(P<0.01),而单独给药组与联合给药组抑制
作用差异无显著性(P >0.05),见表 2。
表 2　雷公藤甲素单用及与凤尾草联用对小鼠 T 、B 淋巴细
胞增殖的影响( x±s , n=10)
Tab 2　Effect o f tripto lide combined w ith ex tract of Pteris
multi f ida on prolifera tion of T and B- lym phocy te in mice( x
±s , n=10)
组别 T 细胞OD 值 B细胞OD 值
空白组 0.25±0.04 0.49±0.20
地塞米松组 0.03±0.03a 0.14±0.16a
单独给药组 0.03±0.01a 0.06±0.04a
联合给药组 0.05±0.03ab 0.06±0.017ab
注:与空白组比 , aP<0.01;与单独给药组比 , bP>0.05
3.4　雷公藤甲素单用及与凤尾草联用的抗炎镇痛
作用比较
3.4.1　抗炎作用比较　给药组的平均耳肿胀度与
模型组相比差异均有显著性(P<0.01),抑制率均
大于 50%;单独和联合给药组的耳肿胀度差异则无
显著性(P>0.05),见表 3。
表 3　雷公藤甲素单用及与凤尾草联用对二甲苯诱发小鼠
耳郭炎症的影响( x±s , n=10)
Tab 3　Effect o f tripto lide combined w ith ex tract of Pteris
multi f ida on auricle inflamma tion caused by dimethyl ben-
zene in mice( x±s , n=10)
组别 T P剂量/m g·kg -1
右耳
/mg
左耳
/m g
耳肿胀度
/m g
抑制率
/ %
模型组 - 12.9±1.3 5.5±0.6 7.4±0.9 -
单独给药组 0.1 8.4±1.3 5.2±0.7 3.2±0.8a 56.8
联合给药组 0.1 9.1±1.3 5.9±0.8 3.2±1.0ab 56.8
注:与模型组比 , aP<0.01;与单独给药组比 , bP>0.05
3.4.2　镇痛作用比较　扭体法:给药组与模型组相
比 ,扭体次数差异有显著性(P<0.05),抑制率大于
30%,单独和联合给药组的扭体次数差异无显著性
(P>0.05)。热板法:给药组与模型组相比 ,痛阈值
差异有显著性(P <0.01),单独和联合给药组的痛
阈值差异无显著性(P >0.05),见表 4。
4　讨论
雷公藤甲素是治疗类风湿关节炎的最有效中药
成分 ,也是临床上不良反应报道非常多的中药活性
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　　表 4　雷公藤甲素单用及与凤尾草联用的镇痛效果( x±s , n
=10)
Tab 4　Result o f analgesia in mice caused by t riptolide com-
bined w ith ex tract o f Pteris multi f ida( x±s , n=10)
组别 TP 剂量/mg·kg-1 扭体次数
抑制率
/ %
给药后痛阈值/ s
30 min 75 min 150 min
模型组 - 36.2±4.5 - 13.2±2.0 12.7±3.0 10.8±1.0
单独给药组 0.1 24.2±3.0a 33.1 19.7±6.3a 18.0±4.0c 18.7±5.0a
联合给药组 0.1 22.2±4.0ab 44.5 19.3±5.5ab18.2±5.0cb19.3±1.5ab
注:与模型组比 , a P<0.01 , cP<0.05;与单独给药组比 , bP>0.05
成分之一 ,具有多脏器毒性。本研究结果表明 ,凤尾
草能显著降低雷公藤甲素毒性 ,对雷公藤甲素所致
的肝损伤有很好的保护作用 ,并且对雷公藤甲素的
免疫抑制活性和抗炎镇痛作用基本无影响 。因此 ,
通过与凤尾草配伍可降低雷公藤甲素毒性 ,提高其
临床应用的安全性 。
参考文献:
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内蒙古中医药 , 2006 , 6:55-57.
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江中医药 , 2004 ,(3):35.
[收稿日期] 2009-03-23
[ 基金项目] 湖南省芙蓉学者计划课题(编号:200734)　[ 作者简介] 廖明媚 ,女 ,助理研究员 ,博士 ,电话:0731-4327972 , E-mai l:rosnow@163.
com　[ 通讯作者] 赵劲风 ,副教授 , E-mai l:zhaojin feng@hotmai l.com
胆盐诱导肝细胞癌生存与耐药的实验研究
廖明媚1 ,张阳德1 ,邓星明2 ,段菁华1 ,潘一峰1 ,赵劲风1 　(1.中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心 , 湖南 长沙
410008;2.Winship Cancer Institute , Emory Univer sity School of Medicine , Atlanta , GA 30322)
[ 摘要] 　目的:探索胆盐(GCDA)环境下肝癌细胞株 H epG2 的生长情况及其对抗肿瘤药物的作用研究。方法:用 GCDA 处理
HepG2 细胞 ,采用 MT T 法检测细胞活性与增殖性;用抗肿瘤药物与/或 GCDA 对 HepG2 细胞进行处理 , 采用流式细胞术检
测凋亡率 ,用Weste rn Blotting 技术检测 Bcl-2 家族凋亡调控蛋白的表达变化。结果:GCDA 能使 H epG2 细胞增殖;GCDA 使
抗凋亡基因 Mcl-1 增强 , 促凋亡基因 Bak 、Bim 与 Bax 减弱;GCDA 使抗肿瘤药物作用下细胞凋亡率明显下降(P<0.05)。结
论:GCDA 能诱导肝癌细胞株 HepG2 细胞存活与增殖 , 并通过上调抗凋亡蛋白和下调促凋亡蛋白对抗肿瘤药物产生耐药。
[ 关键词] 　甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDA);肝细胞癌;耐药性;凋亡调控
[中图分类号] R735.7　　[ 文献标识码] A　　[文章编号] 1001-5213(2010)06-0446-03
Study on bile salt (GCDA)-induced survival and chemoresistance of hepatocellular carcinoma
cells
LIAO M ing-mei1 , ZHANG Yang-de1 , DENG Xing-ming2 , DUAN Jing-hua1 , PAN Yi-feng1 , ZHAO Jin-
feng1(1.National Hepatobiliary & Enteric Surg ery Research Center , Central South Univer sity , Hunan Chang sha 410008 , Chi-
na;2.Winship Cance r Institute , Emory Univ ersity Schoo l o f Medicine , Atlanta , GA 30322)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To study the g row th of HCC cell line HepG2 and its sensitivity to antitumo r drug s under bile salt
(GCDA)env ir onment.METHODS　HepG2 cells w ere treated w ith GCDA.HepG2 cell viability and proliferation w ere detected
by MT T assay.Cells w ere treated with antitumor drug in presence o r absence of GCDA.Cell apoptotic rate was a ssayed by
Flow Cy tometr y(FCM).Expre ssions o f apoptosis-regulating pro teins were assessed by Western Blo tting.RESULTS　GCDA
had obviously effect on cell pro life ration.GCDA up-regula ted anti-apoptotic pro tein Mcl-1 and dow n-r egula ted pro-apopto tic
proteins (Bak , Bim , Bax).GCDA caused antitumor drug-induced apopto tic rate dec reasing rema rkably(P<0.05).CONCLU-
SION　GCDA can induce the HCC cell line HepG2 surv iva l and pro life ration.GCDA can cause chemo resistance o f tumo r cells
through up-regulation o f anti-apopto tic pro teins and dow n-regulation o f pro-apopto tic pr oteins.
KEY WORDS:GCDA;hepatocellular car cinoma;chemore sistance;apopto tic regulation
　　胆盐由肝脏分泌 ,经肠道重吸收后循环至肝脏 , 在肝癌的发生发展中 ,常常伴随着一系列结构或功
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