全 文 ：HPLC法同时测定不同产地凤尾草中的 3 种活性成分
刘建群1， 刘 健1， 蒋 伟2， 钟国跃2
*
(1． 江西中医药大学 现代中药制剂教育部重点实验室，江西 南昌 330004;2． 江西中医药大学 中药资源
与民族药研究中心，江西 南昌 330004)
收稿日期:2014-10-09
基金项目:中药国家药品标准提高暨 2015 版药典科研项目;国家自然科学基金资助项目 (30960495)
作者简介:刘建群 (1970—) ，男，博士，教授，从事中药活性成分及质量评价研究。Tel: (0791)87119027，E-mail: liu5308 @
sina． com
* 通信作者:钟国跃 (1958—) ，男，博士，研究员，从事中药资源、质量评价与民族药研究。E-mail:zgy1037@ 163． com
摘要:目的 建立高效液相色谱法同时测定不同产地凤尾草中的蕨素 C-3-O-葡萄糖苷、忍冬苷和野漆树苷 3 种活性成
分的含有量。方法 凤尾草甲醇提取液分析采用 Diamonsil C18色谱柱 (4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ;流动相为乙腈-
0. 15%甲酸水溶液，梯度洗脱;体积流量 1. 0 mL /min;检测波长 258 nm和 350 nm;柱温 30 ℃。结果 蕨素 C-3-O-葡
萄糖苷、忍冬苷和野漆树苷 3 种活性成分分别在 0. 025 0 ～ 1. 60、0. 054 0 ～ 3. 45 和 0. 238 ～ 15. 2 μg的测定范围内表现
出良好的线性关系 (r ＞ 0. 999) ，加样回收率分别为 101. 0% (ＲSD 1. 4%)、101. 0% (ＲSD 1. 8%)和 101. 6% (ＲSD
1. 2%)。10 个不同来源凤尾草中的蕨素 C-3-O-葡萄糖苷最高与最低含有量相差约 15 倍，忍冬苷含有量相差约 8 倍，
而野漆树苷含有量相差达 25 倍。结论 该方法能同时测定凤尾草中 3 种活性成分的含有量，而且其药材质量与产地
关系较大。
关键词:HPLC法;凤尾草;蕨素 C-3-O-葡萄糖苷;忍冬苷;野漆树苷
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2015)07-1518-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2015. 07. 026
Simultaneous determination of three constituents in Pteris multifida from differ-
ent growing areas by HPLC
LIU Jian-qun1， LIU Jian1， JIANG Wei2， ZHONG Guo-yue2*
(1． Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine;Key Laboratory of Modern Preparation of Traditional Chinese Medicine，Ministry of Education，
Nanchang 330004，China;2． Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine;The Chinese Medicine Ｒesource and National Medicine Ｒesearch Center，
Nanchang 330004，China)
ABSTＲACT:AIM To establish an HPLC method for simultaneously determining three constituents (pterosin C
3-O-β-D-glucosidede，lonicerin and rhoifolin)in Pteris multifida from different growing areas． METHODS The
P． multifida methanol extract was carried out on a Diamonsil C18Column (4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ，the mobile
phase was acetonitrile-water (containing 0. 15% formic acid)in a gradient elution manner，the flow rate was 1. 0
mL /min at 30℃，and the detection wavelength was set at 258 nm and 350 nm，respectively． ＲESULTS Excel-
lent chromatographic separation was achieved with good linearity (r ＞ 0. 999)within the studied concerntration ran-
ges． The recovery ranges for pterosin C 3-O-β-D-glucosidede， lonicerin and rhoifolin were 101. 0% (ＲSD
1. 4%) ，101. 0% (ＲSD 1. 8%) ，and 101. 6% (ＲSD 1. 2%) ，respectively． The difference of pterosin C 3-O-β-
D-glucosidede content in P． multifida collected from 10 growing areas between maximum and minimum value
reached 15 times，of lonicerin about 8 times，and of rhoifolin as high as 25 times． CONCLUSION The method
can simultaneously determine the 3 constituents in P． multifida，and the growing areas of this plant are closely
linked to its quality．
KEY WOＲDS:HPLC;Pteris multifida;pterosin C 3-O-β-D-glucosidede;lonicerin;rhoifolin
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凤尾草为凤尾蕨科植物凤尾草 Pteris multifida
Poir． 的全草或根部，具有清热解毒、凉血止血、
消肿解毒等功效，在民间被用于治疗肝炎、菌
痢、淋浊、便血、扁桃体炎、痈肿疮毒、湿疹等
疾病［1］。《中国药典》1977 年版关于凤尾草的功
能与主治为清湿热解毒、止血，用于治疗痢疾、
黄疸、肝炎、胃肠炎、乳腺炎、白带、崩漏，外
治外伤出血、烧伤、烫伤。另外，中药部颁标准
第 5 册还收载了含凤尾草的复方制剂尿感宁冲剂
(标准编号 WS3-B-0949-91)。研究表明［2-5］，凤
尾草中主要含有黄酮类、萜类、甾醇类、挥发
油、苯丙素类等成分，具有广谱抗菌、抗肿瘤、
抗病毒作用。笔者先前已从中分离鉴定出多个蕨
素和黄酮类成分，如蕨素 C 3-O-β-D-葡萄糖苷、
黄酮类成分野漆树苷和忍冬苷等［6-7］。其中，蕨
素类化合物具有显著的生理活性，如保肝、抗氧
化、抗癌、促进肠吸收、抗痉挛等［8-11］;忍冬苷
具有理想的保肝和治疗肝炎作用，以及抗菌、抗
氧化、抗骨质疏松、抗焦虑和抗炎等生物活性;
野漆树苷也有保肝、抗氧化、降血压和心率、抑
制神经氨酸酶和抗流感等生物活性［7，12-13］。但是，
《中国药典》1977 年版和卫生部部颁标准关于凤
尾草只有形态和显微鉴别，为提高其质量控制水
平，建立和完善相关质量标准，本实验采用
HPLC 法同时测定了多个产地凤尾草中的蕨素 C-
3-O-葡萄糖苷、忍冬苷和野漆树苷 3 种有效成分
的含有量，以期为该药材质量评价和标准制定奠
定基础。
1 实验部分
1. 1 仪器、试剂和材料 Agilent 1200 高效液相色
谱仪，包括四元泵、柱温箱、VWD 检测器和 Agi-
lent 1200 色谱工作站 (美国 Agilent Technologies公
司) ;Diamonsil C18 色谱柱 (4. 6 mm × 250 mm，
5 μm，迪马科技有限公司) ;BS224S、BT25S 电子
天平 (精度分别为万分之一和十万分之一，德国
Sartorius公司) ;三氯甲烷、乙酸为分析纯 (西陇
化工股份有限公司) ;甲醇、甲酸为分析纯 (国药
集团化学试剂有限公司) ;乙腈为色谱纯 (美国
ACS公司) ;双蒸水 (自制)。蕨素 C-3-O-葡萄糖
苷、忍冬苷和野漆树苷对照品 (自制，纯度均≥
98%)。凤尾草药材 10 批 (购自重庆、四川、北
京、江西等地) ，经江西中医药大学中药资源与民
族药研究中心钟国跃教授鉴定为凤尾蕨科植物凤尾
草 Pteris multifida Poir． 的全草或根部。
1. 2 方法
1. 2. 1 色谱条件 Diamonsil C18 色谱柱 (4. 6
mm ×250 mm，5 μm) ;乙腈-0. 15%甲酸水溶液为
流动相，梯度洗脱 (0 ～ 5 min，5 ∶ 95 ～ 10 ∶ 90;
5 ～ 10 min，10 ∶ 90 ～ 15 ∶ 85;10 ～ 20 min，15 ∶ 85;
20 ～ 25 min，15 ∶ 85 ～ 25 ∶ 75;25 ～ 35 min，25 ∶
75) ;体积流量 1. 0 mL /min;检测波长 258 (0 ～
26 min)、350 nm (26 ～ 35 min) ;柱温 30 ℃;进样
量 10 μL。混合对照品和凤尾草样品色谱图见图 1。
1 蕨素 C-3-O-葡萄糖苷 2． 忍冬苷 3． 野漆树苷
1． pterosin C 3-O-β-D-glucosidede 2． lonicerin 3． rhoifolin
图 1 凤尾草样品 (A)和混合对照品 (B)的 HPLC 色
谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of the Pteris multifida sam-
ple (A)and reference substances (B)
1. 2. 2 溶液配制
1. 2. 2. 1 混合对照品溶液的制备 精密称取蕨素
C-3-O-葡萄糖苷 1. 60 mg、忍冬苷 3. 45 mg 和野漆
树苷对照品 15. 20 mg，置于 10 mL 量瓶中，甲醇
溶解，定容，即得质量浓度分别为 0. 160、0. 345
和 1. 520 mg /mL的混合对照品溶液。
1. 2. 2. 2 供试品溶液的制备 精密称取凤尾草药
材粉末 1 g，置于 50 mL具塞锥形瓶中，加甲醇 20
mL，称定质量，加热回流 30 min，放冷后用甲醇
补足减少的质量，0. 45 μm微孔滤膜过滤，即得供
试品溶液。
2 结果
2. 1 线性关系考察 精密吸取 “1. 2. 2. 1”项下
混合对照品溶液，分别稀释 0、2、8、16、64 倍，
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进样 10 μL，在 “1. 2. 1”项色谱条件下测定。然
后，以峰面积值为纵坐标，对照品量 (μg)为横
坐标，绘制标准曲线，得到回归方程与线性范围，
见表 1。由表可知，该方法呈良好的线性关系
(r ＞ 0. 999)。
表 1 回归方程与线性范围
Tab. 1 Ｒegression equations and linear ranges
成分 回归方程 相关系数 线性范围 /μg
蕨素 C-3-O-葡萄糖苷 y =1 855. 4x +16. 87 0. 999 8 0. 025 0 ～ 1. 60
忍冬苷 y =1 803. 8x +45. 689 0. 999 7 0. 054 0 ～ 3. 45
野漆树苷 y =627. 35x +73. 634 0. 999 8 0. 238 ～ 15. 2
2. 2 重复性试验 精密称取 5 份产自重庆龙池镇
的凤尾草药材各 1 g，按 “1. 2. 2. 2”项下方法操
作，测定样品中蕨素 C-3-O-葡萄糖苷、忍冬苷和野
漆树苷的峰面积。结果，这 3 个成分的 ＲSD (n =
5)分别为 1. 9%、1. 5%、0. 8%，说明该方法重
复性良好。
2. 3 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液 (蕨
素 C-3-O-葡萄糖苷 0. 160 mg /mL、忍冬苷 0. 345
mg /mL、野漆树苷 1. 520 mg /mL)10 μL，重复进
样 5 次，记录峰面积。结果，样品中这 3 个成分的
ＲSD (n = 5)分别为 1. 4%、1. 6%、1. 8%，说明
仪器精密度良好。
2. 4 稳定性试验 精密称取 5 份产自重庆龙池镇
的凤尾草药材各 1 g，按 “1. 2. 2. 2”项下方法操
作，室温放置 0、2、4、6、8、12、24 h 后在
“1. 2. 1”项色谱条件下测定。结果，样品中蕨素
C-3-O-葡萄糖苷、忍冬苷和野漆树苷的 ＲSD (n =
7)分别为 0. 1%、0. 7%、1. 0%，说明供试品溶
液在 24 h内稳定性良好。
2. 5 加样回收率试验 精密称取含有量已知的产
自重庆龙池镇的凤尾草样品 0. 5 g，共 6 份，然后
精密吸取对照品溶液 (蕨素 C-3-O-葡萄糖苷 3. 2
mg /mL、忍冬苷 6. 9 mg /mL 和野漆树苷 17. 5
mg /mL)各 0. 1 mL，加入药材中，按 “1. 2. 2. 2”
和“1. 2. 1”项下方法操作 (用甲醇 19. 7 mL 提
取)和测定，计算 3 种化合物的加样回收率。结
果，蕨素 C-3-O-葡萄糖苷、忍冬苷和野漆树苷的加
样回收率分别为 99. 9% ～ 103. 5% (ＲSD 1. 4%)、
99. 2% ～104. 1% (ＲSD 1. 8%)、99. 5% ～ 103. 0%
(ＲSD 1. 2%) ，说明该方法的加样回收率良好，见
表 2。
2. 6 样品测定 不同产地样品按 “1. 2. 2. 2”项
下方法操作，在 “1. 2. 1”项色谱条件下测定，每
个产地样品平行测定 3 次，取峰面积平均值，按标
准曲线计算，结果见表 3。
表 2 加样回收率试验结果
Tab. 2 Ｒesults of recovery tests
测定成分
取样量 /
g
样品中量 /
mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率 /
%
平均回收
率 /%
(ＲSD /%)
蕨素 C-3- 0. 522 0. 626 0. 32 0. 957 103. 5 101. 0
O-葡萄糖苷 0. 509 0. 611 0. 32 0. 937 101. 9 (1. 4)
0. 501 0. 601 0. 32 0. 921 99. 9
0. 509 0. 611 0. 32 0. 931 100. 0
0. 501 0. 601 0. 32 0. 920 100. 0
0. 508 0. 610 0. 32 0. 932 100. 6
忍冬苷 0. 522 0. 844 0. 69 1. 528 99. 2 101. 0
0. 509 0. 824 0. 69 1. 518 100. 5 (1. 8)
0. 501 0. 811 0. 69 1. 529 104. 1
0. 509 0. 824 0. 69 1. 517 100. 4
0. 501 0. 811 0. 69 1. 499 99. 7
0. 508 0. 823 0. 69 1. 528 102. 2
野漆树苷 0. 522 0. 663 1. 75 2. 456 102. 4 101. 6
0. 509 0. 646 1. 75 2. 436 102. 3 (1. 2)
0. 501 0. 636 1. 75 2. 408 101. 2
0. 509 0. 646 1. 75 2. 418 101. 2
0. 501 0. 636 1. 75 2. 439 103. 0
0. 508 0. 645 1. 75 2. 387 99. 5
表 3 样品测定结果
Tab. 3 Content determination of samples from different
growing areas (mg/g，n =3)
编号 产地 采集号
质量分数 /(mg·g － 1)
蕨素 C-3-O-葡萄糖苷忍冬苷 野漆树苷
1 北京 101 0. 09 1. 05 0. 34
2 重庆开县 418 0. 37 7. 56 5. 48
3 重庆龙池镇 001 1. 20 1. 62 1. 27
4 江西武宁 104 0. 38 2. 01 1. 00
5 重庆北碚 027 － 0. 95 0. 22
6 重庆万州 269 0. 32 4. 62 5. 42
7 重庆巫溪 095 1. 35 3. 78 5. 26
8 重庆秀山 211 0. 81 3. 50 0. 96
9 重庆铜梁 173 1. 00 4. 81 1. 97
10 重庆南川 212 0. 68 4. 84 1. 40
3 讨论
蕨素 C-3-O-葡萄糖苷为 1-茚酮的糖苷衍生物
(结构见图 2) ，紫外光谱显示，其有 3 个吸收峰，
λmax1、λmax2和 λmax3分别为 303、258 和 217. 5 nm，
ε1、ε2 和 ε3 分别为 3. 6 × 10
3、2. 6 × 104 和 5. 4 ×
104L /(mol /cm) ，而且野漆树苷和忍冬苷在 350 nm
处均有吸收峰。综合灵敏度和干扰方面，本实验选
择在 258 nm 波长下测定蕨素 C-3-O-葡萄糖苷，而
在 350 nm波长下测定野漆树苷和忍冬苷。根据表
3 可知，不同产地凤尾草中野漆树苷和忍冬苷的含
有量较高，而蕨素 C-3-O-葡萄糖苷的含有量相对较
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低。此外，各产地凤尾草中蕨素 C-3-O-葡萄糖苷的
含有量在 0. 09 ～ 1. 35 mg /g之间，其中重庆巫溪和
龙池镇样品中的含有量较高，而北碚样品中未测得
该成分;忍冬苷的含有量在0. 95 ～ 7. 56 mg /g 之
间，其中重庆开县样品中的含有量较高;野漆树苷
的含有量在 0. 22 ～ 5. 48 mg /g 之间，其中重庆开
县、巫溪和万州样品中的含有量较高。综上所述，
不同产地凤尾草中 3 种有效成分的含有量差异较
大，其中蕨素 C-3-O-葡萄糖苷最高与最低含有量相
差约 15 倍，忍冬苷含有量相差约 8 倍，而野漆树
苷含有量相差达 25 倍，提示凤尾草药材质量与产
地关系较大。
图 2 蕨素 C-3-O-葡萄糖苷结构
Fig. 2 Structrue of pterosin C 3-O-β-D-glucosidede
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