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双孢蘑菇优良菌株筛选及制种技术的研究



全 文 :EDIBLE FUNGI食用菌 2009(3)
收稿日期:2008-10-23
基金项目:山西省 2006 年财政厅资助项目。
项目编号:晋教财 2006151。
双孢蘑菇优良菌株筛选及制种技术的研究
张福元 曹瑞秀 乔君毅
(山西农业大学动物科技学院,山西太谷 030801)
摘 要 选择 11 个双孢蘑菇菌株,进行了不同菌株、原料配方、
制种料处理方式和制种封口材料的试验。 结果表明,福建 2796
菌株菌丝生长最快,其适宜的母种培养基配方为小麦汁和牛粪
培养基, 在生产原种时小麦粒以预泡 10 h 后菌种质量较好,制
种封口材料以棉花塞为宜。
关键词 双孢蘑菇 菌株 制种技术
文章编号 1000-8357(2009)03-0018-02
在食用菌生产实践中, 每一种食用菌菌丝生长速度的快
慢和菌落性状,直接影响着该种食用菌吃料的快慢、出菇的早
晚、生产周期的长短和抗逆性的强弱等生产性能,然而食用菌
中的双孢蘑菇,其菌丝的生长速度、抗逆性等特性较平菇、金
针菇慢而差[1]-[5]。 为了解决双孢蘑菇的这些问题,笔者从省内
外引入 11 个双孢蘑菇菌株,进行了制种阶段不同菌株、原料
配方、 制种料处理方式和制种封口材料对菌丝生长影响的初
步试验,现将试验结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 供试菌株 福建 2796,引自福建蘑菇菌种研究推广站;
新登 96、夏秀 2000、江苏 2796,引自江苏省高邮市食用菌所;
浙江 3003、浙江 333、浙江 U3、浙江 2796、浙江 4607,引自浙
江省林科院;生物所 2796、大肥菇,引自山西省生物研究所。
1.2 试验方法
1.2.1 不同菌株筛选 小麦汁母种培养基的制作:称取 250 g
优质小麦,用双层纱布包好,放入 1 000 mL 水中煮沸 20 min,
然后取出纱布包,在煮沸液中加入称好的 20 g 琼脂,不断搅
拌至琼脂全部溶化,然后分别加入 20 g 葡萄糖、20 g 琼脂、3 g
磷酸二氢钾、1.5 g 硫酸镁、10 mg 维生素 B1,搅拌至溶解,最后
分装于试管,每支试管分装 10 mL,塞好棉塞后,121℃左右高
压蒸汽灭菌 30 min,趁热摆好斜面备用。
将 11 个双孢蘑菇菌株,挑种块分别接到 3 支小麦汁试管
培养基上,放入 25℃恒温培养箱中培养。 观察、记录不同菌株
菌丝的生长速度 cm/d(平均)、密度、生长势、色泽、感染杂菌
情况 (所有的记录数据都为同一个菌株 3 个试管的平均值),
经分析选出最优的菌株。
1.2.2 不同母种培养基配方的筛选
菌株:菌株来源于试验 1.2.1 结果所选菌株:福建 2796。
培养基配方及制作见表 1。
将福建 2796 菌丝生长好的种块分别接到上述表 1 中所
列的 5 种培养基上,每种培养基接 3 支试管,并用标签进行标
注,标明接种培养基类型和接种日期,放入 25℃恒温培养箱
中培养,然后通过观察、记录、菌株在培养基上的每天的菌丝
生长长度、生长速度 cm/d(平均)、密度、生长势、色泽、杂菌感
染情况 (所有的记录数据都为同一个培养基 3 支试管的平均
值),分析并选出最适宜的培养基。
1.2.3 原种培养基不同料处理方式试验 试验菌株福建
2796。 设两组料处理方式,分别是:处理 1:称取 2 500 g 优质
干净小麦粒,加入 3 750 g 清水,浸泡 10 h,加热煮沸 10 min,
捞出小麦粒称重,通过晾晒进行调节使含水量达适宜,然后加
石膏 12.5 g、石灰 25 g 拌匀装瓶。 处理 2:称取 2 500 g 优质干
净小麦粒,加入 3 750 g 清水,不浸泡直接加热煮沸 10 min,捞
出小麦粒称重,加石膏 12.5 g、石灰 25 g 拌匀装瓶,所有处理
均为每瓶装料 145 g,然后用聚乙烯塑料膜封口,放入 121℃
高压蒸汽灭菌锅中灭菌 90 min。
每处理的小麦粒培养基各自装入 5 个罐头瓶, 然后把试
验 1.2.1 所选出来的优良菌株的种块分别接到罐头瓶内。 观
察、记录、分析不同培养基的菌丝长满瓶天数、密度、生长势、
色泽、有无杂菌感染(所有的记录数据均为同一个培养基的平
均值),并选出适合该菌株的培养料处理方式。
1.2.4 原种瓶不同封口材料的试验 试验菌株为福建2796。
小麦粒配方及处理采用 1.2.3 处理 1 的方式, 将原料分别装
入 10 个 500 mL 的三角瓶内,将其分为棉花塞(处理 1)和低
压聚乙烯膜(处理 2)两种封口材料封口。 高压灭菌后,接入菌
种。 观察、记录、分析不同封口材料对菌丝满瓶天数、密度、生
长势、色泽,杂菌感染有无,选出适合该菌株生长的封口材料。
表 1 母种培养基配方及制法
配方 制作方法
配方 1:马铃薯葡
萄糖琼脂培养基
(PDA)
常规制法
配方 2:
小麦汁培养基
同 1.2.1 小麦汁培养基的制作
配方 3:
牛粪培养基
称取 100 g干牛粪,用双层纱布包好,放入 1 000 mL
水中煮沸 10 min,取滤液,加入 20 g 琼脂,溶化
后加入 15 g 蔗糖,搅拌至溶解,分装于试管中,
每个试管分装 10 mL,塞好棉塞后,121℃左右高
压蒸汽灭菌 30 min,趁热摆好斜面备用。
配方 4:
鸡粪培养基
将配方 3 的干牛粪替换为干鸡粪,其他组分及制
法同配方 3。
配方 5:蛋白胨酵
母膏培养基
称取 20 g琼脂,放入 1 000 mL 水中煮沸 10 min,
不断搅拌至琼脂完全溶化,然后分别加入蛋白胨
5 g、葡萄糖 1 g搅拌至溶解,分装于试管,每个试
管分装 10 mL,塞好棉塞后,121℃左右高压蒸汽
灭菌 30 min,趁热摆好斜面备用。
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EDIBLE FUNGI食用菌 2009(3)
2 结果分析
2.1 不同菌株筛选的结果分析 从接种后开始每天观察记
录菌丝生长情况如下:2008 年 3 月 18 日下午 4:00 把所有菌
种接种到小麦汁培养基上,19 日下午 4:00 观察发现所有的
试管种块都没有明显的变化。 20 日下午 4:00 观察发现福建
2796 接种块周围菌丝开始大量萌动,新登 96、夏秀 2000、浙
江 3003、省生物所 2796 和大肥菇也有一定的萌发量,其余的
都没有明显的变化,详见表 2。
表 2 江苏 2796 和浙江 4607 为接种后 14 d 的平均速度,
其在 14 d 后生长速度明显下降,没有实际意义。 综合考虑,以
福建 2796 菌丝生长较好,表现为菌丝体生长迅速,菌落雪白,
菌丝粗壮浓密;菌丝生长较好的菌株还有新登 96、夏秀 2000、
浙江 3003 和生物所 2796; 观察中发现有的菌株在试管中长
出了原基,有的呈点状生长,说明其有所老化。
2.2 不同母种培养基配方筛选结果 2008 年 5 月 4 日下午
4:00 把福建 2796 分别接种到鸡粪、牛粪、蛋白胨、小麦汁 、
PDA 试管培养基上,5 日下午 4:00 观察发现所有的试管菌种
块都没有明显的变化,接种 2 d 后菌丝开始大量萌动。 表 3 中
看出,以小麦汁菌丝生长速度最快,菌丝密度等表现最好,其
次为牛粪培养基,表现最差的培养基是 PDA。
2.3 原种培养基不同料处理方式的结果分析 表 4 看出,两
种小麦粒处理方式,以处理 1(小麦粒提前预泡 10 h)菌丝长
满瓶所需要的时间短,比处理 2(未预泡)提早 3 d 长满瓶;而
菌丝密度、生长势、色泽等两个处理都表现为一样。
2.4 原种瓶不同封口材料的试验 表 5 看出,两种封口材料
试验结果是以处理 1(棉花)比处理 2(低压乙烯膜)菌丝封口
提早 4 d 长满瓶,且菌丝生长势强,菌丝密度高。 但在试验中
还发现,若棉花塞封口过松,在培养期间瓶中料内的水分容易
蒸发散失,由于料内水分不足,小麦粒松散,菌丝干缩,影响菌
种质量,尤其是靠近瓶口的菌种更是如此。
3 讨论和结论
3.1 在不同菌株的试验中可以很直观的看出, 福建 2796 菌
丝生长快、菌丝密度大、生长势强、色泽雪白、抗病力强。 生长
较好的菌株还有新登 96、 夏秀 2000、 浙江 3003 和省生物所
2796;其余的菌株均表现欠佳,这可能与其遗传性,保存条件
或转管次数等有很大关系;福建 2796 对 5 种培养基的适应性
由强到弱依次为:小麦汁培养基、牛粪培养基、蛋白胨培养基、
鸡粪培养基、PDA 培养基。 5 种培养基中,小麦汁培养基菌丝
长速最快,生长势强,色泽较好。说明该配方营养全面,适合该
菌株菌丝生长。
目前双孢蘑菇原种培养基多用小麦粒作原料, 而小麦粒
的处理方式至关重要, 试验中发现提前 10 h 预泡小麦粒,有
利于菌丝生长。这是由于预泡可充分使小麦粒含水均匀一致,
从而有利于菌丝对水分的吸收利用; 原种瓶所用的封口物的
通透性直接影响种瓶内外气体的交换, 虽然棉花封口透气性
好,菌丝生长稍快,但必须注意其瓶口水分易散失,小麦粒会
变干,影响菌种质量的问题。
3.2 适宜的双孢蘑菇菌株为福建 2796;其次为新登 96、夏秀
2000、浙江 3003 和省生物所 2796;福建 2796 适宜母种培养
基为小麦汁和牛粪培养基; 制原种的主料小麦粒以提前 10 h
预泡为宜;制原种的封口材料以棉花塞封口为宜,且在不撑破
瓶口的前提下,棉花塞要紧,以防过量的水分散失。
参考文献
[1] 孔祥君, 王泽生. 中国蘑菇生产 [M]. 北京: 中国农业出版社,
2000:4.
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农学学报,2001,23(1):69-72.
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[5] 顾俊标,郭 倩,贾 明,等.双孢蘑菇高产栽培培养料的配制和制
作[J].食用菌,2008(3):27-28.
注: +++代表菌丝浓密,++代表菌丝居中,+代表菌丝稀疏
表 2 不同菌株菌丝生长情况
菌株
萌动
速度
平均长速
/(cm.d-1)


生长

色泽
杂菌
感染
福建 2796 早 0.38 +++ 强 雪白 无
新登 96 较早 0.3 ++ 中 白色 无
夏秀 2000 较早 0.3 ++ 中 白色 无
浙江 3003 较早 0.32 ++ 中 白色 无
生物所 2796 较早 0.31 ++ 中 白色 无
大肥菇 晚 0.29 + 中 白色 无
浙江 333 晚 0.28 + 中 白色 无
浙江 U3 晚 0.26 ++ 中 白色 有
浙江 2796 晚 0.29 + 中 白色 无
江苏 2796 晚 0.24 + 弱 白色 无
浙江 4607 晚 0.19 + 弱 白色 无
表 3 福建 2796 在不同培养基的生长结果
培养基 平均速度/(cm·d-1) 密度 生长势 色泽 杂菌感染
小麦汁 0.42 +++ 强 雪白 无
牛粪 0.40 +++ 强 雪白 无
蛋白胨 0.37 +++ 中 雪白 无
鸡粪 0.37 +++ 中 白色 无
PDA 0.36 +++ 中 白色 无
注: +++代表菌丝浓密,++代表菌丝居中,+代表菌丝稀疏。
表 4 福建 2796 在两种小麦粒处理方式的菌丝生长情况
小麦粒处理 长满天数/d 密度 生长势 色泽 杂菌感染
处理 1 12 +++ 强 雪白 无
处理 2 15 +++ 强 雪白 无
表 5 不同封口材料的试验结果
封口处理 长满天数/d 密度 生长势 色泽 杂菌感染
处理 1 15 +++ 强劲 雪白 无
处理 2 19 ++ 较强 雪白 无
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