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区间均未超出参比制剂相应 AUC0※48和 AUC0※∞的 80%～
125%;试验制剂的 Cmax的 90%可信区间 , 也未超出参比制
剂 Cmax的 70%～ 143%。试验制剂对参比制剂的相对生物利
用度 F (以 A UC0※48作为评价依据)为 100%±13% (71%
～ 125%)。
表 2　健康受试者口服 750 mg参比制剂与试验制剂后的药物动力学
参数 (n=20)
参数　　　　　　　 参比制剂 试验制剂
AUC0※48 (μg· h·mL -1) 443.0±136.3 435.6±105.2
AUC0※∞ (μg· h·mL -1) 460.4±139.6 450.9±108.2
Cmax (μg ·mL-1) 30.91±5.24 30.25±5.82
t1/2 (h) 10.24±1.13 　9.83±0.96
tmax (h) 　2.00±0.74 　1.88±0.60
F (%) 100±13
3　讨论
相比国外所报道关于 H PLC 法测定夫西地酸血浆浓度
的方法[3-6] , 本法具有以下优势:①样品处理简单 , 方法回
收率高 , 最小检出浓度为 0.149 μg ·m L-1 。 ②本试验所建
立的测定方法其线性范围很宽 , 在 0.298～ 76 μg · mL-1呈
良好线性关系 , 灵敏度高 , 准确。研究结果表明 , 试验制剂
夫西地酸干混悬剂与参比制剂在人体的吸收速度和吸收量差
异无显著性意义 , 两药具有生物等效性。
参考文献
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(收稿日期:2006-03-07　　修回日期:2006-06-21)
应用组织培养对覆盆子快速繁殖的研究
刘计权 (山西中医学院 , 太原　030024)
摘要:目的　为覆盆子药材生产提供优质种苗。方法　用一年生带芽嫩茎作为组织培养的外殖体进行覆盆子的快速繁殖
研究。结果　优选出了覆盆子快速繁殖的最佳培养基。结论　通过该组织培养技术可大批量生产优质的覆盆子种苗。
关键词:覆盆子;组织培养;快速繁殖
中图分类号:R282.2　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1672-2981 (2006)06-0426-03
Rapid propagation of Rubus chingii by plant tissue culture
Liu Ji-quan (S hanx i College of T raditional Chinese Medicine , Tai yuan　030024)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To provide seedling s of high quality Rubus ching ii by plant tissue culture.METHODS　
The stems w ere taken as an exozo ite o f tissue cultivation.RESULTS　The optima l medium fo r r apid pr opagation was
selected.CONCLUSIONS　A larg e number of Rubus chingii seedlings can be produced by the tissue culture technology.
KEY WORDS:Rubus chingii;tissue culture;rapid propaga tion
　　覆盆子 (Rubus chingii Hu)为蔷薇科 (Rosaceae)药
用植物 , 以其未成熟的果实 (果实绿黄时)入药 , 具有补肝
益肾 、 固精缩尿 、 明目的功效[1] 。生产上覆盆子的繁殖一般
采用扦插和分株法 , 但这些方法受良种基数的限制 , 繁殖系
数低 , 且容易积累病毒 , 造成品种退化 , 严重影响药材的产
量和品质[ 2-3] 。为从根本上解决这些问题 , 我们采用了组织
培养快速繁殖方法。
1　材料
组织培养材料采自山西中晋农业公司现代种植示范园 ,
经鉴定为蔷薇科植物覆盆子 Rubus chingii Hu , 以其一年生
　　作者简介:刘计权 , 男 , 硕士 , 主要从事药用植物学 、 药用植物栽培学研究　　Tel:(0351) 6137398　　E-mai l:liu jiquan2008@
163.com
Cen t ral South Pharmacy.December 2006 , Vol.4 No.6　中南药学 2006年 12月第 4卷第 6期
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嫩枝带芽茎段为外殖体[ 4] 。
2　方法
2.1　材料的处理
2.1.1　预处理　用肥皂水和软毛刷将剪去叶片的枝条表面
清洗干净 , 然后用自来水冲洗 10 min , 每芽一段剪好备用。
2.1.2　乙醇消毒　在超净工作台上将剪好的茎段移入无菌
杯 , 倒入 70%的乙醇浸没材料 , 轻摇 1 min后倒出乙醇 , 用
无菌水冲洗 1 次。
2.1.3　H gCl2 消毒　用 0.1%H gCl2 浸没上述材料 , 轻摇 6
～ 8 min后倒出 HgCl2 液。
2.1.4　无菌水清洗　注入无菌杯适量的无菌水 , 晃动数次
将水倒掉 , 如此重复 5 次 , 无菌纸吸干材料水分备用。
2.2　培养方法
以 MS 为基本培养基 (含蔗糖 3%, 琼脂 0.7%, pH 为
5.7), 并附加不同浓度组合的激素 , 制好后分装入 150 mL
三角瓶灭菌 , 每瓶接种 4 个茎段 , 每日光照 14 h , 光强 2
500 lx , 培养温度 21 ℃～ 23 ℃。
3　结果与分析
3.1　腋芽的诱导
将无菌带芽嫩茎接种到 MS 并附加 IBA 和 6-BA 不同浓
度组合的培养基上进行培养。实验结果表明 , 以 MS +IBA
0.3 mg · L-1 +6-BA 0.5 mg · L-1这一组合的培养基为最
适 , 接种 5 d 后 , 腋芽开始萌发 , 25 d 后长至 2 ～ 2.5 cm。
将其切下进行继代培养。
3.2　最佳继代培养基的筛选
本试验用 L4 (23)正交实验设计 , 以期对试管苗分化
培养基适宜激素配比进行筛选。每种激素设 2 个浓度(mg·
L-1)水平:IBA (0.1 , 0.5), 6-BA (0.5 , 1.0), GA 3
(0.01 , 0.05)。
试验选用 IBA、 6-BA 和 GA 3 3 种激素 , 如表 1 共设计
4个组合的处理 , 每个处理 20 瓶 , 每瓶接种 4 个试管苗 ,
重复 2 次 , 25 d后调查试管苗的增殖系数 (增殖系数=增殖
瓶数/接种瓶数), 结果见表 1。
表 1　适宜继代激素配比 L4 (23)试验结果与极差分析
试验号 IBA 6-BA GA 3 增殖 系 数 Tt
1 0.1 0.5 0.01 (1)6.35 (2)7.10 13.45
2 0.1 1　 0.05 (1)8.10 (2)8.14 16.24
3 0.5 0.5 0.05 (1)6.92 (2)6.88 13.8
4 0.5 1　 0.01 (1)7.45 (2)7.84 15.29
K 1 29.69 27.25 28.74
K 2 29.09 31.53 30.04
X 1 14.85 13.63 14.37
X 2 14.55 15.77 15.02
R 0.3 2.14 0.65
注:IBA 为吲哚丁酸;6-BA 为 6-苄氨基嘌啉;GA 3 为赤霉素。
表 1 结果表明 , 就 IBA 、 6-BA 和 GA3 3 种激素分别而
言 , 其 K 1 (X 1)和 K 2 (X 2)值均说明 , 在一定范围内 3
种激素的高浓度均比低浓度更有利于芽的分化与增殖。但从
R 值来看 , 6-BA 的 R 值最大 , 说明 6-BA 的浓度为影响继
代增殖系数的主导因子 , 其次为 GA3 和 IBA 。
表中结果显示 , 继代培养中芽的分化与增殖不仅仅取决
于 IBA 、 6-BA 和 GA3 3 种激素的绝对量 , 而且取决于三者
的相对比例。利用 4 个组合的培养基进行继代培养 , 均表现
为较高的增殖系数 , 平均增殖系数都在 6 以上。其中以第 2
组合 M S + IBA 0.1 mg · L-1 +6-BA 1.0 mg · L-1 +
GA 30.05 mg · L -1为最佳继代培养基 , 使用该组合配制的
继代培养基进行培养 , 平均增殖系数在 8 以上 , 为所有组合
中最大。
3.3　最佳生根培养基的筛选
将来自上述最佳继代培养增殖后生长健壮 、 整齐一致的
试管苗 (苗高1 cm 左右 , 具有 3～ 4 片小叶)接种到 1/ 2MS
上并配以 3种激素的不同浓度进行生根培养。接种 5 d 后从
下切口处发出白色根原基 , 20 d后嫩根长至 2.5 ～ 4 cm。其
间记录原接种苗数 , 根原基突出时间 , 根的条数 , 长度和生
根试管苗数。为综合考虑生长量 , 同时计算生根率 、 生根系
数和生根度。 [ 生根率=(生根苗数/接种苗数) ×100%,
生根度=生根系数×根均长×生根率]
试验按 L 4 (23)设计 4 个组合 , 每次处理 20 瓶 , 每瓶
接种 10 株 , 重复 2 次。结果见表 2。
表 2　适宜生根激素配比 L4 (23)试验结果与极差分析
试验号 IBA 6-BA GA 3 生根率(%)生根系数 生根度
1 0 　 0 　 0 　 89.5 2.45 2.34
2 0 　 0.01 0.01 84.63 1.78 1.54
3 0.01 0 　 0.01 96.49 4.04 3.85
4 0.01 0.01 0 　 89.97 2.01 2.89
K 1 3.88 6.19 5.43
K 2 6.74 4.43 5.39
X 1 1.94 3.09 2.72
X 2 3.37 2.22 2.69
R 1.43 0.87 0.03
　　由表 2 可知 , 1/ 2MS +IBA 0.01 mg · L-1 +GA 30.01
mg· L-1为最适生根培养基 , 生根率达 96%以上 , 且发根
早 , 根生长快。其中 IBA 对生根作用明显 (R=1.43最大)。
各处理对发根数量影响不大 , 多在 3 ～ 5 条之间。
另外 , 在采用培养基进行生根试验的同时 , 我们将不经
生根的试管苗直接移入育苗盘中的栽植基质 , 基质配比为草
炭土-珍珠岩-蛭石 (1∶1∶1)[ 5] , 看其是否能够生根。经过
多次试验 , 结果表明 , 只要选取健壮的继代瓶苗 , 下切口整
齐 , 不经生根培养基培养 , 直接栽入育苗盘中的栽植基质 ,
加强温 、 湿管理 , 1 个月后就可生根 , 生根率可达 90%, 这
样就可大大缩短培养周期 , 降低成本[ 6] 。
3.4　生根苗的移栽
当生根苗长出发达根系 , 株高达 3 ～ 4 cm 时 , 移入温室
打开瓶口 , 保持 3 d , 洗净根系上的培养基 , 移入美式 72穴
育苗盘 , 基质配比为草炭土-珍珠岩-蛭石 (1∶1∶1)。将育
苗盘置于小荫棚培养 , 2周后根系长满 , 撤去荫棚 , 移入 10
cm×10 cm 营养钵 , 成活率达 95%以上。
4　讨论
初代培养中 , 将培养茎段上长出的新芽切下用于继代培
养后 , 若原茎段还没有枯干时 , 将其重新接入新的培养基
中 , 20 d 后可从切口处长出 1 ～ 3 个新芽 , 这样可在短期内
迅速建立大量无性系。
在生根试验中 , 试管苗不经生根培养基培养也能生根 ,
中南药学 2006年 12月第 4卷第 6期　C ent ral South Pharm acy.December 2006 , Vol.4 No.6
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而且生根率高 , 重现性好。从上述最适生根培养基中可以看
出 , 配制生根培养基所需营养元素仅为初代 、 继代培养的一
半 , 而且激素的用量也极少 , IBA 为 0.01 mg · L-1 , GA 3
为 0.01 mg· L-1 , 说明健壮的无根试管苗通过自身叶片合
成和下切口吸收的营养物质完全可以满足生根的需要 , 另
外 , 其自身合成的内源激素亦能满足形成新根的需要 , 不需
再添加外源激素 , 所以无需生根培养基培养就能生根。
经过组织培养获得的覆盆子幼苗 , 经过 2 年多的培养观
察 , 与营养繁殖苗形态特征无显著差异 , 但生长势明显高于
非组培繁殖苗 , 所以可以通过组织培养生产大量优质种苗。
关于其内在药效成分是否有差异 , 有待于进一步研究[ 7-8] 。
参考文献
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(收稿日期:2006-07-24　　修回日期:2006-09-25)
湘西落地生多糖的提取分离纯化和性能分析
毛小环 , 田伟政 , 戴文建 , 杨军衡 (湖南环境生物职业技术学院 , 衡阳　421005)
摘要:目的　提取分离落地生水溶性多糖 , 并研究其结构性质。方法　经提取 、 离心 、 沉淀 、 脱蛋白后的粗多糖 ,
进一步用 DEAE-纤维素 、 Sephacry l S-400HR和 Sephacry l S-200HR 凝胶渗透柱色谱分离纯化 , 对分离到的主要
多糖应用高碘酸氧化 、 高效凝胶渗透色谱 (HPGPC)、 T LC 、 GC 、 GC-MS 、 IR 等方法进行组成结构分析。 结果　
从落地生水溶性多糖提取物中分离到 8 种均一多糖:SIP1a-1 、 SIP1a-2 、 SIP2a-1、 SIP3a-1、 SIP4a-1 、 SIP5a-1 、
SIP6a-1 和SIP7a-1 , 其中 SIP1a-1 相对分子质量 (M r)为 28 000 , 葡萄糖 、 甘露糖组成摩尔比为 1∶4.798 , 分子中
1※3 、 1※4 (或1※2)、 1※6 连接的糖苷键数比为 8.75∶23.59∶1 , 红外光谱数据显示为 β-D-吡喃甘露聚糖。结论
　8 种均一多糖从落地生中分离得到 , 其中 SIP1a-1 为 β-D-吡喃型葡萄甘露聚糖。
关键词:落地生;多糖;分离;组成
中图分类号:R284.2　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1672-2981 (2006)06-0428-04
Isolation and characteristics of polysaccharide from
Sinocrassula indica (Decene)Berger var.Indica of west Hunan
Mao Xiao-huan , T ian Wei-zheng , Dai Wen-jian , Yang Jun-heng (Hunan Env ironment and Biology Poly technique
College , Hengyang　421005)
ABSTRACT:OBJIECTIVE　To isolate the wa te r-soluble po ly saccharides f rom S.indica (Decne)Berger var.Indica
and to investig ate its structural feature s.METHODS　Po ly saccha rides were prepa red from Sinocrassula indica (Dec-
ne)Be rge r var.Indica and purified with co lumn chromatog raphy on DEAE-cellulo se , Sephacry l S -400HR and
Sephacry l S-200H R.The structural feature o f the main polysaccha ride s wa s elucida ted by perioda te ox idation , H PG-
PC , TLC , GC , GC-MS , and IR, respectively.RESULTS　Eight po ly saccha rides w ere obtained from Sinocrassula
indica (Decne)Berger var.Indica.SIP1a-1 w as a glucomannan w ith a 1∶4.798 g luco se-mannose ratio and the rela-
tiv emo lecular w eight w as 2 8 0 0 0 .Pe riodate o xidation analy sis indica ted SIP 1 a- 1 containingβ(1 ※ 3 , 1 ※4 , 1 ※ 6)
　　基金项目　湖南环境生物职业技术学院院长基金资助项目内容 (Z03-8)
作者简介:毛小环 , 男 , 讲师 , 主要从事生物制药与成分分析　　Tel:(0734) 6219129　13017177288　　E-mai l:mxhcsu@sina.com;
lymxh123@sohu.com
Cen t ral South Pharmacy.December 2006 , Vol.4 No.6　中南药学 2006年 12月第 4卷第 6期