全 文 ：北方园艺２０１３（１５）：１６９～１７１ ·食用菌·
作者简介：朱会霞（１９７７－），女，河北景县人，博士，副教授，现主要
从事发酵工程和食品等方面的研究工作。
收稿日期：２０１３－０４－１５
灵芝发酵覆盆子生产总黄酮的培养基优化研究
朱 会 霞
（衡水学院，河北 衡水０５３０００）
摘 要：以灵芝和覆盆子为试材，通过Ｌ１８（３７）正交实验设计对灵芝发酵生产覆盆子黄酮基础
培养基进行了优化研究。结果表明：灵芝发酵生产覆盆子黄酮的基础培养基组合为葡萄糖
２０ｇ／Ｌ，黄豆粉１５ｇ／Ｌ，玉米粉５０ｇ／Ｌ，酵母膏１．０ｇ／Ｌ，ＫＨ２ＰＯ４０．９ｇ／Ｌ，ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ０．２ｇ／Ｌ，
ＶＢ１０．０１ｇ／Ｌ，此培养基条件下，灵芝发酵覆盆子后黄酮含量达到４．５８ｍｇ／ｇ，与对照组（不接种灵
芝）相比含量提高９６．５７％。
关键词：灵芝；覆盆子；黄酮
中图分类号：Ｓ ５６７．３＋１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１３）１５－０１６９－０３
覆盆子（Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ Ｌ．）属蔷薇科悬钩子属木本植
物。覆盆子果实是一种聚合果，为药食两用果实，富含
有黄酮、多糖、粗三萜等功能性物质。因此，覆盆子具有
抗衰老、调节生殖系统、促进细胞免疫机能、减肥之功
效，有助阳缩尿、补肾固精功能，用于治疗阳萎、肾虚遗
精、尿频和遗尿等病症，因此，覆盆子具有很强的药用及
保健作用［１］。覆盆子黄酮类化合物是覆盆子代谢过程
中产生的重要天然有机化合物，是覆盆子中主要活性成
分之一，具有抗氧化、抑菌消炎、消除自由基、抗过敏、抗
感染、抗突变、抗肿瘤［２］等生理活性，且毒性较低，因此可
用作食品、化妆品的天然添加剂。
灵芝具有繁殖力强，易于深层发酵培养，且在深层
发酵培养过程中会有多种酶系产生，有利于果胶、木质
素等分解，有利于覆盆子中有效成分的溶出。该试验对
灵芝发酵生产覆盆子黄酮工艺进行了研究，以期为提高
覆盆子黄酮提出率及覆盆子黄酮的进一步应用提供
依据。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
灵芝斜面菌丝体：衡水学院生命科学系微生物实验
室保藏。
覆盆子干果（一级品，购于衡水市中医院药店）净制
粉碎过４０目筛，５０℃烘干备用。样品成分分析中所用化
学试剂均为分析纯或生化试剂。
培养基［３］：斜面培养基：马铃薯２００．０ｇ／Ｌ、葡萄
２０．０ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ １．５ｇ／Ｌ、ＫＨ２ＰＯ４３．０ｇ／Ｌ、
ＶＢ１０．０１ｇ／Ｌ、琼脂２０．０ｇ／Ｌ、２０％的土豆汁配制。种子
培养基：葡萄糖３０．０ｇ／Ｌ、黄豆粉１０．０ｇ／Ｌ、酵母膏
１．０ｇ／Ｌ ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ０．５ｇ／Ｌ、ＫＨ２ＰＯ４１．０ｇ／Ｌ、ＶＢ１
０．０１ｇ／Ｌ、ｐＨ ６．０，蒸馏水配制。发酵培养基：碳源为葡
萄糖３．６％、氮源为蛋白胨０．４％、ｐＨ ６．０、酵母膏０．２％、
ＫＨ２ＰＯ４０．１％、ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ０．０５％、ＶＢ１０．００５％。
１．２ 试验方法
１．２．１ 种子液的培养 从２８℃培养６ｄ的斜面上用接
种钩切１ｃｍ２带培养基的菌体转入装有１５０ｍＬ种子培
养基的５００ｍＬ三角瓶中，２６℃１５０ｒ／ｍｉｎ培养３ｄ［４］。
１．２．２ 发酵培养 将种子以一定的接种量，接入装有一
定量培养基的５００ｍＬ三角瓶中，在２６℃振荡培养６ｄ。
１．２．３ 灵芝发酵覆盆子黄酮培养条件 将灵芝真菌按
照５％的接种量接种到摇瓶培养基中，培养温度
２６℃，摇床转速１００ｒ／ｍｉｎ，培养时间１６８ｈ，覆盆子添
加量１００ｇ／Ｌ，以不接种灵芝菌为对照［６］。
１．２．４ 灵芝发酵覆盆子黄酮培养基优化设计 选用葡
萄糖、玉米粉、豆粉、酵母膏、ＫＨ２ＰＯ４、ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ、
ＶＢ１为因素，各取３水平，进行Ｌ１８（３７）正交实验，因素及
水平见表１。５００ｍＬ三角瓶中装液量为１５０ｍＬ，１０％的
接种量，２６℃１５０ｒ／ｍｉｎ，培养６ｄ进行检测。
表１ Ｌ１８（３７）正交实验因素及水平
Ｔａｂｌｅ １ Ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ Ｌ１８（３７）ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ ｇ／Ｌ
水平
因素
Ａ葡萄糖
／ｇ·Ｌ－１
Ｂ
豆粉
Ｃ
玉米粉
Ｄ
酵母膏
Ｅ
ＫＨ２ＰＯ４
Ｆ
ＭｇＳＯ４
Ｇ
ＶＢ１
１ １０ １０ ３０ ０．５ ０．５ ０．２ ０．０１
２ ２０ １５ ４０ １．０ ０．７ ０．４ ０．０３
３ ３０ ２０ ５０ １．５ ０．９ ０．６ ０．０５
１．３ 项目测定
总黄酮含量的测定参照孙金旭等［５］的方法。
２ 结果与分析
２．１ 灵芝发酵覆盆子黄酮最佳时间的确定
由图１可知，对照组黄酮随振荡时间的延长，培养
液中的总黄酮含量不断增加，在０～９６ｈ的过程中，总
９６１
·食用菌· 北方园艺２０１３（１５）：１６９～１７１
黄酮含量增幅较大，由０ｍｇ／ｇ上升到２．２１ｍｇ／ｇ，增
幅效率为０．０２３ｍｇ·ｇ－１·ｈ－１，之后９６～１６８ｈ，覆盆
子总黄酮含量虽有增幅，但增幅幅度较小，增辐效率为
０．００１７ｍｇ·ｇ－１·ｈ－１，１６８ｈ振荡后，覆盆子黄酮的最大
含量为２．３３ｍｇ／ｇ。灵芝发酵覆盆子黄酮的最大含量提
取时间为１２０ｈ，此时，黄酮含量为４．１１ｍｇ／ｇ，相对于对
照组最大含量提高７６．３９％。
图１ 灵芝发酵时间对覆盆子黄酮产量的影响
Ｆｉｇ．１ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ Ｇａｎｏｄｅｒｍａｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｎ
ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ Ｒａｓｓｐｂｅｒｒｙｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
２．２ 培养基筛选正交实验结果与分析
由表２、３可以看出，葡萄糖、黄豆粉、玉米粉对灵芝
发酵生产覆盆子黄酮影响显著，而酵母膏、ＫＨ２ＰＯ４、
表２ Ｌ１８（３７）正交实验结果
Ｔａｂｌｅ ２ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ Ｌ１８（３７）ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ
水平
Ａ
葡萄糖
Ｂ
黄豆粉
Ｃ
玉米粉
Ｄ
酵母膏
Ｅ
ＫＨ２ＰＯ４
Ｆ
ＭｇＳＯ４
Ｇ
ＶＢ１
黄酮含量
／ｍｇ·ｇ－１
１ １ １ １ １ １ １ １ ２．１８
２ １ ２ ２ ２ ２ ２ ２ ３．０５
３ １ ３ ３ ３ ３ ３ ３ ３．１５
４ ２ １ １ ２ ２ ３ ３ ２．８８
５ ２ ２ ２ ３ ３ １ １ ４．１２
６ ２ ３ ３ １ １ ２ ２ ３．７７
７ ３ １ ２ １ ３ ２ ３ ２．６５
８ ３ ２ ３ ２ １ ３ １ ３．８８
９ ３ ３ １ ３ ２ １ ２ ３．１３
１０ １ １ ３ ３ ２ ２ １ ２．７７
１１ １ ２ １ １ ３ ３ ２ ２．８３
１２ １ ３ ２ ２ １ １ ３ ３．７１
１３ ２ １ ２ ３ １ ３ ２ ３．６６
１４ ２ ２ ３ １ ２ １ ３ ４．５２
１５ ２ ３ １ ２ ３ ２ １ ４．２１
１６ ３ １ ３ ２ ３ １ ２ ３．７７
１７ ３ ２ １ ３ １ ２ ３ ３．２６
１８ ３ ３ ２ １ ２ ３ １ ３．５５
Ｋ１ ２．９４８ ２．９８５ ３．０８２ ３．２５０ ３．４１０ ３．５７２ ３．４５２
Ｋ２ ３．８６０ ３．６１０ ３．４５７ ３．５８３ ３．３１７ ３．２８５ ３．３６８
Ｋ３ ３．３７３ ３．５８７ ３．６４３ ３．３４８ ３．４５５ ３．３２５ ３．３６２
Ｒ ０．９１２ ０．６２５ ０．５６１ ０．３３３ ０．１３８ ０．２８７ ０．０９０
ＭｇＳＯ４、ＶＢ１的影响不显著，按照培养基成分的影响主
次顺序为：葡萄糖＞黄豆粉＞玉米粉＞酵母膏＞
ＭｇＳＯ４＞ＫＨ２ＰＯ４＞ＶＢ１，比较７个因素不同水平下的总
和，发现Ａ２Ｂ２Ｃ３Ｄ２Ｅ３Ｆ１Ｇ１条件下覆盆子黄酮产量最高，
在此条件下进行验证试验，覆盆子黄酮产量为
４．５８ｍｇ／ｇ高于正交实验中的最高值，由此确定灵芝发
酵生产覆盆子黄酮的适宜培养基条件为：葡萄糖
２０ｇ／Ｌ，黄豆粉１５ｇ／Ｌ，玉米粉５０ｇ／Ｌ，酵母膏１．０ｇ／Ｌ，
ＫＨ２ＰＯ４０．９ｇ／Ｌ，ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ０．２ｇ／Ｌ，ＶＢ１０．０１ｇ／Ｌ。
表３ 培养基优化Ｌ１８（３７）正交实验方差分析
Ｔａｂｌｅ ３ Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｂｏｕｔ
ｔｈｅ ｅｆｅｃｔ ｏｆ Ｌ１８（３７）ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ
因素 偏差平方和 自由度 Ｆ比 Ｆ临界值 显著性
葡萄糖 ２．４９７ ２ ８３．２３３ １９．０００ ＊
黄豆粉 １．５０６ ２ ５０．２００ １９．０００ ＊
玉米粉 ０．９８２ ２ ３２．７３３ １９．０００ ＊
酵母膏 ０．３５２ ２ １１．７３３ １９．０００
ＫＨ２ＰＯ４ ０．０６０ ２ ２．０００ １９．０００
ＭｇＳＯ４ ０．２８９ ２ ９．６３３ １９．０００
ＶＢ１ ０．０３０ ２ １．０００ １９．０００
误差 ０．０３ ２
３ 结论
该研究对灵芝发酵生产覆盆子黄酮的工艺进行了研
究，通过比较不同发酵时间覆盆子黄酮含量，得出最佳的
发酵时间为１２０ｈ；通过Ｌ１８（３７）正交实验设计对灵芝发酵
生产覆盆子黄酮基础培养基进行了优化研究，结果得出灵
芝发酵生产覆盆子黄酮的基础培养基组合为：葡萄糖
２０ｇ／Ｌ，黄豆粉１５ｇ／Ｌ，玉米粉５０ｇ／Ｌ，酵母膏１．０ｇ／Ｌ，
ＫＨ２ＰＯ４０．９ｇ／Ｌ，ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ０．２ｇ／Ｌ，ＶＢ１０．０１ｇ／Ｌ；
在上述培养基条件下，灵芝发酵覆盆子后黄酮含量达到
４．５８ｍｇ／ｇ，与对照组（不接种灵芝）相比含量提
高９６．５７％。
参考文献
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Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ Ｌ．ｂｙ ＧａｎｏｄｅｒｍａＦｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ
ＺＨＵ Ｈｕｉ－ｘｉａ
（Ｈｅｎｇｓｈｕｉ Ｃｏｌｅｇｅ，Ｈｅｎｇｓｈｕｉ，Ｈｅｂｅｉ ０５３０００）
０７１
北方园艺２０１３（１５）：１７１ 植物·园林花卉·
第一作者简介：陈惠瑜（１９６３－），女，农艺师，研究方向为作物栽培。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｔａｎｇｙｉｐｅｉ＠１２６．ｃｏｍ．
收稿日期：２０１３－０４－０９
北疆芦竹的扦插快繁技术
陈 惠 瑜１，吕 军２
（１．新疆石河子科技局，新疆 石河子８３２０００；２．新疆石河子农业科技开发研究中心，新疆 石河子８３２０１１）
中图分类号：Ｓ ７９５．８ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００１－０００９（２０１３）１５－０１７１－０１
芦竹（Ａｒｕｎｄｏ ｄｏｎａｘ）属禾本科芦竹属多年生粗壮
草本植物，又称荻芦竹，是介于芦苇与竹子之间的１种
非木材纤维原料，分布于温、热带地区。对土壤要求不
严格，河堤碱地均可种植，而且生长在水边地带还可以
净化污水［１］。芦竹的繁殖力强，其繁殖方法有分株繁
殖、扦插繁殖等。分株繁殖成活率高，但繁殖系数太低，
且植株大小不一，生长不一致；扦插繁殖系数高，但成活
率受扦插技术和环境影响较大。芦竹在新疆北部是稀
有的绿化材料、主要用于水景园的背景材料，也可点缀
于桥、亭、榭四周，也是北疆难得造纸材料，在滴灌条件
下可保证芦竹喜水的特性，加之北疆光照充足，有较大
的生长量，１ａ即可收获，３ａ后稳产，６６７ｍ２ 产量可达
５～６ｔ，但由于北疆冬季种条保存要求高，苗床水分不易
掌握，且温室的空气干燥，芦竹插穗中空，易抽干，繁殖
成苗率低，现针对近几年的实际操作，总结出了一套北
疆芦竹扦插快繁技术，成功地提高了扦插成苗率，总结
如下。
１ 取种条
１０月下旬，室外温度稳定在－２～５℃，芦竹根部进
入休眠，地上部分叶子枯黄，即可取种条，砍１～１．５ｃｍ
粗木质化程度高的茎秆作为种条，距地面３～４ｃｍ锯成
平口，去除尾梢，脱叶，２０～３０根为１个小捆紧扎准备冬
藏。注意取种条低于－５℃芦竹种条上生长点受冻不易
发芽，扦插成活率低。温度高于０℃，采种条有伤流，而
且冬藏时易霉变，影响种条扦插成活率。
２ 种条保存
把取下的种条及时埋于地面以下４０～８０ｃｍ之间，
湿细沙冬藏。
３ 苗床准备
苗床为２０ｃｍ深，长４ｍ、宽２ｍ的小池，根据育苗
量增加育苗池的个数。育苗池底部夯实，一侧较另一侧
高５ｃｍ，形成坡面，坡面要顺坡抹平，厚膜铺底，较低侧
留５ｃｍ长的小沟，用于排除多余水分，用膜作隔离，可
防止土传病害的发生。育苗基质准备：粗沙与蛭石按
１∶１比例混合，平铺于育苗池，厚约１５ｃｍ。苗床防病措
施：７５％五氯硝基苯可湿性粉剂每１ｍ２ 用３ｇ与基质
拌匀。
４ 插穗准备
翌年３月初，把冬藏的种条取出，电锯切段，注意切
口要平，芦竹不易破裂受损，芦竹节间较长，每段插穗保
留１个节，节下留３～４ｃｍ，节上可留５～７ｃｍ。
５ 扦插
把处理过的插穗按行距５ｃｍ、株距５ｃｍ，等距扦插
于苗床，节位深于基质表面２ｃｍ。
６ 苗床管理
温度和湿度的控制：苗床温度稳定于２０～２５℃，气
温控制在２０～３０℃，采用继电装置控制微喷增加空气湿
度６５％～７０％。一般５ｄ左右芽开始萌动。
灌水：前期苗床稍湿，勤灌水保持湿润，不积水，后
期见干见湿，以增加根的数量及长度。
７ 练苗
移栽前练苗，移栽前１０ｄ逐步通风、透光，逐渐减小
空气及土壤湿度。
该方法用于北疆芦竹快繁，出芽整齐，根系较多，成
苗率高，移栽成活率高，苗床底具坡度解决了苗期积水
问题，极好地预防了苗期的病害。
参考文献
［１］ 高斌，李卫国，等．芦竹制浆初探［Ｊ］．纸和造纸，２００１（４）：
４０．
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ａｎｄ Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ Ｌ．ａｓ ｍａｔｅｒｉａｌｓ，ｔｈｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ａｎｄ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ
Ｇａｎｏｄｅｒｍａｂｅｆｏｒｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｎｏｉｄ ｆｒｏｍＲｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ Ｌ．ｗｅｒｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ Ｌ１８（３７）ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄｅｓｉｇｎ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｍｅｄｉｕｍ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ（ｇ／Ｌ）ｗｅｒｅ Ｇｌｕｃｏｓｅ ２０ｇ／Ｌ，Ｏｙｂｅａｎ
ｐｏｗｄｅｒ １５ｇ／Ｌ，Ｃｏｒｎ ｆｌｏｕｒ ５０ｇ／Ｌ，Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ １．０ｇ／Ｌ，ＫＨ２ＰＯ４０．６ｇ／Ｌ，ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ ０．２ｇ／Ｌ，ＶＢ１０．０１ｇ／Ｌ；
ｕｎｄｅｒ ｔｈｅｓｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｗａｓ ４．５８ｍｇ／ｇ，ｗｈｉｃｈ ｒｅｖｅａｌｅｄ ａ ９６．５７％ｉｎｃｒｅａｓｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ
ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（ｗｉｔｈｏｕｔ ｔｈｅ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇａｎｏｄｅｒｍａ）．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｇａｎｏｄｅｒｍａ；Ｒｕｂｕｓ ｉｄａｅｕｓ Ｌ．；ｆｌａｖｏｎｏｉｄ
１７１