全 文 ：露水草愈伤组织的诱导及分化研究
邱 璐 1 , 罗春梅 2 , 王 波 1 , 李艳华2 , 萧凤回 3 , 郑才智 1 , 黄 静 1 , 周银燕 1
(1.楚雄师范学院生化系 ,云南楚雄 675000;2.云南省楚雄农业学校 ,云南楚雄 675000;3.云南农业大学 ,云南昆明 650201)
摘要:以露水草的种子为外植体 , 以 10%次氯酸钠为消毒剂 ,以 20 ～ 30 min为消毒时间建立无菌苗具有最
好效果;MS培养基较适合露水草愈伤组织的形成和芽的分化;以 MS+6-BA1.0 mg/L+NAA1.0 mg/L的激素
组合诱导露水草的种子和茎形成愈伤组织 , 并分化成芽具有较好效果 , 露水草的根 、叶形成愈伤组织的能力较
差;露水草的种子 、茎段易于诱导形成不定芽;KT、6-BA对露水草不定芽的形成是必要的 , 其效果明显优于 ZT
和 2-ip, 以 MS+KT1.0 mg/L+NAA0.1mg/L或 MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1 mg/L的激素组合诱导露水
草的种子 、茎段形成不定芽具有较好效果。
关键词:露水草;组织培养;愈伤组织;不定芽
中图分类号:S567.23+9.035.3 文献标识码:A 文章编号:1002-1302(2007)02-0158-04
收稿日期:2006 -09-08
基金项目:云南省中药现代化科技产业专项;楚雄州政府资助项目。
作者简介:邱 璐(1965— ),女 , 四川人 ,硕士 ,副教授 , 主要从事植
物组织培养及转基因研究工作。 Tel:(0878)3100507;E-mail:
qiulu5@vip.sina.com。
露水草又名珍珠露水草 (Cyanotisarachnoidea
C.B.Clarke),是鸭跖草科兰耳草属的多年生宿根草
本 ,是提取昆虫 β -蜕皮激素的优良原料 ,是迄今发
现含 β -蜕皮激素最多的资源植物。其 β -蜕皮激
素的含量达全草干重的 1.2%,地下部分 β -蜕皮激
素含量达干重的 2.9%[ 1] 。 β -蜕皮激素 (β -
ecdysone)又称 20 -羟基蜕皮甾酮 (20 -hydroxy
ecdysterone),其分子式 C27H44O7 ,分子量 480[ 2] 。它
能促进昆虫化蛹 ,缩短蚕龄 ,促进蚕吐丝 ,提高蚕丝
的质量与产量。它还能抑制昆虫进食 ,可作为选择
性杀虫剂。经药理与临床研究 , β -蜕皮激素具有
补虚除湿 、舒筋活血的功效。 《滇南本草 》中记载
“治一切虚症 ,阳痿无子 ,采服之 ”;《昆明民间常用
草药》中记载 “发汗除湿 ,清阴热 ” [ 3] 。它还能促进
人体内蛋白质尤其是肝脏蛋白的合成 ,可以排除体
内胆固醇的积累 ,抑制血糖上升 ,还有降血压的作
用 [ 1] 。另外还用于化妆品中 ,有防皱嫩肤的效果 。
1 材料与方法
1.1 材料
露水草的种子及茎段均采自楚雄农校药园 。
1.2 方法
1.2.1 不同外植体 、消毒剂 、消毒时间对无菌苗建
立的影响 以 MS为基本培养基 ,以 KT1.0 mg/L+
NAA0.1 mg/L为激素配比 ,以刚采摘的露水草成熟
种子 、叶片 、去叶幼嫩茎段为外植体 , 10%次氯酸钠
(NaClO)消毒 ,设置消毒时间为 15、20、25、30 min;
0.2% HgCl2消毒 ,设置消毒时间为 2、2.5、3、3.5、4
min,以筛选出最佳的外植体部位 、最佳消毒剂种类
及消毒时间。消毒后用无菌水冲洗 5 ～ 8次 ,茎 、叶
直接接种 ,种子用无菌水浸泡 5 ～ 10 h后接种。消
毒剂消毒前均用洗涤剂清洗种子 5 min,再用流水冲
洗 5 min。
1.2.2 不同基本培养基对愈伤组织诱导的影响
以露水草无菌种子为材料 ,以 6 -BA1.0 mg/L+
NAA1.0 mg/L为激素种类及配比 ,以 MS、1 /2MS为
对照 ,以筛选出最佳基本培养基。接种后暗处理 30
d进行统计(以下同)。
1.2.3 不同外植体部位对愈伤组织诱导的影响
以 MS为基本培养基 ,以 6 -BA1.0 mg/L+NAA
1.0 mg/L为激素种类及配比 ,以露水草无菌种子及
无菌苗的根 、茎 、叶为材料 ,对露水草的种子 、根 、茎 、
叶形成愈伤组织的能力进行比较 。
1.2.4 不同激素种类及配比对愈伤组织诱导的影
响 以种子为外植体 ,以 MS为基本培养基 ,设置 7
组不同种类及配比的激素进行对比 ,以筛选出最佳
激素种类及配比 。第 1组:2, 4 -D1.5 mg/L;第 2
组:2, 4 -D1.5 mg/L+6 -BA1.5 mg/L;第 3组:
2, 4 -D1.5 mg/L+KT1.5 mg/L;第 4组:2, 4 -D
1.5 mg/L+ZT1.5 mg/L;第 5组:2, 4 -D1.5 mg/L
—158— 江苏农业科学 2007年第 2期DOI :10.15889/j.issn.1002-1302.2007.02.059
+2 -ip1.5 mg/L;第 6组:2, 4 -D1.5 mg/L+NAA
1.5 mg/L;第 7组:6 -BA1.5 mg/L+NAA1.5
mg/L。
1.2.5 不同浓度的 6 -BA与 NAA对愈伤组织诱
导的影响 以叶为外植体 ,以 MS为基本培养基 ,设
置 4组不同的 6 -BA与 NAA浓度进行比较 ,以筛
选出最佳 6 -BA与 NAA浓度。第 1组:6 -BA1.5
mg/L+NAA1.5 mg/L;第 2组:6 -BA1.0 mg/L+
NAA1.0 mg/L;第 3组:6 -BA0.5 mg/L+NAA0.5
mg/L;第 4组:6-BA0.1 mg/L+NAA0.1 mg/L。
1.2.6 不同外植体部位对不定芽形成的影响 以
MS为基本培养基 ,以 KT1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L
为激素种类及配比 ,以露水草无菌种子及无菌苗的
根 、茎 、叶为材料 ,对露水草的种子 、根 、茎 、叶形成不
定芽的能力进行比较 。接种后给予 7 d时间的暗处
理 ,然后光照 ,光照强度 2 000 lx,培养温度 21 ～ 26
℃。接种后 30 d统计(以下同)。
1.2.7 不同激素种类及配比对不定芽形成的影响
以种子为外植体 ,以 MS为基本培养基 ,设置 6组
不同种类及配比的激素进行对比 ,以筛选出最佳激
素种类及配比。第 1组:6 -BA1.0 mg/L+NAA
0.1 mg/L;第 2组:KT1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L;
第 3组:ZT1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L;第 4组:
2 -ip1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L;第 5组;6 -BA
1.0 mg/L;第 6组:不加任何激素的 MS。
2 结果
2.1 不同外植体 、不同消毒剂 、不同消毒时间对无
菌苗建立的影响
对表 1的无菌率及成活率统计分析结果显示 ,
以种子作外植体 , 10% NaClO消毒 30 min与 0.2%
HgCl2消毒 2 min的无菌率差异不显著 , uc=1.724
>u0.01 , P<0.01。说明以露水草种子为外植体 ,以
10% NaClO消毒 20 ～ 30 min明显优于 0.2% HgCl2
消毒 2 min。以茎段作外植体 , 10% NaClO消毒 30
min与 0.2% HgCl2消毒 3 min的无菌率差异极显
著 , uc=3.688 >u0.01 , P<0.01;萌发率差异也极显
著 , uc=3.161 >u0.01 , P<0.01。 0.2% HgCl2对茎
段的消毒效果明显优于 10% NaClO消毒 30 min。
以叶作外植体 , 10% NaClO消毒 30 min与 0.2%
HgCl2消毒 3 min的无菌率差异极显著 , uc=2.634
>u0.01 , P<0.01;萌发率差异显著;uc=2.108 >
u0.05 , P<0.05。 0.2% HgCl2对叶的消毒效果明显
优于 10% NaClO消毒 30 min。试验还发现以露水
草茎段 、叶为外植体建立无菌苗 ,虽然 0.2% HgCl2
作为消毒剂明显优于 10% NaClO,但消毒效果仍然
较差 ,无菌率及萌发率均较低 。 10% NaClO对露水
草的茎段 、叶几乎无消毒效果 。
2.2 不同基本培养基对愈伤组织诱导的影响
在 MS培养基上不仅愈伤形成时间早 ,而且愈
伤诱导率高(95%),愈伤长势旺。而在 1/2MS培养
基上虽愈伤诱导率也较高(90%),但愈伤形成时间
晚 ,愈伤长势不如 MS。对表 2的愈伤组织诱导率进
行统计分析结果显示 , uc
与 1/2MS的愈伤诱导率差异不显著 。但从愈伤组
织形成时间和愈伤组织的长势来看 , MS培养基明显
优于 1 /2MS培养基。
表 1 不同外植体、消毒剂 、消毒时间对无菌苗建立的影响
消毒剂 消毒时间(min)
种 子
未污染数
(粒)
萌发数
(粒)
无菌率
(%)
萌发率
(%)
茎 段
未污染数
(个)
萌发数
(个)
无菌率
(%)
萌发率
(%)
叶
未污染数
(个)
萌发数
(个)
无菌率
(%)
萌发率
(%)
10% NaClO 15 12 10 60 50 0 0 0 0 0 0 0 0
20 18 16 90 80 0 0 0 0 0 0 0 0
25 19 18 95 90 1 1 5 5 1 1 5 5
30 20 19 100 95 2 2 10 10 2 2 10 10
0.2% HgCl2 2.0 14 5 70 25 4 3 20 15 5 3 25 15
2.5 16 4 80 20 7 4 35 20 7 4 35 20
3.0 18 3 90 15 10 9 50 45 8 7 40 35
3.5 20 2 100 10 16 3 80 15 15 3 75 15
4.0 20 1 100 5 19 1 95 5 18 2 90 10
注:种子 、茎段 、叶接种数均为 20。
2.3 不同外植体部位对愈伤组织诱导的影响
露水草的种子 、茎在 MS+6 -BA1.0 mg/L+
NAA1.0 mg/L上易于形成愈伤组织 , 且愈伤组织
易于分化成芽 ,不定芽数高达 4 ～ 6个。表 3的统计
—159—邱 璐等:露水草愈伤组织的诱导及分化研究
表 2 不同基本培养基对愈伤组织诱导的影响
基本培养基 形成愈伤的时间(d)
愈伤诱导率
(%) 愈伤长势
MS 7 95 +++++
1/2MS 12 90 +++
注:愈伤长势 , “ +++++”表示最好 , “ ++++”表示较好 , “ +++”
表示好 , “ ++”表示一般 , “ +”表示差(以下同)。
表 3 不同外植体对愈伤组织诱导的影响
外植体 愈伤形成时间(d)
愈伤诱导率
(%)
愈伤
长势
愈伤
颜色
不定芽形
成数(个)
种子 7 100 ++++ 黄色 5～ 6
根 16 13 + 黄色 0
茎 9 100 ++++ 黄色 4～ 5
叶 13 19 + 黄色 0
结果 , χ2 =290.39 >χ0.01 2 =11.34, P<0.01,说明不
同外植体部位形成愈伤组织的能力差异极显著 ,种
子 、茎形成愈伤组织的能力较强 ,根 、叶形成愈伤组
织的能力较差 。其中 ,种子与茎之间 ,根与叶之间差
异不显著 , uc
2.4 不同激素种类及配比对愈伤组织诱导的影响
露水草种子易形成愈伤组织 ,第 1 ～ 7组培养基
均能诱导露水草种子形成愈伤组织 ,且形成率均较
高。对表 4的愈伤组织诱导率进行统计分析 ,结果
显示 , χ2 =44.66>χ0.01 2 =16.81, P<0.01,说明不同
激素种类及配比对愈伤组织诱导的影响差异极显
著。第 7组培养基 MS+6 -BA1.5 mg/L+NAA
1.5 mg/L诱导露水草形成愈伤组织有显著优势 ,其
愈伤诱导率高 ,长势最佳 ,呈黄绿色 ,能分化形成不
定芽 。第 1 ～ 6组培养基能形成愈伤组织 ,但愈伤组
织长势不佳 ,且未观察到不定芽分化形成(表 4)。
表 4 不同激素种类及配比对愈伤组织诱导的影响
组号 培养基 愈伤形成时间(d)
愈伤诱导率
(%) 愈伤长势 愈伤颜色
不定芽形成数
(个)
1 MS+2, 4-D1.5 mg/L 15 100 + 黄色 0
2 MS+2, 4 -D1.5 mg/L+6-BA 1.5 mg/L 10 80 ++ 黄色 0
3 MS+2, 4 -D1.5 mg/L+KT1.5 mg/L 11 84 ++ 黄色 0
4 MS+2, 4-D 1.5 mg/L+ZT1.5 mg/L 10 85 ++ 黄色 0
5 MS+2, 4 -D1.5 mg/L+2-ip1.5 mg/L 11 86 ++ 黄色 0
6 MS+2, 4 -D1.5 mg/L+NAA1.5 mg/L 12 100 + 黄色 0
7 MS+6 -BA 1.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L 7 95 +++++ 黄绿色 4～ 5
2.5 不同浓度 6 -BA与 NAA对愈伤组织诱导的
影响
第 1 ～ 4组浓度均能 100%诱导露水草种子形
成愈伤组织 ,但愈伤组织的长势及分化形成不定芽
的效果各不相同 。随 6 -BA与 NAA浓度的升高 ,
愈伤组织的生长速度越快 ,长势也越好 。当浓度为
6 -BA1.0 mg/L+NAA1.0 mg/L时愈伤的长势最
好 ,超过该浓度 ,如 6 -BA1.5 mg/L+NAA1.5
mg/L时 ,愈伤组织长势有所下降 ,分化形成的不定
芽数也有所减少(表 5)。
表 5 不同浓度 6-BA与 NAA对愈伤组织诱导的影响
组号 培养基 愈伤形成时间(d)
愈伤诱导率
(%) 愈伤长势 愈伤颜色
不定芽形成数
(个)
1 MS+6 -BA 1.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L 7 100 ++++ 黄绿色 5～ 6
2 MS+6 -BA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L 8 100 +++++ 黄绿色 6～ 7
3 MS+6 -BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L 9 100 +++ 黄绿色 3～ 4
4 MS+6 -BA 0.1 mg/L+NAA 0.1 mg/L 10 100 ++ 黄绿色 2～ 3
2.6 不同外植体对不定芽形成的影响
露水草的种子 、茎易于形成不定芽 ,且不定芽的
长势较好。叶形成不定芽的能力较差 ,露水草的根
未观察到直接分化形成的不定芽(表 6)。
2.7 不同激素种类及配比对不定芽形成的影响
第 2组培养基 MS+KT1.0 mg/L+NAA0.1
mg/L可作为首选配方 ,它对露水草不定芽的形成及
表 6 不同外植体对不定芽形成的影响
外植体 形成不定芽的时间(d)
形成不定芽数
(个) 不定芽长势
种子 10 7 ++++
根 0 0
茎 7 6 ++++
叶 20 1～ 2 +
—160— 江苏农业科学 2007年第 2期
根 、茎 、叶的生长发育效果最好 ,苗的长势最好 、最健
壮 。另外 ,第 1组培养基 MS+6 -BA1.0 mg/L+
NAA0.1 mg/L苗的长势及增殖系数虽不如第 2组
培养基 ,但也有较好效果 。ZT、2 -ip诱导露水草不
定芽的效果均不如 KT和 6 -BA,而且差异显著 。
第 5组培养基只有细胞分裂素 6 -BA1.0 mg/L,没
有加生长素 ,虽种子发芽较快 ,但长势极差 ,苗矮 ,叶
细 ,种子萌发成苗后生长几乎停滞 。第 5组培养基
比第 6组不加任何激素的 MS长势还差(表 7)。
表 7 不同激素种类及配比对不定芽形成的影响
组号 培养基 形成不定芽数(个)
苗高
(cm)
叶宽
(cm) 叶色
根数
(条)
根长度
(cm) 苗的长势
1 MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L 6 3.5 0.35 绿紫色 1 ～ 2 0.5～ 0.6 ++++
2 MS+KT1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L 7 6.0 0.40 绿色 7 ～ 8 1.0 ++++
3 MS+ZT1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L 3 3.0 0.30 绿紫色 2 0.5 +++
4 MS+2-ip1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L 2 2.5 0.20 绿紫色 1 1.0 +++
5 MS+6 -BA 1.0 mg/L 1 1.5 0.10 绿色 1 ～ 2 0.1 +
6 MS 1 3.0 0.15 绿色 1 1.0 ++
3 讨论
露水草全株密被白色丝状毛 ,地上部分有发达
的莲座状基生叶 ,花排列密集 ,植株匍匐状生长 ,离
地面近 ,易被泥土污染 ,而且含有内生细菌 、真菌 。
因此 ,以露水草根 、茎 、叶 、花等做外植体难以消毒彻
底 ,无菌苗成功率较低 。一般以露水草种子为外植
体效果较好 。由于露水草种子较小 ,种皮较薄 ,对
HgCl2较为敏感 ,一般不用 HgCl2消毒 ,而以 10%
NaClO消毒 20 ～ 30 min效果最好 。
2, 4-D对露水草愈伤组织的形成并非必要 ,这
与林如辉使用 KT、2, 4 -D或 NAA配比对露水草愈
伤组织生长不利的试验结果相似 [ 4] 。本试验中 ,不
论 2 , 4 -D单独使用 ,还是与 6 -BA、KT、ZT、2 -ip、
NAA组合使用 ,诱导愈伤的效果均不理想 。 2, 4 -D
在诱导很多植物形成愈伤组织中起着重要的不可替
代的作用 ,但 2, 4 -D对胎儿发育不利 ,对动物和人
的神经中枢有严重损伤作用 ,造成孕妇畸胎 ,其次还
阻碍植物次生代谢产物形成 ,影响愈伤组织分化成
苗 [ 5] 。而本试验结果说明 , 6-BA与 NAA组合诱导
露水草愈伤组织形成明显优于 2, 4-D,这有利于减
少 2 , 4 -D的使用 ,有利于中药材次生代谢产物形
成 ,有利于愈伤组织进一步分化成苗 ,有利于中药材
的无公害生产。
KT、6 -BA诱导露水草不定芽的形成 、增殖 、生
长是必要的 ,其效果明显优于 ZT及 2 -ip。 KT能较
好地促进露水草不定芽生长 ,促进叶快速生长 ,叶色
浓绿 ,具有较好的保绿作用 ,其苗高及叶宽均有较大
优势 , 增殖系数也较高。 6 -BA促进露水草苗生
长 、叶增宽 、保绿效果及芽的增殖虽不如 KT,但苗较
为健壮 ,长势较好 ,带有正常的紫色 ,且增殖系数也
较高 。从降低成本的角度考虑 ,可用 6 -BA代替
KT。ZT、2 -ip促进露水草生长及增殖的效果不如
KT、6 -BA。
在植物组织培养中 ,细胞分裂素具有促进芽生
长的作用 ,生长素具有促进根生长的作用 ,但两者需
配合协调使用[ 6] 。本试验中 , 在只有细胞分裂素
6 -BA,没有生长素的培养基中 ,虽种子发芽较快 ,
但苗矮 、叶细 ,苗的生长几乎停滞 ,长势极差 ,比在不
加任何激素的 MS培养基上长势还差。说明没有生
长素 ,细胞分裂素不能促进芽生长 ,相反会严重抑制
茎 、叶生长 。因为生长素能诱导细胞壁酶合成 ,增加
细胞壁的可塑性 ,促使原生质的黏度下降 ,流动性增
强 ,对水和溶质的透性提高 ,促进营养物质进入细
胞 ,从而促进纵向伸长生长。细胞分裂素具有促进
细胞分裂和横向生长的作用 ,但没有生长素 ,细胞壁
不能松弛 ,其横向及纵向生长都不可能实现 [ 7] 。
激动素 /生长素的克分子比例决定着组织是生
根还是生芽 ,比值高时 ,诱导芽的形成;两者的克分
子浓度大致相等时 ,愈伤组织生长而不分化;比值小
时 ,即生长素浓度相对大于激动素时 ,开始有长根的
趋势 [ 5] 。但本试验中 ,等浓度的 6 -BA与 NAA组
合不仅能较好诱导露水草愈伤组织形成 ,而且能较
好促进露水草愈伤组织分化成苗 。本试验结果与在
灯盏花 、贯叶连翘等中药材组织培养研究中的试验
结果相同 [ 8] 。
本试验结果为露水草的离体快速繁殖 、次生代
谢研究及遗传转化研究奠定了基础。
(下转第 162页)
—161—邱 璐等:露水草愈伤组织的诱导及分化研究
濒危植物珙桐 ISSR-PCR反应体系的建立
李雪萍 1, 2 , 何正权 1 , 陈发菊1, 2 , 梁宏伟1 , 姚 伟 1 , 李凤兰 2
(1.三峡大学生物技术研究中心 ,植物天然产物研究与利用湖北省重点实验室 ,湖北宜昌 443002;
2.北京林业大学生物科学与技术学院 ,北京 100083)
摘要:以珙桐叶片为材料 ,通过单因子试验分别研究了退火温度 、TaqDNA聚合酶用量 、dNTP浓度 、Mg2 +浓
度 、引物浓度和模板 DNA浓度对 ISSR-PCR反应的影响 , 建立了适宜于珙桐 ISSR分析的扩增体系 ,即 25 μl的
反应体系中:模板 DNA20 ng, Mg2 + 1.5 mmol/L,引物 0.6 μmol/L, dNTP0.20 mmol/L, TaqDNA聚合酶 1.5 U。
关键词:珙桐;ISSR;反应体系;优化
中图分类号:S792.990.04 文献标识码:A 文章编号:1002-1302(2007)02-0162-04
(上接第 167页)
参考文献:
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研究 [ J] .安徽农业科学 , 2006, 34(1):19-22.
珙桐(DavidiainvolucrataBail.)为珙桐科珙桐
属落叶大乔木 ,我国特有的单型属孑遗植物 ,属第三
纪古热带植物区系的残余种 ,被列为国家一级保护
植物[ 1] 。珙桐天然分布在贵州 、湖南 、湖北 、陕西 、
四川 、云南及甘肃 7省 ,分布范围较窄 ,资源量较少 ,
仅限于一些边远山区人迹罕至之处 [ 2] 。珙桐素有
“中国活化石 ”之称 ,在植物系统发育和地史变迁上
有很高的研究价值 ,对珙桐进行研究 ,可以为有效保
护和合理利用珙桐提供必要的科学依据。
简单重复序列区间扩增多态(ISSR)DNA分析
是由 Zietkiewicz等 [ 3] 于 1994年建立的一项新的
DNA标记技术 。它结合了 SSR和 RAPD技术的优
点 ,不仅操作简单 、所需 DNA量少 、不需预知研究对
象的基因组序列 ,而且稳定性高 。因此 , ISSR近年
收稿日期:2006 -10-17
基金项目:湖北省自然科学基金项目(编号:2006ABA201)。
作者简介:李雪萍(1981— ),女 ,河南洛阳人 ,博士生 ,从事植物生物
多样性研究。 E-mail:l xx p 98000@ 163.com。 通讯作者:何正
权 ,博士 ,硕导。 Tel:(0717)6397188;E-mail:zhq he@ctgu.edu.
cn。
来已迅速应用于品种鉴定 、种质资源和遗传多样性
的研究 ,并作为构建遗传图谱的工具[ 4-8] 。但至今
未见将 ISSR技术应用于珙桐相关研究的报道 。
本研究对影响 ISSR-PCR扩增体系的相关因
素进行优化筛选 ,建立了适于珙桐的简单 、高效 、稳
定的 ISSR反应体系 ,为进一步开展珍稀濒危植物珙
桐遗传多样性的 ISSR分析奠定了基础 。
1 材料与方法
1.1 植物材料
试验材料均采自神农架地区 ,取其幼叶于冰壶
中带回实验室 ,置于 -70 ℃超低温冰箱中保存
备用 。
1.2 基因组 DNA的提取与检测
参考邹喻苹等 [ 9]介绍的 CTAB法 ,稍做改良后
提取珙桐的总 DNA[ 10] 。在紫外可见光分光光度计
(HITACHIU-2800)上 ,于波长 260 nm处测定其光
吸收值 ,计算 DNA浓度。用含有 EB的 1%琼脂糖
凝胶电泳检测 ,自动凝胶成像系统(BIO-RAD)观
察拍照。
—162— 江苏农业科学 2007年第 2期