全 文 ：5 6 北方药学 年第 卷第 期
· 药剂与工 艺 ·
山珠半夏提取纯化工艺研究
谭燕萍 李晓凤 “ 冯学轩 “ 张 腮 “ 余秀婷 广东省佛山市禅城区朝阳医院 佛山 广东
省广州中医药大学 广州
摘要 目的 探讨 山珠半夏的最佳提取纯化工艺 , 以便更有效 、 合理地开发利用云南山珠半夏植物资源 。 方法 以 总游离氨基酸的含
量为指标 , 采用正交试验法对中药山珠半夏的提取工艺进行优选 , 并对其纯化方法进行考察 。 结果 最佳的纯化方法为微孔滤膜过
滤法 , 最佳提取工艺条件为 倍量 乙醇 , ℃水浴中连续 回流提取 次 , 每次 住 且此方法简便、 稳定 、 工艺合理 。
关键词 汕珠半夏 游离氨基酸 提取工艺 紫外分光光度法
中图分类号 文献标识码 文章编号 一 一 一
山珠半夏为天南星科植物山珠半夏 `一下又, 一一下的干燥块茎 云南地区常用作 “ 半夏 ” 入药 商品名称为“ 山珠半夏 ” ,收载于 《云南省药品标准 》 版 为云南省大
宗药材之一 。 山珠半夏全省各地均产 , 常见于海拔
的阔叶林 、 松林或草坡灌丛中 。 其块茎入药 味辛 、 性
温 ,有毒 具 有燥湿化痰 、 消痞散结 、 止咳 、 降逆止呕的功效叹云南民间广泛应用山珠半夏药材 在寒湿痰饮 、 湿热痰饮 、 风
湿骨痛 、 风湿关节痛等的治疗中都有配伍此药 。
据文献报道 山珠半夏中含有多种氨基酸 。 氨基酸作为有
机生命体组织细胞的基本组成成分 , 对生命活动发挥着举足
轻重的作用 。 中国药典 版 中 要求半夏必须检出精氨
酸 、 丙氨酸 、 亮氨酸 、 撷氨酸的存在 放总游离氨基酸的含量对
山珠半夏的质量影响较大 〕。
山珠半夏虽于 年已收载入 《云南省药品标准 》但仅
作了性状鉴别类规定 , 而仅从性状鉴别难以达到目前中药现
代化 、 国际化 、 规范化的标准 。 为了更有效 、 合理地开发利用云
南山珠半夏植物资源 本文利用正交设计法 考察影响山珠半夏中总游离氨基酸提取纯化的主要因素 , 筛选山珠半夏的最
佳提取纯化工艺 , 为该药材的深入研究及投入实际生产奠定
理论基础 。
仪器与试药
仪器 丑 一 型旋转蒸发仪 上海博通 万 一 循环水式
真空泵 河南巩义市英峪豫华仪器厂 尸 型电子
天平 瑞士产 , 一 型紫外分光光度计 。
试药 乙醇 、 无水乙醇 、 荀三酮 、磷酸二氢钾 、 氢氧化钠均为分
析纯 蒸馏水 ,山珠半夏购自昆明菊花村药材市场 ,由云南中医
学院中药鉴定教研室主任杨树德副教授鉴定为天南星科植物
珠半夏 。 的 燥块茎 。 撷氨酸对
照品 批号 一 由中国药品生物制品检定所提供 。
方法与结果
溶液的配制
荀三酮溶液的配制 称取荀三酮 飞 加无水乙醇使溶
解成 即得 荀三酮溶液 。
磷酸盐缓冲液的配制 取 住 磷酸二氢钾溶 液
, 加 住 氢氧化钠溶液 , 加蒸馏水稀释 至
摇匀 即得 值为 的缓冲液 。
撷氨酸标准品溶液 的制备 精密称取撷氨酸标准 品
置于 的容量瓶中 用蒸馏水溶解至刻度 ,即得浓
度为 住 留 的标准品溶液 。
测定波长的选择 取 份约 受试药材 精密称重 汾别
加入 巧 倍量的 乙醇 , ℃下分别回流提取 , 连续回
流提取 次 启并提取液 减压浓缩至小体积 无醇味 蒸馏
水定容至 用布氏漏斗双层滤纸过滤 量取 滤液 ,定
容至 得到 批待测样品溶液 另取上述撷氨酸标准品溶
液用紫外分光光度仪测定 。 结果见图 阵吉果表明撷氨酸标准
品溶液在 波长处有最大吸收 , 而 批山珠半夏样品中
的总游离氨基酸提取液均在 波长处有最大吸收 。
故选定 作为山珠半夏中游离氨基酸的测定波长 。
图 最大吸收波长扫描图谱 一 石样品 井标准品
标准曲线的绘制 分别取上述撷氨酸标准品溶液 、
、 、 、 置 的容量瓶中 用蒸馏水稀释
至刻度 。分别取稀释后的标准品溶液 加入 的荀三酮溶
液置 的容量瓶中 在沸水浴中加热 巧 分钟 取出冷却至
室温 加蒸馏水至刻度 静置 巧 分钟 测其在 处的吸光
度 ,以吸光度 为纵坐标 撷氨酸浓度 为横坐标绘
制标准曲线 结果撷氨酸浓度与吸光度成良好线性关系 ,回归
方程为 一 结果见表 一及图 。
表明撷氨酸在 儿 范围内 即其吸光度在 住
住 范围内 呈良好的线性关系 。
表 撷氨酸标准曲线数据表
编号 吸光度
刀
石
刽
石
名
刀
万
、`入
八卜气
厂潺薪蕊鳄蒸
图 撷氨酸标准曲线图
纯化方法考察 分别取药材 分别加入 巧 倍量的 乙
醇 , ℃下分别回流提取 , 连续回流提取 次 , 合并提取
液 减压浓缩至小体积 无醇味 蒸馏水定溶至 才民据游
离氨基酸的性质 分别用醇沉 、 布氏漏斗双层滤纸过滤 、 过微
孔滤膜 住 林 、 过 阳离子交换树脂四种方法纯化 精
密量取 纯化后溶液 ,定容至 廊三酮显色 规业其吸光
度分别为 一 一。
根据上述对纯化工艺考察的结果 , 用紫外可见分光光度
仪测定山珠半夏中游离氨基酸的含量的纯化工艺 , 本实验应
选择过 住 林 微孔滤膜的纯化方法进行纯化 此种方法中游
离氨基酸的损失最小 、提取效率最高 。
万 提取条件的单因素考察
北方药学 年第 卷第 期
万 乙醇用量的考察 分别取药材 汾别加入 倍量 、 巧
倍量 、 倍量 、 倍量 、 倍量的 乙醇 , ℃下分别回流
提取 连续回流提取 次 启并提取液 减压浓缩至小体积 无醇味 蒸馏水定溶至 精密量取 过微孔滤膜后
最终定容至 廊三酮显色测定 。 采用单因素方法考察 考察指标为乙醇用量 对应五种乙醇用量 , 测其吸光度分别为
。 以上结果表明 油
珠半夏提取工艺的正交优选实验中乙醇用量应对 巧 倍量 、
倍量 、 倍量三个水平进行考察 ,
万 乙醇浓度的考察 分别取药材 对应加入 倍量不同
浓度 万。 户。 , 另。 的乙醇 , ℃下分别回流提
取 连续回流提取 次 启并提取液 减压浓缩至小体积无醇味 蒸馏水定溶至 精密量取 过微孔滤膜后最
终定容至 显色测定 。 采用单因素方法考察 考察指标为
醇浓 度 对应 五 种 乙 醇 浓 度 , 测 其 吸 光度 分 别 为 住
。 以上结果表明 ,
珠半夏提取工艺的正交优选实验中乙醇浓度应对 、 、
三个水平进行考察 。
万 提取时间的考察 分别取药材 对应加入 倍量
乙醇 , ℃下分别回流提取 住 , , 江 连续回流提取 次 启并提取液 减压浓缩至小体积 无醇味 蒸馏水定
溶至 , 精密量取 过微孔滤膜后最终定容至 显色测定 。 采用单因素方法考察 考察指标为提取时间 。 结果表
明 , 五种不同提取时间条件下 , 其吸光度分均在 住 住
之间 池就是说 对间对山珠半夏中游离氨基酸的提取效果影
响不大 由于仪器性能等原因且时间为 住 时提取效果较好
故山珠半夏提取工艺的正交优选实验 中提取时间均采用
住 不再对提取时间的其他水平进行考察 。
万 提取温度的考察 分别取药材 对应加入 倍量
乙醇 在不同温度下 ℃ 户 ℃ , ℃ 另 ℃ 夕 ℃ 分别回流提取 住 连续回流提取 次 启并提取液 减压浓缩至小体积
无醇味 蒸馏水定溶至 精密量取 过微孔滤膜后最
终定容至 显色测定 。 采用单因素方法考察 考察指标为提取 温 度 对应 五种 提 取 温 度 , 测 其 吸光 度 分 别 为
。 以上结果表明 ,
珠半夏提取工艺的正交优选实验中提取温度应对 ℃ 、 ℃ 、
℃三个水平进行考察 。
万 提取次数的考察 分别取药材 对应加入 倍量
乙醇 在 ℃下分别回流提取 住 分别连续回流提取 次 、次 、 次 、 次 台并提取液 减压浓缩至小体积 无醇味 蒸馏水
定溶至 , 精密量取 过微孔滤膜后最终定容至 显
色测定 。 采用单因素方法考察 考察指标为提取次数 对应四种
提取次数 测其吸光度分别为 几 一 。
以上结果表明 , 山珠半夏提取工艺的正交优选实验中提取次
数应对 次 、 次 、 次三个水平进行考察 。
石 提取工艺设计 以游离氨基酸含量作为指标 根据单因素
试验结果 选择乙醇用量 、 乙醇浓度 、提取温度 、 提取次数等四
个因素进行四因素三水平正交设计 胧选较佳工艺 ,因素水平
表见表 工关 正交试验结果见表 方差分析见表 。
表 正交实验因素水平表
表 山珠半夏正交试验结果
试验编号 因素 总游离氨基酸平均吸光度 〕
一
一
一
一
一
一 以
。一
。一 」
一
石
石
石 川
一
。一 」
。一 」
狡棍
一
刃
一
。
一
。一叫
表 方差分析表
方差来源
刀
刀 习
误差
刀
习 刀
。。 , 刀。。 , 。
中提取 次 实验独立重复进行 次 结果表明 最佳工艺所
得结果比较理想 工艺比较稳定 总游离氨基酸的平均吸光度
为 住 均高于正交实验结果 征明该工艺可行 拭验结果
见表 。
表 优选工艺的重复性实验结果
编号 平均吸光度
吸光度 石 一 阮 石
水平 因素乙醇量 醇浓度 温度 提取次数
倍 ℃
倍 ℃
倍 ℃
由方差分析结果可知 , 因素 、 对实验结果具有显著性
影响 提取的最佳条件为 人 ,即 倍量 井。 的乙醇 ,
℃水浴中 提取 次 。
为进一步考察上述优选工艺的可行性 , 按上述优化条件
取 山珠半夏粗粉选用 倍药材量的 乙醇 , ℃水浴
小结与讨论
总游离氨基酸是山珠半夏的主要有效成分之一 , 具有非
常明显的生理活性 河抑制呕吐中枢而止 具有明显的抑制胃
液分泌作用 , 其稀醇提取液对多种原因所致的胃溃疡有显著
的预防和治疗作用 口〕。 参考 版药典 实验中用撷氨酸作为标准品是可行的 。 本实验采用乙醇回流提取 浓缩后直接过
住 林 微孔滤膜所得的总游离氨基酸的含量相较传统的醇
沉 、 阳离子交换树脂处理后更高 放本试验可为山珠半夏的质
量标准的制定提供一定的理论依据 刊 。 对山珠半夏进行研究
可为其质量标准的制定奠定基础 , 也可以为云南资源的开发
利用提供一定的理论和试验依据 , 创造一定的经济和社会效
益 为云南产业化发展做出应有的贡献 。
山珠半夏与半夏为同科植物 , 它们的主要有效成分均为多种游离氨基酸 、 生物碱及挥发油 对半夏的提取纯化及运用
的研究报道较多 , 故研究山珠半夏时可借鉴半夏的研究成果
进行 但根据其成分差异及含量不同要适当的取舍 。 以寻找较
好的山珠半夏提取纯化方法 。 云南山珠半夏资源较为丰富 其
总游离氨基酸含量较高 放对山珠半夏的进一步研究 、 开发利
用有较大的前景及价值 。
参考文献
国家药典委 员会 中华人民共和国药典 〔斗 版 , 第一部 ,
北京 化学工业 出版社 , ,
赵正荣 , 赵永成 半夏 、 山珠半夏与 水半夏的紫外光谱鉴别
中草药 , , 一 一 ,
曹玮娟 , 杨竹雅 , 梁晓原 紫外可见分光光度法测定 山珠半夏
中总游离氨基酸的含量 云南中医学院 学报 , , 一
5 8 北方药学 年第 卷第 期
正交试验法优选营心宁胶囊中挥发油的提取工艺研究
严启伟 范彦博 妙 王 薇 , “ 周才新 ,如 湖北省武汉市中医医院 武汉 巧 湖北省武汉市中医药
研究所国家中管局中药制剂三级实验室 武汉
摘要 目的 研究营心 宁胶 囊中挥发油的最佳提取工 艺。 方法 采用正交试验法 , 考察加水量 、 浸泡时 间和提取时 间 个因素对
挥发油提取量的影响 。 结果 营心宁胶囊制备工艺中挥发油的最佳提取工艺为 加入 倍量水 , 浸泡 分钟 , 提取 , 、 时。 结
论 优选的工艺简便可行 , 稳定性好 , 挥发油提取量最高 。
关键词 营心宁胶囊 挥发油 提取工艺 正 交试验
中图分类号 文献标识码 文章编号 一 一 一
极显著差异 住 说明此因素对挥发油提取量影响最大
加水量 、 浸泡时间无显著差异 乃住 其对挥发油提取量影
响较小 。 综合以上分析 , 优化的挥发油提取工艺条件为
,即加入 倍量水 浸泡 提取 。
表 营心宁胶囊挥发油提取正交试验结果
试验号 挥发油得量
石
石
卜气,门︺门 八︺
营心宁胶囊是我院国家级专家 、 湖北省知名中医杜家经
主任医师经过数十年的临床观察经验研究 , 治疗了大量的冠
白病患者 , 进行多次筛选而确定的一个临床疗效确切的复方
制剂 。 该处方由广霍香 、 川茸 、 积实等中药饮片组成 具有益气
活血 、 化痰通络 、 养脑安神 、 降脂开胃的功效 隋床上用于治疗
臼谎、 月匈痛 、 胸闷气短及各种心律失常 。 营心宁胶囊在我院临
床上已使用 了近 年 然而 随着社会的不断进步 科学技术的不断发展 葛心宁胶囊原有的生产工艺已经落后 须重新修
订才能体现现代中药 “ 三效 ” 、 “ 三小 ” 、 “ 五方便 , 的特点 。 因此 ,
我们对处方中各味药根据是否含有挥发油采取不同的提取方
式 从而使生产工艺更合理 确保营心宁胶囊的疗效与质量 。
本文以挥发油得量为考察指标 采用正交试验法 胧选营心宁
胶囊的挥发油部分提取工艺 , 为进一步优化营心宁胶囊的制
备工艺奠定基础 。
材 料
材料 中药饮片广霍香 、 川茸 、 积实 ,产地分别为广东 、 四
川 、 江西 。 武汉市中医药学基地提供 经我院周才新主任中药
师鉴定为正品 。
仪器 卫 一 型电子天平 梅特勒一托利多仪器有限公
司 惠热套 ,圆底烧瓶 挥发油提取器 二令凝管 量筒 。方法与结果
饮片吸水率的考察 按照处方比例称取广霍香 飞 、 川茸
、 积实 飞 平行取 份 分别用 倍量 、 倍量以及 倍量
冷水浸泡直至饮片全部浸透 即滤出的水未减少为止 。 滤出全
部未被吸收的水液 计算药材的吸水率为 即两倍量 。
表 营心宁胶囊挥发油提取工艺正交试验因素水平表
因素
水平 加水量 倍 浸泡时间 提取时间 空白
刀
」
玫姚弱
表 方差分析结果
方差来源
营心宁胶囊挥发油提取工艺正交实验设计 伪系统考察营
心宁胶囊挥发油提取工艺参数 提高挥发油的得量 选取对挥发油提取影响较大的加水量 、 浸泡时间 、 提取时间
作为考察因素 海个因素设置 个水平 ,以挥发油得量为考察指标 选用 关 正交表设计 因素 、 水平见表 。
营心宁胶囊挥发油的提取 称取处方比例的广霍香 飞 、 川
茸 、 积实 飞 平行取 份 技照正交试验表设计的各因素
水平进行相应的试验 提取挥发油至规定时间 静置 后读
取挥发油量 拭验结果见表 、表 。比较表 中各因素的极差大小 , 可知各因素对挥发油提
取率的影响顺序为 。 由表 方差分析可知 提取时间有
习
习
表示显著因子 住 。
验证试验 取广霍香 飞 、 川茸 飞 、 积实 飞 技上述最佳提取工艺条件进行验证试验 碑吉果挥发油得量平均值为
表明经正交试验优选的挥发油提取工艺稳定可行 。
讨 论
广霍香 、 川茸 、积实为营心宁胶囊处方中含挥发油的饮片 ,
而营心宁胶囊现有的制备工艺中未进行挥发油的收集 , 故本
文作者通过提取并收集挥发油 胧化营心宁胶囊的制备工艺 。
本文采用正交试验设计优化营心宁胶囊中挥发油的提取
工艺 拭验结果表明加入 倍量水 浸泡 提取 挥发油提取量最高 并且考察了 后挥发油得量 尽无明显增加 。
参考文献
「崔金涛 , 许祖建 营心 宁胶囊治 万冠心病心 绞痛的临床观察
湖北中医杂志 , , 一
通讯作者
吴 月娜 , 黄松 , 刘梅 , 赖小平 青天葵 中总游离氨基酸的提取
工艺研究 中国中医药信息杂志 , , 一
刘亮 , 刘英波 , 周英信 , 等 天冬中总氨基酸的水提取工艺研
究 甘肃中医学院学报 , , 一 住
王培培 , 鲁芹飞 , 李猜 , 等 铁皮石解中总氨基酸的含量测定
及提取工艺优选 中国实验方剂学杂志 , , 一