全 文 ：第 31卷第 3期
2008年 6月
云南中医学院学报
JournalofYunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine
Vol. 31No. 3
6.2008
测定灯台叶颗粒中鸭脚树叶碱含量的 HPLC方法研究＊
饶高雄 1■ , 孙　赟1 , 惠婷婷 1 , 龚云麒1 , 朱丽萍2 , 郭　文 2
(1.云南中医学院中药学院 , 云南昆明　650200;2.昆明振华制药厂有限公司 , 云南昆明　650034)
　　摘　要:目的:研究并建立灯台叶颗粒中有效成分鸭脚树叶碱含量分析的 HPLC方法。方法:系统比较检
测波长 、 流动相 、 提取方法等因素对灯台叶颗粒中鸭脚树叶碱含量测定的影响 , 确定最佳分析条件。结果:建
立了符合技术要求的 HPLC分析方法 , 色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂 , 检测波长 287nm, 以甲醇 -0.01%
三乙胺溶液 (50∶50)为流动相。结论:该方法分离效果好 , 灵敏度高 , 专属性强 , 能准确 、 重现的测定灯台叶
颗粒中鸭脚树叶碱的含量 , 可用于灯台叶颗粒产品质量控制。
关键词:灯台叶颗粒;质量控制;鸭脚树叶碱;含量测定;高效液相色谱
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1000— 2723(2008)03— 0009— 04
灯台叶为夹竹桃科植物灯台树 Alstoniascholaris
(L.)R.Bro.的干燥叶片 , 傣医称 “买担别 ” ,
主治 “乃多皇迈唉列习特来 ” (肺热咳嗽痰多)[ 1] ,
是极具地方民族特色的云南傣族药物 。以灯台叶为
原料开发了治疗慢性支气管炎 、咳嗽等呼吸系统疾
病的单方制剂灯台叶颗粒 , 是我省云药现代产业发
展的重点品种之一。
在质量控制方面 , 灯台叶药材执行 《中国药
典 》 1977年版 , 灯台叶颗粒执行卫生部部颁标准
第 14册 (1997年)[ 2 ～ 3] , 基于开发时期的技术要
求 , 质量控制项目及方法均比较简单 , 没有活性成
分的定性和定量指标 , 已不适应现代中药的技术发
展水平 , 有必要开展相关研究以完善质量标准 , 有
效控制质量 , 保证临床用药的安全和有效 。为此 ,
我们系统研究并建立了测定灯台叶颗粒主要有效成
分鸭脚树叶碱 (Picrinine)含量的高效液相色谱
(HPLC)方法。
1　仪器与试剂
岛津 LC-10Avp液相色谱仪 , N2000色谱工
作站 , LunaC-18色谱柱;鸭脚树叶碱对照品为
本课题组从灯台叶中提取分离 , 标定含量为
99.35%[ 4] ;HPLC流动相用色谱纯试剂 , 水用反
渗滤纯化水 , 样品处理均用分析纯试剂 。方法耐用
性试验使用了 Waters1525和 Agilent1100液相色谱
仪 , PurospherStarRp-18e和 ZorbaxEclipseXDB
-C-18色谱柱 。灯台叶颗粒为昆明振华制药厂有
限公司产品 (具体生产批号见表 1)。
2　方法与结果
2.1　分析方法建立及评价
2.1.1　检测方法
鸭脚树叶碱 (图 1)紫外光谱 (图 2)有 3个
吸收带 , 以 287.0nm、 235.5nm的吸收峰较为平缓
且最大吸收波长稳定 , 可用于紫外检测器检测。样
品 HPLC分析以 287.0nm波长检测时杂质干扰较
小 , 因而选择检测波长 287.0nm。
图 1　鸭脚树叶碱的化学结构
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＊基金项目:昆明市科技计划项目 (昆科计字 06S111103)。
收稿日期:2008— 03— 24　　修回日期:2008— 04— 10
作者简介:饶高雄 (1965 ～ ), 男 , 贵州人 , 教授 , 从事中药化学和中药质量标准研究工作。 ■通讯作者:饶高雄 ,
Tel:0871-6212194;E-mail:rao13987124569@qq.com
2008年 云南中医学院学报 第 31卷
2.1.2　色谱柱选择
系统适用性 、方法耐用性研究表明 , 不同厂牌
的耐碱型 C-18柱在选用流动相系统下均有较好
分离效果 , 故选择十八烷基键合硅胶为填充剂的
HPLC色谱柱 。
2.1.3　流动相确定
根据鸭脚树叶碱的理化性质 , 以甲醇 -水 、乙
腈 -水系统进行流动相筛选 , 以甲醇 -0.01%三乙
胺溶液 (50∶50)为流动相 , 在柱温 35℃具有最佳
分离效果 , 鸭脚树叶碱峰保留时间 20.20min, 拖
尾因子 1.049, 理论板数 10344 (图 3);灯台叶颗
粒 HPLC图谱鸭脚树叶碱峰分离度 1.75, 符合
HPLC含量分析方法的技术要求 (图 4)。
2.1.4　专属性试验
在灯台叶颗粒供试液中外加对照品测定 , 色谱
中鸭脚树叶碱吸收峰相对面积增大;以 DAD(二
极管阵列)检测器扫描该吸收峰 , 其紫外光谱和
对照品一致 , 峰纯度 950以上。不含灯台叶药材的
阴性样品无相应吸收峰 , 测定方法具有专属性 。
2.1.5　重复性试验
在上述确定的条件下以对照品溶液连续进样 6
次测定 , 鸭脚树叶碱吸收峰保留时间 、峰面积的
RSD分别为 0.11%、 0.74% (n=6), 符合 HPLC
含量分析方法的技术要求。
2.1.6　稳定性试验
分别制备鸭脚树叶碱对照品溶液 , 灯台叶颗粒
供试品溶液 , 于放置后不同时间测定 , 结果表明对
照品溶液至少在 72h内稳定 (峰面积 RSD=
0.98%, n=7), 供试品溶液至少在 48h内稳定
(峰面积 RSD=1.02%, n=5), 可以满足含量测
定的要求 。
2.1.7　检测限和线性关系
取鸭脚树叶碱对照品用流动相制成约 1mg/mL
的溶液 , 大比例稀释后进样测定其最低检测限为
30ng(S/N=3), 测定方法灵敏。分别取不同浓度
对照品溶液进样测定 , 以进样量和峰面积数据回归
分析 , 在进样量 0.1μg～ 14μg范围内 , 峰面积和
进样量呈良好线性关系 , 回归方程 Y(峰面积)
= 227611＊ X (进样量 , μg) -2299 (r2 =
0.99999, n=6)。
2.1.8　重现性试验
称取同一批号灯台叶颗粒 (20060204)6份 ,
照上述方法平行处理后测定鸭脚树叶碱的含量 , 6
份样品含量测定值的 RSD=1.32%, 测定方法重现
性符合要求。
2.1.9　加样回收试验
取已测定含量的灯台叶颗粒 (20060204,
0.107mg/g)共 9份分为 3组 , 分别按照相当于样
品含量 80%, 100%, 120%的量加入鸭脚树叶碱 ,
按照上述方法测定含量并计算回收率。结果表明 ,
回收率在 97.0% ～ 100.2%之间 (RSD=1.43%, n
=9), 平均回收率为 98.6%, 加入的对照品能准
确 、 重现的回收 , 测定方法准确可靠。
2.2　样品溶液制备及分析
2.2.1　样品溶液制备
鸭脚树叶碱为脂溶性弱碱可溶于有机溶剂 , 本
品为颗粒剂可溶化于水 , 综合考虑后进行了有机溶
剂提取 、 水溶化后有机溶剂萃取等方法的比较 , 以
水溶化后调节 pH=8再用氯仿萃取最佳 , 具体方
法为:精密称灯台叶颗粒 5g, 加 25mL水溶化 , 以
5%氨水调 pH=8, 置分液漏斗中以 50mL氯仿分 3
次萃取 , 合并氯仿液 , 蒸干 , 残渣用流动相溶解并
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第 3期 饶高雄 , 等:测定灯台叶颗粒中鸭脚树叶碱含量的 HPLC方法研究　　　　　　　　 　
转移至 10mL量瓶中 , 稀释至刻度 , 摇匀 , 即得 。
2.2.2　测定法
根据上述研究确定的方法制备样品溶液 , 按照
确定的色谱条件 , 分别精密吸取对照品溶液与供试
品溶液各 20μL, 注入液相色谱仪 , 测定 , 即得 。
2.2.3　样品分析结果
昆明振华制药厂有限公司生产的 21批灯台叶
颗粒产品 , 在有效期内用上述研究确定的 HPLC方
法测定鸭脚树叶碱的含量 , 结果如表 1。
表 1　不同生产批号灯台叶颗粒中
鸭脚树叶碱的含量 (mg/g)
产品批号 含量 产品批号 含量 产品批号 含量
20050107 0.094 20060103 0.100 20070306 0.111
20050206 0.096 20060204 0.105 20070404 0.112
20050207 0.096 20060302 0.107 20070503 0.104
20050302 0.112 20060602 0.090 20070505 0.097
20050802 0.120 20060604 0.102 20070507 0.101
20050901 0.073 20060606 0.095 20071001 0.093
20051107 0.072 20060608 0.080 20071003 0.105
2.3　制剂含量限度确定
在有效期内测定 2005 ～ 2007年间生产的灯台
叶颗粒共 21批次 , 其鸭脚树叶碱含量在 0.072 ～
0.120mg/g之间 , 平均含量为 0.098mg/g。根据目
前中药制剂质量控制的实际情况 , 有效成分设含量
下限较恰当 , 规定灯台叶颗粒中鸭脚树叶碱含量不
低于 0.080mg/g。
2.4　分析方法耐用性验证
2.4.1　流速变动
保持柱子 、柱温 、 检测波长 、流动相组成等条
件不变 , 改变流速测定 , 结果表明 , 流速变动在 ±
20%范围内 , 该分析方法仍可准确测定 (表 2)。
2.4.2　柱温变动
保持柱子 、检测波长 、 流动相组成 、流速等条
件不变 , 改变柱温测定 , 结果表明 , 柱温变动在 ±
2℃范围内 , 该分析方法仍可准确测定 (表 2)。
2.4.3　波长变动
保持柱子 、柱温 、 流动相组成 、流速等条件不
变 , 改变检测波长测定 , 结果表明 , 检测波长变动
在 ±2nm范围内 , 该分析方法仍可准确测定 (表
3)。
表 2　流速和柱温变动对灯台叶颗粒中鸭脚树叶碱含量测定的影响
测定情况 流速变动 柱温变动
变量数据 0.8mL/min 1.0mL/min 1.2mL/min 33℃ 35℃ 37℃
拖尾因子 1.049 1.028 1.029 1.055 1.033 1.029
理论板数 11019 8523 8209 9572 8523 8430
含量 mg/g 0.107 0.107 0.108 0.108 0.107 0.108
2.4.4　流动相变动
保持柱子 、 柱温 、 检测波长 、 流速等条件不
变 , 改变流动相比例测定 , 结果表明 , 流动相比例
在 ±3%改变范围内 , 该分析方法仍可准确测定
(表 3)。
表 3　检测波长和流动相变动对灯台叶颗粒中
鸭脚树叶碱含量测定的影响
测定情况 检测波长变动 流动相比例变动
变量数据 284nm 287nm 290nm 47∶53 50∶50 53∶47
拖尾因子 1.039 1.028 1.048 1.023 1.028 1.067
理论板数 9968 8523 9856 9397 8523 9931
含量 mg/g 0.106 0.107 0.107 0.108 0.107 0.106
2.4.5　不同仪器和色谱柱测定
上述研究用岛津 LC-10AvP液相色谱仪完成 ,
为进一步验证分析方法耐用性 , 按照确定的分析条
件在 Agilent1100液相色谱仪 (用 ChemStation工
作站 , ZorbaxEclipseXDB-C-18色谱柱)、 Wa-
ters1525液相色谱仪 (用 Breeze工作站 , Purospher
StarRp-18e色谱柱)上进行方法验证测定 。结果
表明该方法在不同厂牌的液相色谱仪上 、用不同厂
牌的色谱柱测定结果一致 , 对分析仪器和色谱柱具
有较广泛的适应性 , 耐用性好。
3　结果与讨论
针对中药有效成分建立比较客观 、 科学的含量
测定指标 , 提高和完善质量标准 , 是中药现代化的
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2008年 云南中医学院学报 第 31卷
重要工作。 HPLC对中药复杂成分系统具有较好的
分离效果 , 已广泛用于中药质量分析 。灯台叶颗粒
是我省特色民族药 , 拥有提取方法的发明专利 , 又
是中药保护品种 , 进一步开展研究并形成新的知识
产权保护 , 是保持我省在灯台叶资源开发方面技术
优势的重要工作 。
通过系统的对比研究 , 我们建立了测定灯台叶
颗粒中主要有效成分鸭脚树叶碱含量的 HPLC方
法:①色谱条件:色谱柱以十八烷基键合硅胶为填
充剂 , 检测波长 287nm, 以甲醇 -0.01%三乙胺溶
液 (50 :50)为流动相。 ②溶液制备:精密称取
灯台叶颗粒 5g加 25mL水溶化 , 加 5%氨水调 pH
=8, 以 50mL氯仿分三次萃取 , 合并氯仿液蒸干 ,
残渣用流动相溶解并定容至 10mL;另取鸭脚树叶
碱对照品加流动相制成每 1mL含 50μg的溶液 。③
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各
20μL, 注入液相色谱仪 , 测定 , 计算 , 即得。
该方法分离效果好 , 灵敏度高 , 专属性强 , 能
准确 、重现的测定灯台叶颗粒中鸭脚树叶碱的含
量 , 已应用于灯台叶颗粒产品的质量标准和生产实
际控制。分析方法的建立对有效控制灯台叶颗粒药
品质量 , 保障用药安全 、有效提供了质量监控的技
术手段。
[参考文献 ]
[ 1] 林艳芳 , 依 　专 , 赵应红.中国傣医药彩色图谱
[ M] .昆明:云南民族出版社 , 2003.303-306.
[ 2] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国
药典 (一部) [ S] .北京:化学工业出版社 , 1977.
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卫生部药品标准 (中药成方制剂第 14册) [ S] .北
京:化学工业出版社 , 1997.49 (灯台叶颗粒).
[ 4] 孙　赟 , 惠婷婷 , 朱丽萍 , 等.灯台叶中鸭脚树叶碱
化学对照品的制备 [ J] .云南中医学院学报 , 2007,
30 (6):1-4.
(编辑:岳胜难)
StudiesontheHPLCMethodforPicrinineDeterminationofDengtai-YeGranule
RAOGao-xiong1 , SUNYun1 , HUITing-ting1 ,
GONGYun-qi1 , ZHULi-ping2 , GUOWen2
(1.YunnanUniversityofTCM, KunmingYunnan650200;
2.KunmingZhenhuaPharmaceuticalFactory, KunmingYunnan650034)
ABSTRACT:Objective:TostudyandestablishtheHPLCmethodforpicrininedeterminationofDengtai-Ye
Granule.Methods:TheinfluencefactorsforpicrininedeterminationofDengtai-YeGranulebyHPLC, suchasde-
tectingwavelength, mobilephase, extractionmethod, etal, havebeenstudiedandcomparedindetail.Results:
TheHPLCmensuration, uptotherequisitetechniquestandardwasestablished.TheanalysiscourseusedtheC-
18 columnastheimmovablephaseandamixtureofmethanol-0.01% triethylaminesolution(50∶50)asthemo-
bilephase.PicrininewasdeterminedwithaUVdetectorat287nm.Conclusion:TheresultsshowedthisHPLC
methodforpicrininedeterminationofDengTai-YeGranulewassensitive, exclusive, accurateandrepeatable.It
hasbeenusedforthequalitycontroloftheDengTai-YeGranule.
KEYWORDS:DengTai-YeGranule;Qualitycontrol;Picrinine;Determination;HPLC
热烈祝贺云南中医学院在教育部组织的本科
教学工作水平评估中获得优秀 !
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