全 文 ：第 32 卷第 6 期
2013 年 12 月
中 国 野 生 植 物 资 源
Chinese Wild Plant Ｒesources
Vol． 32 No． 6
Dec． 2013
收稿日期:2013 － 04 － 18
基金项目:安徽省自然科学基金项目(090413113 );安徽高校省级自然科学研究重点项目(KJ2009A165)
作者简介:陈乃富(1962 －)，男，教授，主要从事植物生化和植物资源开发与利用研究。
doi:10． 3969 / j． issn． 1006 － 9690． 2013． 06． 003
蕨菜乙醇提取物的 Ames试验研究
陈乃富，谷仿丽，陈乃东，戴 军
(皖西学院 生物与制药工程学院，安徽 六安 237012)
摘 要 目的:研究蕨菜乙醇提取物的致突变作用，为蕨菜的开发利用提供一定依据;方法:制备蕨菜乙醇提取物，
采用 Ames 试验方法，以 50μg /皿敌克松作为诱变剂，分别添加提取物 50、100、200、400、800μg /皿，统计回变菌落
数;结果:受试物各剂量组回变菌落数均未超过自发回变菌落数的 2 倍，且无剂量 －反应关系;结论:在本实验条件
下，蕨菜乙醇提取物无致突变作用。
关键词 蕨菜;乙醇提取物; Ames试验;致突变
中图分类号:Ｒ282 文献标识码:A 文章编号:1006 － 9690(2013)06 － 0007 － 03
The Ames Test of Ethanol Extract from Pteridium aquilinum
Chen Naifu，Gu Fangli，Chen Naidong，Dai Jun
(College of Biological and Pharmaceutical Engineering，West Anhui University，Lu’an 237012，China)
Abstract Objective:To study the mutagenicity effect of ethanol extract from Pteridium aquilinum，so
as to provide some help for development and utilization of the natural resource Pteridium aquilinum．
Methods:To use ethanol extract from Pteridium aquilinum and adopt Ames test． Dexon in 50 μg /dish
was chosen as a mutagen，respectively add 50，100，200，400，800 μg /dish extract，and statisticalling
revertant colonies． Ｒesults:The number of revertant colonies was no more than twice of that of spontane-
ous colonies for each dosage group and there was no dose-response relationship existed． Conclusion:
Ethanol extract from Pteridium aquilinum had no mutagenicity in this test．
Key words Pteridium aquilinum;ethanol extract;Ames test;mutagenicity
蕨菜是采自蕨科蕨属中蕨(Pteridium aquilinum
L．)的幼嫩叶，已有研究表明蕨菜乙醇提取物中黄
酮类化合物含量较高，可达干蕨菜粉的 7． 28%［1］，
且具有抗氧化、调节血脂等作用［1 － 4］。但目前关于
该提取物的致突变研究未见报道。为此，我们用改
良的 Ames试验对蕨菜乙醇提取物的致突变进行研
究，以判断其是否具有致突变作用，为蕨菜的开发利
用提供一定的试验依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 仪器 旋转式蒸发器、TU1201 分光光度计、
高速冷冻离心机、液氮罐、高压灭菌锅、振荡培养箱、
恒温培养箱、电子天平、微量注射器、常用接种工具、
培养皿及常用玻璃仪器。
1． 1． 2 试剂 牛肉膏、混合蛋白胨、D －生物素、L
－组氨酸、氨苄青霉素、结晶紫、四环素、二甲基亚砜
(DMSO)、辅酶 －Ⅱ、葡萄糖 － 6 － 磷酸钠盐、玉米
油、敌克松(Dexon)、2 －乙酰氨基芴(2 － AF)及相
关常用试剂等。
1． 1． 3 受试物 蕨菜乙醇提取物，本实验室自制，
冰箱冷藏。
1． 1． 4 菌株 鼠伤寒沙门氏菌突变型菌株 TA97、
TA98 、TA100、TA102 由安徽医科大学毒理学实验
室提供。因突变型菌的某些特性易丢失或变异，因
此，在使用前按照文献［5］中方法进行鉴定，4 种菌株
鉴定结果均合格。
1． 2 实验方法
1． 2． 1 受试物的制备和组氨酸含量测定 ①受试
物的制备:蕨菜干粉经乙醚脱脂后，用 70%乙醇、
—7—
中 国 野 生 植 物 资 源 第 32 卷
80℃、料液比 1:15 提取两次，合并滤液，回收乙醇，
得深褐色浆状物。②受试物中组氨酸含量测定:本
实验所用菌株为组氨酸缺陷型，要求根据受试物系
中是否含组氨酸来确定是否设定组氨酸对照组。按
照文献［6］方法测得受试物中不含组氨酸量，因此，
本实验无需设组氨酸对照组。
1． 2． 2 活化系统( S9 和 S9 混合液) 的制备
［7 － 8］
①大鼠肝 S9 的诱导和制备:健康雄性 SD大鼠，体重
150 g左右，鼠龄约 5 ～ 6 周。将 β －萘黄酮、注射用
苯巴比妥钠溶于玉米油中，浓度为 200 mg·mL －1，按
500 mg·kg －11 次腹腔注射，5 天后断头处死动物，取
出肝脏，滤纸吸干表面液体，称重后，用新鲜冰冷的
0． 15 mol /L 氯化钾溶液连续冲洗肝脏数次，每 1 g
肝(湿重)加 0． 1 mol /L 氯化钾溶液 3 mL，连同烧杯
移入冰浴中，用消毒剪刀剪碎肝脏，组织匀浆器
(20 000 r /min，1 min)中制成肝匀浆。以上操作均
在无菌和局部低温环境中进行。将制成的肝匀浆在
低温(0 ～ 4℃)高速离心机上以 12 000 r /min 离心
10 min，吸出上清液为 S9组分，分装后液氮保存。②
S9 肝液中的蛋白含量测定:根据 Lowry 法测 S9 肝液
中的蛋白含量。将①制备中 S9 肝液稀释 100 倍后
测定其蛋白质含量为 0． 111 mg /mL，符合实验要
求［5］。③10% S9 混合液由 S9 液和辅助因子(S9 混
合液试剂)组成。
1． 2． 3 鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验 ( Ames 试
验) ( 平板渗入法) ［5］ ①分组:实验分为加 S9 与不
加 S92 大类。每个类别中又将受试物分为 5 个剂量
组，设阴性对照(自发回变)、溶剂对照以及阳性对
照 3 个对照组，每个组别设 3 个平行皿进行同步实
验。阴性对照(自发回变)组只在培养基上加菌液，
溶剂对照组为添加二甲基亚砜(DMSO)，不加 S9 的
阳性对照物为敌克松(Dexon)，加 S9 的阳性对照物
为 2 －乙酰氨基芴(2 － AF)。5 个剂量组分别为每
皿 50、100 、200 、400 、800 μg 受试物。具体操作为
将受试物溶于顶层培养基中，放入 45 ℃恒温水浴保
温，再依次加入测试菌株新鲜菌液 0． 1 mL、S9 混合
液 0． 25 mL，混匀，迅速倾入底层培养基上，使之均
匀分布在底层培养基上，平放固化。②培养条件和
数据统计:接种固化后的平皿置于 37℃下的恒温箱
培养 48 h，计每皿菌落数。整个试验重复 2 次。
1． 3 统计学方法
结果用 X ± S表示，采用 SAS 9． 0 软件进行方差
统计分析。
2 结果与分析
两次试验结果统计如下，见表 1，随着受试物剂
量的增加，突变菌落数随之增加，但受试物各剂量组
的回变菌落数均未超过阴性对照(自发回变)菌落数
的 2倍，且无剂量 －反应关系，说明不论加与不加 S9，
受试物对鼠伤寒沙门菌 TA97、TA98、TA100、TA102四
株试验菌株均未呈现致突变性［9］。而阳性对照组
各菌株回变菌落平均数均超过其相应阴性对照组回
变菌落平均数的 2 倍以上，证实鼠伤寒沙门氏菌的
组氨酸营养缺陷型突变菌株对受试物的检测有效。
本实验结果说明蕨菜乙醇提取物无致突变作用。
表 1 蕨菜乙醇提取物的 Ames试验菌株的回变结果(X ± S)
分组
(μg /dish)
结 果
TA97 TA98 TA100 TA102
－ S9 + S9 － S9 + S9 － S9 + S9 － S9 + S9
50 28 ± 5． 31 99 ± 11． 52 36 ± 2． 51 38 ± 9． 53 96 ± 11． 52 88 ± 14． 30 122 ± 18． 50 238 ± 29． 33
100 85 ± 10． 60 112 ± 13． 07 58 ± 12． 33 53 ± 13． 32 118 ± 12． 58 181 ± 10． 20 253 ± 16． 21 252 ± 25． 43
200 97 ± 12． 58 168 ± 19． 95 46 ± 10． 35 49 ± 10． 38 143 ± 13． 57 221 ± 26． 36 195 ± 36． 77 279 ± 28． 11
400 105 ± 13． 00 193 ± 28． 33 53 ± 12． 00 58 ± 5． 56 168 ± 22． 65 168 ± 13． 89 266 ± 23． 65 298 ± 18． 14
800 113 ± 15． 58 253 ± 18． 51 48 ± 14． 16 62 ± 2． 64 135 ± 17． 89 213 ± 15． 88 188 ± 25． 70 421 ± 27． 57
Negative control 146 ± 14． 88 178 ± 19． 45 50 ± 12． 11 72 ± 4． 93 144 ± 15． 73 201 ± 19． 16 287 ± 17． 61 443 ± 27． 52
DMSO 141 ± 18． 35 186 ± 16． 52 56 ± 10． 33 62 ± 2． 64 161 ± 14． 57 219 ± 21． 04 284 ± 30． 26 388 ± 21． 50
2 － AF 1 215 ± 25． 60* 2 332 ± 32． 31* 2 103 ± 35． 13* 642 ± 58． 04
Dexon 1 012 ± 33． 56* 915 ± 60． 25* 495 ± 7． 54* 1 105 ± 43． 20*
Note:Dexon 50 μg /dish，2 － AF 10 μg /dish。* Ames test positive P ＜ 0． 01
3 讨 论
Ames试验是由 Ames 在 1975 年建立的鼠伤寒
沙门氏菌回复突变试验，是一种已被公认并广泛采
纳的致突变鉴定方法［8］。蕨采乙醇提取物中的主
要有效成分为黄酮类化合物，对细胞氧化系统有一
定的保护作用［1，3 － 4］，提示其有一定的开发价值，但
无论是保健品还是药品开发，其安全性评价是非常
重要的。本实验研究表明蕨菜乙醇提取物在一定的
剂量范围内不具有致突变作用，有着进一步深入研
—8—
第 6 期 陈乃富，等:蕨菜乙醇提取物的 Ames试验研究
究和开发的价值。
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302 － 304．
·小 知 识·
戈宝红麻
戈宝红麻(GAUBAU KENDEＲ)是罗布红麻(Apocynum venetum Linn．)中的极品。罗布红麻，唐代《新修
本草》、明代《救荒本草》称“泽漆”，《中国植物志》和《中华人民共和国药典》称“罗布麻”［(红麻)Apocynum
venetum Linn．］，是多年生宿根草本植物，宿根正常可存活 30 年左右，根系发达，新旧水平根每年都萌发新
株，连绵不绝，是美化荒漠最好的生态植物和功效显著的绿色养生植物。20 世纪 50 年代前，在中国西北至
东北 10 多个省均有大量分布。1958 年后，由于政策变化、人为破坏、研发不到位、气候恶化等原因，导致罗
布红麻到 2003 年除北疆阿勒泰阿拉哈克戈壁和艾比湖自然保护区内、罗布泊西北方向的兴地峡谷等地幸存
少量外，其余地区基本毁灭，戈壁珍宝惨遭遗弃。
花田纺织时装有限公司董事长刘起棠的人生价值观是:“获得衣食住行丰足，应以多积功德为乐。”因
此，被誉为“麻疯子”的刘起棠先生于 2002 年选择了到新疆拯救濒临灭绝的戈宝红麻。历经艰辛，先后建立
了罗布红麻兴地基因库、罗布红麻阿拉洪村培植试验地、中国首个阿勒泰戈宝麻研发基地、世界唯一的阿勒
泰戈宝麻保护区、并实行了前人未做过的“戈宝麻大规模优化仿生种植”，该项投资亿元面积 5 万亩的“拯救
戈宝麻 荒漠变绿洲”工程是直接帮助当地农牧民脱贫、带动当地经济持续发展的利国利民项目。此义举，赢
得政府相关部门和相关科研院所权威专家的大力支持。
戈宝红麻由于生长在全球距海岸最远的北疆阿勒泰阿拉哈克东戈壁，当地紫外线辐射强度常在 5 级，日
照时间最长超过 16 小时，气温最高摄氏 41 度、气温最低摄氏零下 45 度，风力最高 12 级，阿尔泰山脉冰水丰
富，砂土中富含多种对人体有益的微量元素，因此，在极端特殊的地理条件下，使戈宝红麻产生更多与抗逆相
关的活性成分，其有效黄酮成分是《中华人民共和国药典》的罗布麻［(红麻)Apocynum venetum Linn．］标准 3
倍以上，所以“阿勒泰戈宝麻保护区内的戈宝红麻被认定为极品罗布红麻”。
戈宝红麻目前野生年产量:干叶 20 吨不到冬虫夏草的三分之一、可纺纤维 0． 5 吨不到钻石的六分之一，
它不但神奇珍稀，更重要的是具有独特的天然养生功效:
叶(制养生食品):清脂降压、解郁安神、增强免疫、延缓衰老、配菜吃好;
纤维(做养生服饰):抗紫外线、冬暖夏凉、透气护肤、抑菌除臭、促进代谢。
埋没千年、远离污染的戈壁珍宝———戈宝红麻，是 21 世纪绿色养生殿堂中璀璨的明珠!
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